Method Article

פיתוח רשת עצבית מהונדסת מיקרו-רקמות באמצעות מיקרו-עמודה מבוססת הידרוג'ל

August 7th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מקור: Struzyna, L. A. et al., רשתות עצביות מהונדסות מיקרו-רקמות תלת מימדיות בהשראה אנטומית לשחזור, אפנון ומידול של מערכת העצבים. J. Vis. Exp. (2017)

סרטון זה מדגים את הפיתוח של רשתות עצביות מהונדסות מיקרו-רקמות באמצעות מיקרו-עמוד הידרוג'ל עם ליבת מטריצה חוץ-תאית. אגרגטים עצביים זרועים נצמדים, מרחיבים הקרנות ויוצרים רשתות עצביות מובנות, ותורמים להתקדמות בהתפתחות הנוירולוגית ובמחקר הנוירותרפי.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים הכוללים מודלים של בעלי חיים נבדקו על ידי הוועדה המוסדית המקומית לטיפול בבעלי חיים ומועצת הביקורת הווטרינרית של JoVE.

1. פיתוח הידרוג'ל אגרוז (מרכיב תאי של רשתות עצביות מהונדסות מיקרו-רקמות (מיקרו-TENNs))

  1. הכנת תמיסת אגרוז
    1. בתוך ארון בטיחות ביולוגית, הכינו מאגרים למיקרו-עמודות על ידי העברת 20 מ"ל של תמיסת מלח חוצצת פוספט (DPBS) של Dulbecco לכל אחת משתי צלחות פטרי בגודל 10 ס"מ. עקרו מלקחיים עדינים ומיקרואזמל בעזרת מעקר חרוזים חם.
    2. שקלו 3 גרם אגרוז והעבירו אותו לכוס סטרילית בתוך ארון הבטיחות הביולוגית. הוסף 100 מ"ל DPBS לריכוז סופי של 3% משקל/נפח (w/v). כלול מוט מגנטי נקי וכסה את הכוס בנייר אלומיניום.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
figure-results-1

איור 1: שרטוטים של מכשיר ייצור המיקרו-עמודות בחיתוך לייזר ותבנית המיקרו-באר הפירמידלית המודפסת בתלת מימד לצבירת תאים. (A)-(B) שרטוט ותמונה של החצי התחתון והחלק העליון של מערך התעלות הגליליות, בהתאמה, המשמשים לייצור המיקרו-עמודים של ההידרוג'ל. (ג) שרטוט ות.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
חותך לייזרמערכות לייזר אוניברסליותPLS4.75משמש לייצור תבנית המיקרו-ערוצים החתוכה בלייזר.
מכשיר לייצור מיקרו-עמודים בחיתוך לייזרבהתאמה אישית--------------צור קשר עם קבוצת המחקר שלנו אם אתה מעוניין. מידות ושרטוטים מסופקים בכתב היד.
ברגים----------------------------#4-40 בקוטר הברגה של 3.05 מ"מ
אגוזים----------------------------#4-40 בקוטר הברגה של 3.05 מ"מ
מחט דיקור סיני (קוטר 180 מיקרומטר)לאסה רפואיsj.16X40הקוטר עשוי להשתנות בהתאם לגודל הרצוי עבור לומן המיקרו-עמודה.
צלחת פטריפישר08772B
תמיסת מלח פוספט חוצץ פוספט (DPBS) שלInvitrogen14200075
פוליסטירן פישר13-678-11D
אגרוזסיגמאA9539-50G
צינור נימי (קוטר 398 מיקרומטר)פישר21170Dהקוטר עשוי להשתנות בהתאם לגודל הרצוי למעטפת המיקרו-עמודה.
פלטה חמהפישרSP88857200
בר מגנטיפישר1451352
מיקרופיפטהסיגמאZ683884-1EA
25 מ"מ מד מחטפישר14-826-49
מיקרואזמלRoboz כירורגיRS-6270
מספרייםמדעייםעדינים14081-09
מכשירי דיוק עולמייםמלקחיים501985
מעקר חרוזים חםסיגמאZ378550-1EA
סטריאוסקופניקוןSMZ800Nמשמש לכל שלבי החיתוך ולייצור מיקרו-TNN.
354236 קולגן מסוג I של זנב חולדהיש לשמור על טמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס ולהסיר רק בעת הצורך. השתמש בקרח כדי לשמור על הטמפרטורה שלו בעת השימוש.
צינור מיקרוצנטריפוגהפישר02-681-256
עכבר למיניןקורנינג354232שמור על 4 מעלות צלזיוס והסר רק בעת הצורך. השתמש בקרח כדי לשמור על הטמפרטורה שלו בעת השימוש.
מדיום נוירו-בסיסיInvitrogen21103049מדיום בסיסי לתרבית של תאים עצביים טרום לידתיים ועובריים. יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס ולחמם בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס לפני השימוש.
נתרן הידרוקסיד (NaOH)פישרSS2661
חומצה הידרוכלורית (HCl)פישרSA48-1
נייר לקמוספישר09-876-18
תמיסת המלח המאוזנת של האנק (HBSS)חנות Invitrogen14170112בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
0.25% Trypsin-EDTAInvitrogen25200056יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס ולחמם בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס לפני השימוש.
דאוקסיריבונוקלאז לבלב בקר (DNase) ISigma10104159001יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס ולחמם ב-37 מעלות צלזיוס לפני השימוש.
תוסף B-27Invitrogen12587010נוסף למדיום הנוירו-בסיסי לתרבית נוירונים בהיפוקמפוס ובקליפת המוח. יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס ולחמם בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס לפני השימוש.
L-גלוטמיןInvitrogen35050061יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס ולחמם בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס לפני השימוש.
ספראג דולי יום עוברי 18 חולדותצ'ארלס ריברזן 001
פסטרפיפטה פישר22-042816
צינור צנטריפוגה 15 מ"לEMESCO1194-352099
וורטקספישר02-215-414
צנטריפוגהפישר05-413-115
המוציטומטרפישר02-671-6
Objet30 מדפסת תלת מימדStratasys--------------משמש לייצור תבניות המיקרו-באר הפירמידליות.
עובש באר פירמידלי מודפס בתלת מימדבהתאמה אישית--------------צור קשר עם קבוצת המחקר שלנו אם אתה מעוניין. מידות ושרטוטים מסופקים בכתב היד.
פולידימתילסילוקסן (PDMS) וחומר ריפויפישרNC9285739מגיע כערכה עם אלסטומר וחומר ריפוי. השתמש בתוך מכסה אדים כימי.
משפךפישר10-348C
1 מ"ל נורת פיפטהסיגמאZ509035
מיקרו-מריתפישרS50821
צלחת תרבית 12 בארותEMESCO1194-353043
תנורפישר11-475-154
אינקובטורפישר13 998 076
מיקרוסקופ Eclipse Ti-SNikon--------------משמש לצילום תמונות ניגודיות פאזה. עם רכישת תמונה דיגיטלית באמצעות מצלמת QiClick המתממשקת לתוכנת המחקר הבסיסית של Nikon elements (4.10.01).
כלים של

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Micro Tissue Engineered Neural NetworkHydrogel Micro ColumnExtracellular Matrix CoreNeuronal Cell AggregatesStereomicroscope ObservationCell Attachment ECMAxon Growth ExtensionMedium Replacement ProtocolBidirectional Neural ArchitectureLong Term Culture

Related Articles