הערכת ההשפעות הנוירו-פרוטקטיביות של תרכובת בדיקה במודל עכבר חסימת עורק מוחי אמצעי

תקציר

מקור: Lee, S. E., et al. הערכת ההשפעות הנוירו-פרוטקטיביות של תמצית Glycyrrhizae Radix et Rhizoma באמצעות מודל עכבר חולף של חסימת עורק המוח האמצעי. J. Vis. Exp. (2018)

סרטון זה מדגים את ההליך להערכת ההשפעה הנוירו-פרוטקטיבית של תרכובת בדיקה במודל עכבר חסימת עורק המוח האמצעי. התרכובת נכנסת למוח, מונעת מוות עצבי ומפחיתה את נפח האוטם, ומאשרת את השפעתו הנוירו-פרוטקטיבית בהשוואה לעכבר לא מטופל.

פרוטוקול

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. דגם עכבר של חסימת עורק המוח האמצעי (MCAO)

1. השתמש בעכברים זכרים C57BL/6 בני 6 שבועות ובמשקל 22-25 גרם. ספק לכל בעלי החיים גישה חופשית לצ'או ומים סטנדרטיים, ושכן אותם בסביבה עם טמפרטורה מבוקרת (22 ±1 מעלות צלזיוס) ומחזור אור/חושך של 12 שעות.
   1. חלקו את העכברים לקבוצות של שישה עכברים כל אחת, שצריכות להיות מורכבות מקבוצות טיפול רגילות, ביקורת ו-Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRex).
   2. לבצע ניתוח MCAO בקבוצות הביקורת והטיפול ב-GRex באמצעות מיקרוסקופ סטריאו.
2. לגרום להרדמה באינהלציה בעכברים באמצעות 2% איזופלורן ב-70% תחמוצת החנקן (N₂O) ו-30% חמצן (O₂). הרדמה נחשבת מספיקה כאשר העכבר אינו מגיב לגירוי מכני המופעל על זנבו. שמרו על טמפרטורת הגוף של העכברים על 36.5 ±-0.5 מעלות צלזיוס באמצעות שמיכה המחזיקה את טמפרטורת הגוף המחוברת למדחום.
3. הסר את כל השיער על החזה והצוואר של העכברים על ידי גילוח, ולאחר מכן שימוש בקרם להסרת שיער. יש לחטא את אזור העור הניתוחי עם קרצוף בטדין לסירוגין עם אלכוהול פעמיים, ולאחר מכן לבצע חתך באורך של כ -2 ס"מ עם להב כירורגי במרכז הצוואר. בודד בזהירות את עורק הצוואר המשותף השמאלי (LCCA), עורק הצוואר החיצוני והענף של עורק הצוואר הפנימי מרקמות החיבור שמסביב.
4. קשרו את עורק הצוואר החיצוני ואת עורק הצוואר המשותף עם תפר כירורגי (4-0 תפר משי, חצי קשר תקלה) כדי לחסום זמנית את זרימת הדם לעורק הצוואר הפנימי במהלך הניתוח.
5. הכנס תפר ניילון מצופה סיליקון (מונופילמנט 8-0, אורך 11 מ"מ) דרך עורק הצוואר הפנימי למקור ה-MCA השמאלי. התאם את עובי החלק המצופה סיליקון של החוט לטווח של 0.10-0.12 מ"מ.
6. מדוד את הירידה בזרימת הדם היחסית במוח (rCBF) ב-MCA באמצעות מד זרימה דופלר לייזר. MCAO יאושר כאשר ה-rCBF יישמר ב-<-20% מערכי מצב המנוחה במהלך כל התקופה האיסכמית.
7. קבע את החוט המוחדר לכלי הדם למשך שעתיים בזמן שעורק המוח חסום, ולאחר מכן משוך בזהירות את החוט כדי להחזיר את זרימת הדם למשך 22 שעות של רפרפוזיה. תפרו את העור על ידי תפירה בחמישה מקומות (3-0 תפר משי, שני קשרים של חצי תקלה) ואפשרו לכל עכבר להתעורר מההרדמה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma	Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea
Stereo microscope	Leica	M50
Stereo microscope	Nikon	SMZ745
לייזר דופלר	מור מכשיר	moorVMS-LDF
תושבת שולחן הרדמה עם מערכת מד זרימה N₂O ו-O₂	Harvard Appratus	34-1352
מערכת ניטור הומותרמית	Harvard Appratus	55-7020
דיאטת עכבר	Doo Yeol Biotech	צ'או מכרסמים סטנדרטי
Isoflurane	JOONGWAE	A02104781
Isoflurane	TROIKAA	ISOTROY 100
תפר משי (4-0 משי שחור)	AILEE	SK47510
תפר משי (3-0 משי לבן)	Baekjae	57
תפר ניילון (8-0 מונופילמנט)	AILEE	NB825
מלקחיים	כלים מדעיים עדינים	11241-30
מלקחיים	כלים מדעיים עדינים	11254-20
מלקחיים	כלים מדעיים עדינים	11260-20
מלקחיים	עדינים כלי מדע עדינים	11274-20
מספריים כירורגיים	כלי מדע עדינים	14001-12
מספריים עדינים במיוחד בון	כלי מדע עדינים	14084-08
מספריים קפיציים של Moria Pascheff-Wolff	כלי מדע עדינים	15371-92
מלקחיים להרחבת כלי	כלי מדע עדינים	18153-11