Method Article

צומת Murine שטחית לימפה ניתוח

DOI:

10.3791/3444

⸱

May 21st, 2012

 , 
1Maisonneuve-Rosemont Hospital Research Center, 2Department of Microbiology and Immunology, University of Montreal, 3Department of Medicine, University of Montreal

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לעקוב אחר ההתקדמות של תגובה חיסונית לאורך זמן בתוך העכבר זאת, בלוטות הלימפה ניתן להסיר ברצף על ידי ניתוח. כאן, אנו מתארים כיצד טכניקה זו ניתן לבצע.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בתחום אימונולוגיה, להבין את התקדמות התגובה החיסונית נגד החיסון, זיהום או גידול, התגובה מלווה לעיתים קרובות לאורך זמן. באופן דומה, המחקר של הומאוסטזיס לימפוציטים דורש כמובן ניסויים זמן. ביצוע מחקרים אלו בתוך העכבר אותו הוא אידיאלי כדי להפחית את השתנות ניסיוני, כמו גם את מספר העכברים המשמשים. הנסיגה הדם מאפשרת ביצוע ניסויים כמובן זמן, אבל זה רק נותן מידע על מחזורי לימפוציטים ומספק מספר מוגבל של תאים 1-4. מאז לימפוציטים במחזור דרך הגוף המתגוררים בלוטות הלימפה יש מאפיינים שונים, חשוב לבחון את שני המקומות. הסרת רציפה של בלוטות הלימפה על ידי ניתוח מספק הזדמנות ייחודית לבצע תגובה חיסונית או הרחבת התא החיסונית של העכבר באותו הזמן. יתר על כן, שיטה זו מניבה בין 1-2x10 6 תאים בכל מפרק הלימפה אשר די PErform אפיון פנוטיפי ו / או מבחני תפקודית. לימפה הצומת רציף ניתוח או lymphadenectomy שימש בהצלחה על ידינו ואחרים 5-11. כאן, אנו מתארים כיצד בלוטות הלימפה הזרוע ואת מפשעתי ניתן להסיר על ידי ביצוע חתך קטן בעור של עכבר anesthetised. מאז הניתוח היא שטחית של דבר במהירות, עכבר מתאושש מהר מאוד, מחלים היטב ואינו לחוות כאב מוגזם. כל יום 2, ניתן לקצור אחת או שתיים בלוטות הלימפה המאפשר ניסויים כמובן זמן. טכניקה זו מתאימה ובכך ללמוד את המאפיינים של בלוטת לימפה לימפוציטים המתגוררים לאורך זמן. גישה זו מתאימה עיצובים ניסיוניים שונים ואנו מאמינים כי במעבדות רבות ירוויחו ביצוע ניתוחים עוקבים הצומת לימפה.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הכנה לפני הניתוח

העכברים טופלו בהתאם המועצה הקנדית על הנחיות טיפול בבעלי חיים.

  1. עכברים Anesthetise על ידי הזרקה של קטמין / xylazine (150/300 מ"ג / ק"ג, ה-IP) או על ידי שאיפה של isoflurane (2% חמצן 1 ליטר). אם ניתן, יש להשתמש isoflurane שכן היא מאפשרת שליטה טובה יותר של זמן ועומק ההרדמה. כמו כן, ניתנת חמצן בעת ​​ובעונה אחת התומכת את הפונקציות הפיזיולוגיות של החיה. יתר על כן, isoflurane מסולק ישירות על ידי הריאות, ולכן אינו מחייב את חילוף החומרים בכבד או בכליות.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תיארנו פרוטוקול הניתוח LN אשר יכול לחול על מערכות ניסיוניות רבות. אמנם שימושי מאוד לעקוב אחר התגובות החיסוניות או הומאוסטזיס תא החיסון, טכניקה זו יש מספר מגבלות. ראשית, רק 4 LNs ניתן לקצור. שנית, התגובה החיסונית למד חייב להיות מערכתי או להתרחש שטחיות (עור, ניקוז) LNs מפשעתי או הזרוע. לבסוף, מספר תאים שנקטפו מושפעת מאיכות הסרת LN, מגבלה טכנית אשר עשוי לתרום שונות ניסיוני כאשר מספרים מוחלטת לתא יש צורך. עם זאת, אחוז התאים היעד, בפני עצמו, יכול לספק מידע רלוונטי ומדויק במיוחד כאשר גו.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אין ניגוד עניינים הצהיר.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים Lesage סילבי וכל חברי המעבדה של קריאה ביקורתית של פרוטוקול. עבודה זו נתמכה על ידי מענק (MOP-77545) מן המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR). נטלי Labrecque נתמך על ידי מלגה בכיר FRSQ ומליסה מתייה קיבל אלכסנדר גרהם בל NSERC קנדה מלגות לתואר שני.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
מגיב שם חברה מספר קטלוגי תגובות
גרפה יפות פרימיום מלקחיים דפוסי הרווארד Apparatus 52-2144 מעוקל מאוד, 10 ס"מ (4 אינץ'), 0.8 מ"מ עצה
קליפ מישל מריחת הסרת מלקחיים הרווארד Apparatus 52-3779 12.5 ס"מ (5 ב)
מישל קליפ 100 הרווארד Apparatus 52-3746 7.5-1.75 מ"מ
Temgesic (hydrochloride עצירות) Schering-Plough
Vetalar (hydrochloride קטמין) Boniche בעלי חיים בריאות DIN: 01989529
Rompun (Xylazine) באייר DIN: 02169592
Isoflurane אבוט DIN: 02032384
Hypotears בעין משחה נוברטיס Ophtalmics DIN: 02133288
Baxedin (gluconate Clorhexidine 2% אלכוהול איזופרופיל 70%) אומגה L0000017 DIN: 02251477

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen. Nature. 458, 211-214 (2009).
  2. Vezys, V. Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience. Nature. 457, 196-199 (2009).
  3. Zho....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Lymph Node SurgeryMurine Lymph NodeBrachial Lymph NodeInguinal Lymph NodeLymph Node RemovalSequential Lymph NodeLymph Node HarvestingSingle Cell SuspensionFlow Cytometry AnalysisIsotonic Solution

Related Articles