הזרקה תוך גולגולתית של מטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים במודל עכבר

תקציר

מקור: Liou, C. et al. אספקה תוך מוחית של מטבוליטים מיקרוביאליים שמקורם במעיים בעכברים הנעים בחופשיות. J. Vis. Exp. (2022).

סרטון זה מדגים את ההזרקה התוך-גולגולתית של חומצות שומן קצרות שרשרת (SCFA) בעכבר הנע בחופשיות כדי לחקור את השפעותיהן על התנהגות בתיווך המוח. צינורית מזרק מוחדרת לתוך צינורית מנחה המושתלת במוח העכבר. לאחר ההחלמה, העכבר מתאקלם בכלוב חדש. לאחר מכן ניתנים SCFAs, והתנהגות תנועתית נרשמת.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. הכנה לחיית הניסוי

1. השג עכברים זכרים בני 6-8 שבועות מסוג C57BL/6JNarl ממוכר.
2. שכן את העכברים בכלוב עכברים רגיל עם צ'או עכבר סטנדרטי ומים מעוקרים אד ליביטום.
   הערה: תנאי הדיור של מרכז חיות המעבדה הם טמפרטורת 22 ± 1 מעלות צלזיוס, 55% ± 10% לחות ומחזור אור/חושך של 13 שעות/11 שעות.

2. ניתוח סטריאוטקסי

1. הכן ועקר את המכשיר הסטריאוטקסי, המכשירים הכירורגיים ופריטים נלווים.
   הערה: יש לעקר את כל הפריטים שיגעו ישירות לאתר הניתוח כדי למ....

תוצאות

איור 1: השתלת צינורית המדריך המסחרית בעכברים. (א) תמונה מייצגת של צינורית מדריך מסחרית, בובה ומזרק. (B) התמונה המייצגת של צינורית ודמה מסחרית שהושתלו במוחם של עכברים על ידי קיבוע עם אקריליק דנטלי.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Material
Advil Liqui-Gels מסיס איבופרופן A2:D41	Pfizer	n/a
מסנן ואקום עליון לבקבוק, 500 מ"ל, 0.22 מיקרומטר, PES, NEST		סטרילי121921LA01
CaCl₂	Sigma-Aldrich	C1016	ACSF: 0.14 גרם/ליטר
פילינג כלורהקסידין 2%	Phoenix	NDC 57319-611-09
תמיסת כלורהקסידין	פניקס	NDC 57319-599-09
דמה מסחרית	RWD Life Science	62004	Single_OD 0.20 מ"מ / M3.5 / G = 0.5 מ"מ
קנול מדריך מסחרי	RWD Life Science	62104	Single_OD 0.41 מ"מ-27G/ M3.5/C = 2.5 מ"מ
מזרק מסחרי	RWD Life Science	62204	Single_OD 0.21 מ"מ-33G/ חברים עם M3.5/C = 3.5 מ"מ/G = 0.5 מ"מ
D-(+)-גלוקוז	סיגמא-אולדריץ'	G8270	ACSF: 0.61 גרם/ליטר
אקריליק דנטלי	היגייני	n/a
ברגי קיבוע	RWD מדעי החיים	62521
סרום סוסים	ThermoFisher Scientific	16050130
מזרקי אינסולין	BBraun	XG-LBB-9151133S-1BX	1 מ"ל
Isoflurane	Panion & BF biotech	DG-4900-250D
KCl	Sigma-Aldrich	P3911	ACSF: 0.19 גרם/ליטר
קטופרופן	שוויצרי פרמצבטי	n/a
לידוקאין	AstraZeneca	n/a
נקודת התכה נמוכה agarose	Invitrogen	16520
MgCl₂	Sigma-Aldrich	M8266	ACSF: 0.19 גרם/ליטר
שקופיות מיקרוסקופ	ThermoFisher Scientific	4951PLUS-001E
שמן מינרלי קל, לבן NF	Macron Fine Chemicals	MA-6358-04
NaCl	Sigma-Aldrich	S9888	ACSF: 7.46 גרם/ליטר
NaH₂PO₄	Sigma-Aldrich	S8282	ACSF: 0.18 גרם/ליטר
NaHCO₃	Sigma-Aldrich	S5761	ACSF: 1.76 גרם/ליטר
דבק n-בוטיל ציאנואקרילט (דבק דבק רקמות)	3M	1469SB	3M Vetbond
Neural tracer	Santa Cruz	SC-358883	FluoroGold
Paraformaldehyde	Sigma-Aldrich	P6148
צינור פוליאתילן	RWD מדעי החיים	62329	OD 1.50, תעודת זהות 0.50 מ"מ ו-OD 1.09, תעודת זהות 0.38 מ"מ
Puralube Vet (עין) משחה	Dechra	12920060
נתרן אצטט	Sigma-Aldrich	S2889	SCFAs: 13.5 מ"מ
נתרן אזיד	Sigma-Aldrich	S2002
נתרן בוטיראט	סיגמא-אולדריץ'	B5887	SCFAs: 8 מ"מ
נתרן פרופיונאט	סיגמא-אולדריץ'	P1880	SCFAs: 5.18 מ"מ
צינורית מדריך אל חלד	Chun Ta נירוסטה ארגונית ושות', בע"מ.	n/a	OD 0.63 מ"מ; ספק מקומי
מזרק אל חלד	Chun Ta מפעל נירוסטה ושות', בע"מ	n/a	OD 0.3 מ"מ; דמה עשויה ממזרק; הספק המקומי
Superglue	Krazy Glue	KG94548R
Triton X-100	Merck	1.08603.1000
מחזיק צינורית
מכשירים סטריאוטקסיים דיגיטליים	Stoelting	51730D
מיקרוסקופ חיתוך	INNOVIEW	SEM-HT/TW
מעקר חרוזי זכוכית	RWD מדעי החיים	RS1501
כרית חימום	Stoelting	53800M
מיקרו מלקחיים לניתוח	ROBOZ	RS-5136	עקומה משוננת, קלה; עדין במיוחד; רוחב קצה 0.5 מ"מ;
מספריים מיקרו חיתוך	ROBOZ	RS-5918	4.5 אינץ' בקר
מיקרו-הזרקה	מכשירי דיוק עולמיים (WPI)	MICRO2T	SMARTouch בקר
משאבת מזרק מיקרו-הזרקה	מכשירים מדויקים בעולם (WPI)	UMP3T-1	UltraMicroPump3
מזרק מיקרוליטר	המילטון	80014	10 מיקרוליטר
סיבים אופטיים אור קר עם סיבים כפולים	צעד	LGY-150	ספק מקומי
גוזם חיות מחמד	WAHL	09962-2018
תוכנה
התנהגות בעלי חיים תוכנת מעקב וידאו	Noldus	EthoVision	גרסה: 15.0.1416

ציוד RWD Life Science B485-68217 מצלמת תקרה FOSCAM R2 באורך 4 אינץ' חד זוויתי