אנו מתארים הליכי הכנה הקלטה אלקטרו מן פרוסות המוח השומרים על הציר הגבי-הגחוני של הקורטקס המדיאלי entorhinal (MEC). בגלל קידוד עצבי של מיקום כדלקמן הארגון הגב, הגחון בתוך MEC, נהלים אלה להקל על החקירה של מנגנונים תאיים חשובים לניווט וזיכרון.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הכנת פרוסות Parasagittal לחקירת ארגון הגבי-הגחוני של הקורטקס המדיאלי מכרסמים entorhinal
במאמר זה
סיכום
תקציר
חישוב במוח מתבסס על הנוירונים ותגובה הולמת לכניסות הסינפטיים שלהם. נוירונים נבדלים המשלים שלהם והפצה של יון ערוצי קרום שקובעים איך הם מגיבים תשומות סינפטיים. עם זאת, הקשר בין מאפיינים אלה סלולריים תפקוד עצבי של התנהגות בעלי החיים אינה מובנת היטב. גישה אחת לבעיה זו הוא לחקור מעגלים עצביים המאורגנים טופוגרפית שבה עמדת מפות נוירונים בודדים על גבי המידע שהם לקודד או חישובים שהם נושאים את 1. ניסויים בגישה זו מצביעים על עקרונות כוונון של תגובות סינפטיים שבבסיס קידוד המידע מעגלים חושיות קוגניטיביות 2,3.
ארגון טופוגרפי של ייצוגים מרחביים לאורך הציר הגבי-הגחוני של הקורטקס המדיאלי entorhinal (MEC) מספקת הזדמנות ליצור קשרים בין מנגנוני זמן מחשב הסלולר אניmportant על קוגניציה מרחבית. הנוירונים בשכבה השנייה של MEC מכרסם לקודד המיקום באמצעות הרשת, כמו ירי שדות 4-6. עבור נוירונים שנמצאו בעמדות הגב ב MEC המרחק בין שדות ירי בודדים היוצרים ברשת היא בסדר גודל של 30 ס"מ, ואילו נוירונים ב עמדות בהדרגה הגחון יותר מרחק זה עולה ל מ גדול מ 1. מספר מחקרים גילו תכונות הסלולר של הנוירונים בשכבה השנייה של MEC, שכמו המרווח בין שדות הרשת ירי, גם משתנים בהתאם למיקום שלהם הגבי-הגחון, טוען כי נכסים אלה הסלולר חשובים לצורך חישוב מרחבי 2,7-10.
כאן נתאר את הליכי הכנה הקלטה אלקטרו מן פרוסות המוח השומרים על מידת הגבי-הגחון החקירה המאפשר MEC של ארגון טופוגרפי של נכסים biophysical ו האנטומי של נוירונים MEC. עמדה הגב, הגחון של n מזוההeurons יחסית ציוני דרך אנטומיים קשה לקבוע במדויק עם פרוטוקולים המשתמשים פרוסות אופקיות של MEC 7,8,11,12, שכן קשה לקבוע נקודות התייחסות המיקום הגבי-הגחון המדויק של הפרוסה. הנהלים אנו מתארים לאפשר מדידה מדויקת ועקבית של מיקום של תאים שנרשמו לאורך הציר הגבי-הגחון של MEC, כמו גם להדמיה מולקולרית של הדרגתיים 2,10. הנהלים שפותחו לשימוש עם עכברים בוגרים (> 28 יום) ואת כבר מצליחים עם עכברים עד 1.5 שנים. עם התאמות ניתן לעשות בהם שימוש עם עכברים צעירים יותר או מינים מכרסמים אחרים. מערכת סטנדרטית של הכנה ומדידה יסייעו חקירה שיטתית של תכונות הסלולר microcircuit של אזור זה.
פרוטוקול
1. פורסים Parasagittal הכנה
1.1 לנתח את אונות המוח
כל ניסויים בבעלי חיים צריך לבצע ביקורת אתית המקומי תקנות לאומיות. במקרה של הניסויים שתוארו כאן, עבודה מתאימה לבעלי החיים בממלכה המאוחדת (הליכים מדעיים) חוק 1986. אנו משתמשים באופן שגרתי פריקה צוואר הרחם ללא הרדמה כדי להרדים את העכבר לפני הסרת המוח. לחלופין העכבר יכול להיות מורדם סופני, אבל במקרה הזה זה עשוי להיות נחוץ כדי לקבוע אם הבחירה של הרדמה משפיע על תכונות עצביים.
הסר את המ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
כדי להקל על החקירה של נכסים MEC מעגלים הבאים הארגון הגב, הגחון שתיארנו כאן בפירוט תהליך ייצור הכנת פרוסת parasagittal שמשמר את מידת הגבי-הגחון של MEC.
צעדים קריטיים
הסרת המוח של החיה. לטפל בפרט, כדי למנוע הפעלת לחץ על המוח. זה חשוב יותר להסרה מהירה של המוח.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין מה לחשוף.
תודות
אנחנו מודים הבאים על תמיכתם: חבר העמים ועדת מלגות בבריטניה מימון (HP), EPSRC (HP), BBSRC (MFN) והאיחוד האירופי מארי קירי פעולות (MFN).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות | ||
|---|---|---|---|---|---|
| חיתוך ACSF (מ"מ) | תקן ACSF (מ"מ) | פתרון פנימי (מ"מ) | CASNumber | קטלוג הספק מספר | |
| NaCl | 86 | 124 | 7647-14-5 | סיגמא S9888 | |
| לאא 2 PO 4 | 1.2 | 1.2 | 13472-35-0 | סיגמא 71505 | |
| KCl | 2.5 | 2.5 | 10 | 7447-40-7 | סיגמא P3911 |
| NaHCO 3 | 25 | 25 | 144-55-8 | פישר S/4240 | |
| גלוקוז | 25 | 20 | 50-99-7 | סיגמה G5767 | |
| סוכרוז | 75 | 57-50-1 | סיגמא S5016 | ||
| CaCl 2 | 0.5 | 2 | 10043-52-4 | VWR 190464K | |
| MgCl 2 | 7 | 1 | 2 | 7786-30-3 | סיגמא 63020 |
| K gluconate | 130 | 299-27-4 | סיגמה G4500 | ||
| HEPES | 10 | 7365-45-9 | סיגמא H3375 | ||
| EGTA | 0.1 | 67-42-5 | סיגמא E4378 | ||
| Na 2 ATP | 2 | 34369-07-8 | סיגמא A7699 | ||
| Na 2 GTP | 0.3 | 36051-31-7 | סיגמה G8877 | ||
| NaPhospho-קריאטין | 10 | 19333-65-4 | סיגמא P7936 | ||
| Biocytin (לא חובה) | 2.7 | 576-19-2 | סיגמא B4261 |
טבלה 1. חיתוך ACSF, רמת ACSF ו K-gluconate מתכונים פתרונות פנימיים.
מקורות
- O'Donnell, C., Nolan, M. F. Tuning of synaptic responses: an organizing principle for optimization of neural circuits. Trends Neurosci. 34, 51-60 (2011).
- Garden, D. L. F., Dodson, P. D., O'Donnell, C., White, M. D., Nolan, M. F.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
