הזרקות תוך שריריות לאורך לוחות הקצה המוטוריים כדי להעביר עוקבים ישירות לתאי עצב מוטוריים של חולדות

תקציר

מקור: Mohan, R., et al. זריקות תוך שריריות לאורך לוחות הקצה המוטוריים: גישה זעיר פולשנית להעברת עוקבים ישירות לנוירונים מוטוריים. J. Vis. Exp. (2015)

סרטון זה מדגים את המסירה הממוקדת של עוקב עצבי פלואורסצנטי לנוירונים מוטוריים באמצעות הזרקה תוך שרירית בלוחות הקצה המוטוריים (MEPs). הוא מתאר את השלבים הכרוכים בהכנת החולדה, הזרקת העוקב והערכת נוירונים מוטוריים מסומנים לפוטנציאל נוירותרפי.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. זריקות תוך שריריות בלוחות הקצה המוטוריים

1. משוך מיקרופיפטות זכוכית עם מושך מיקרופיפטות (מומלץ להשתמש במיקרופיפטות מדורגות עם בוכנות). בעזרת מיקרוסקופ מנתח שוברים את קצות המיקרופיפטות בעזרת זוג מלקחיים כך שהקוטר הפנימי של לומן המיקרופיפטה הוא כ- 0.5 מ"מ.
2. ודא שכל המכשירים הכירורגיים המשמשים הם חיטוי טרי ושאזור הניתוח סטרילי.
3. מלאו את המיקרופיפטות בפלואורו-זהב (5% במים מזוקקים).
4. לגרום להרדמה בבעל החיים באמצעות איזופלורן (4% ב-O₂) בתא אינדוקציה. בדוק אם יש רפלקס יישור וודא את היעדרו לפני הוצאתו מתא האינדוקציה. אבטח חרוט אף מעל חוטם החולדה והעביר איזופלורן (2% ב-O₂) לשמירה על ההרדמה. צבטו את אצבעות הרגליים של החיה וגעו בעדינות בעין החיה כדי לוודא שגם נסיגת הדוושה וגם הרפלקסים של הקרנית נעדרים.
   הערה: ניתן להשתמש גם בתערובת של קטמין וקסילזין (80 ו-10 מ"ג/ק"ג, בהתאמה, מועברים תוך צפקית). קטמין הוא תרופה בלוח 8 ("מבוקר"), ויש להקפיד על הפרוטוקולים הדרושים הקשורים לרכישה, שימוש, אחסון וסילוק התרופה.
5. מרחו חומר סיכה לעיניים כדי למנוע ייבוש של העיניים במהלך ההליך.
6. גלח את הגפה הממוקדת והשתמש בגזה כדי לנגב את האזור המגולח בשלושה קרצוף לסירוגין של כלורהקסידין ו-70% אלכוהול. העבר את החיה לאזור הניתוח.
7. הנח את החיה על משטח תחתון נקי ומקם אותה כראוי כדי להבטיח גישה טובה לשרירים/ים הממוקדים.
8. השתמש בזוג מלקחיים עם אחיזת שיניים כדי להרים את העור מעל השריר הממוקד הרחק מהשרירים הבסיסיים ולבצע חתך בעור בעזרת מספריים כירורגיים. ודא שהחתך גדול מספיק כדי לחשוף לחלוטין את השרירים המעניינים. ודא שיש הפרעה מינימלית לפאשיה.
9. השתמש בתצלומי לוחית הקצה המוטורית (MEP) כדי להעביר מנטלית את המיקום והצורה של אזור ה-MEP על השרירים.
   הערה: סמן לבד עדין יכול לסייע בשחזור אזור ה-MEP מהתצלום אל השרירים המעניינים.
10. בצע מספר זריקות לכל אורך אזור ה-MEP (עבור פלואורו-זהב, 3 עד 4 זריקות של 1-2 מיקרוליטר כל אחת אמורות להספיק). נגב בעדינות את השרירים כדי להסיר חלחול.
11. קרבו את שני קצוות העור החתוך זה לזה בעזרת מלקחיים קהים וסגרו את הפצע בעזרת קליפסים כירורגיים. יש להחדיר 0.1 מ"ל בופיבקאין (0.5% במים) (או חומרי הרדמה מקומיים אחרים) לאורך כל טווח הפצע.
12. כבה את מכונת ההרדמה ופקח על החיה עד שהיא תתאושש לחלוטין מההרדמה.
13. המתן 14 יום בין מתן זריקות תוך שריריות לזלוף של בעלי החיים.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Fluoro-Gold	Fluorochrome, LLC	Nil	מדולל ל-5%
Drummond PCR Micropipets 1-10 μl	Drummond Scientific	5-000-1001-X10	מלווה בבוכנות
Isothesia	Provet	ISOF00	1000 מ"ג/גרם אדי אינהלציה
איזופלורן אוטוקליפ 9 מ"מ קליפס פצע	Texas Scientific Instruments, LLC	205016