השתלת אב עורקים בעכברי orthotopic לחקר מחלת כלי דם

סיכום

אנו מתארים טכניקה שבה קטע של אב העורקים בבטן מעכבר הושתל orthotopically ממש מתחת לעורקי הכליה בנמען אלוגנאית או syngeneic. טכניקה זו יכולה להיות שימושית במחקרים בם השתלה של עורקים גדולים של גודל אחיד נחשבת יתרון.

תקציר

נהלי כלי דם המעורבים anastomoses בעכבר נחשבים בדרך כלל להיות קשה ותלוי מאוד במיומנותו של מנתח הפרט. זה בעיקר נכון, אבל יש מספר העקרונות חשובים שיכול להפחית את הקושי של נהלים אלה ולשפר את השחזור. השתלת אב העורקים orthotopic היא הליך שבו מצוין ללמוד עקרונות אלה משום שהיא כוללת רק שני anastomoses מקצה לקצה, אבל דורשת טכניקה טובה תפירה וטיפול בכלי להצלחה בקנה אחד. הליך זה מתחיל ברכש של אורך של אב עורקים בבטן מחית תורם, ואחרי החלוקה של אב עורקי היליד בנמען. אז אב עורקי הרכש ממוקם בין הקצוות החצויים של אב עורקי הנמען ונתפר למקומו באמצעות anastomoses מקצה לקצה. כדי להשיג מטרה זו דורשת רמה גבוהה של ריכוז, כלים טובים, יד יציבה, והערכה להצלחה באיזו קלותמערכת כלי דם של עכבר יכולה להיות פגומה, וכתוצאה מפקקת. למידת העקרונות חשובים האלה היא מה שתופס את רוב הזמן של המתחילים כאשר למידת microsurgery במכרסמים קטנים. לאורך פרוטוקול זה, אנו מתייחסים לנקודות חשובות אלה. מודל זה יכול לשמש כדי לחקור מחלת כלי דם במגוון רחב של מערכות ניסיוניות שונות ^1-8. בהקשר שמוצג כאן, זה משמש לרוב לחקר מחלה לאחר השתלת כלי דם, סיבוכים ארוכי טווח שכיחים של השתלת איבר מוצקה שבי היפרפלזיה intimal מתרחשת בתוך השתל. היתרון העיקרי של המודל הוא שהוא מאפשר ניתוחי מורפומטריות כמותיים והכלי המושתל טמון רציף לכלי אנדוגני, שיכול לשמש כשליטה נוספת ^9. הטכניקה המוצגת כאן משמשת לרוב לעכברים במשקל 18-25 גרם. צברנו את רוב הניסיון שלנו באמצעות C57BL/6J, BALB / CJ, וזני C3H/HeJ.

פרוטוקול

1. הכנת Presurgical

1. הליכים כירורגיים, לא משנה כמה נעשה בזהירות, מביא ללחץ משמעותי. כדי למזער את ההשפעות של לחץ כזה ולמקסם מילואים, בעלי חיים צריכים להישמר בביבר ללפחות 72 שעות לפני השימוש ^10,11.
2. כלים כירורגיים, גזה, ומטליות חייבים להיות סטרילי. אין צורך להשתמש בכפפות סטריליות המספקות רק את קצות תפר מגע או מכשירי התחום האופרטיבי.
3. לhemostasis, זוהי החובה של לחצי clamping הם המינימום הכרחי. ניזק לכלי השיט עקב לחץ מוגזם או התרשלות בט....

תוצאות

איור 1 מציג שתל של אב עורקים. החצים הלבנים יסמנו את קווי התפר. שתל פטנט יציג דופק גלוי. איור 2 מצביע על ניסוי טיפוסי בו הישרדות נמען הייתה במעקב במשך תקופה של 56 ימים. קבוצה אחת הורכבה מעכברי נמען פראי מסוג-(C57BL / 6 x FVB) הושתלו באב עורקי BALB / ג. קבוצה האחרת, המיועד "KO" מורכבת מנמענים (C57BL / 6 x FVB) חסרים בביטוי של heme oxygenase-1, שתוצאה פקק מהשתלים בתוך 24 שעות. יש לציין, זה תוצאות במותו של כל הנמענים, כפי שמוצגות באיור.

דיון

מודלי עכבר של אב עורקי השתלה לספק מספר היתרונות, כי עכברים הם מאוד מוגדרים היטב immunogenetically ^9,12,13, והם יכולים לטפל בקלות לשנות את הביטוי של גנים ספציפיים שלהם, אם תרצו בכך. כפי שצוין במבוא, כירורגיה של כלי דם בעכבר היא יותר קשה מאשר רוב הדגמים בגלל גודלו של כלי השיט. אפילו העורקים הגדולים, כגון אב עורקים הם בדרך כלל לא יותר מ 100-200 מיקרומטר בקוטר פנימי; כך מניפולצית הכלים האלה דורשים כמות משמעותית של מיומנות וכשרון ^8,14. הסיבוך השכיח ביותר שנצפה בני.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
פריט	חברה	מספר
מהדקי כלי דם	כלי מדע פיין	00396-01 (גודל B-1)
דומון מלקחיים	כלי מדע פיין	11293-00
10-0 עקצו microsuture	AROSurgical	TK-107038
מספריים ישרים	Roboz כירורגי Instrument ושות	RS-5620
cauterizer טמפרטורה הנמוכה	ביבר-Visitec הבינלאומי	8441000
מפשק עצמי שמירה	מכשירי Precision העולם	14240