תיקון: תרביות תימוס מaggregated מחדש

סיכום

בוצע תיקון למאמר: Reaggregate Thymus Cultures. תקציר מעודכן פורסם מחדש עקב טעות של המוציא לאור.

תקציר

בוצע תיקון למאמר: Reaggregate Thymus Cultures. תקציר מעודכן פורסם מחדש עקב טעות של המוציא לאור. התקציר תוקן ל:

תאי סטרומה בתוך רקמות לימפואידיות מאורגנים למבנים תלת-ממדיים המספקים פיגום אשר נחשב לשולט בהגירה ובפיתוח של תאי המטופואזיס. באופן משמעותי, שמירה על ארגון תלת-ממדי זה נראית קריטית לתפקוד תקין של תאי הסטרומה, כאשר תרביות מונושכבה דו-ממדיות מראות לעיתים קרובות יכולת לתמוך רק בחלקים בודדים מתפקוד הרקמה הלימפואידית. בטימוס, רשתות מורכבות של תאים אפיתליאליים קורטיקליים ומדולריים משמשות כמסגרת השולטת בגיוס, שגשוג, התמיינות והישרדות של פרוגניטורים לימפואידיים בעודם עוברים את התהליך רב-השלבי של התפתחות תאי T בתוך הטימוס. הבנת התפקיד התפקודי של מדורי סטרומה בודדים בטימוס חיונית לקביעה כיצד הטימוס כופה הבחנה בין עצמי לבלתי-עצמי. כאן אנו מתארים טכניקה שבה אנו מנצלים את הפלסטיות של רקמות עובריות כדי להתאחד מחדש למבנים תלת-ממדיים שלמים in vitro, בעקבות פירוק אנזימטי שלהן. הפירוק של אונוני טימוס עוברי לתערובות תאים הטרוגניות, ולאחריו הפרדתם לרכיבים תאיים בודדים, משולב לאחר מכן עם התאחדות מחדש in vitro של סוגי תאים רצויים אלה למבני רה-אגרגציה תלת-ממדיים ביחסים מוגדרים, ובכך מסופקת הזדמנות לחקור היבטים ספציפיים של התפתחות תאי T תחת תנאים תאיים מוגדרים. (מאמר זה מבוסס על עבודה שדווחה לראשונה ב-Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pages 185-196).

מתוך

בטימוס, תימוציטים לא בשלים CD4+8+ המבטאים גנים של שרשראות α ו-β של רצפטור תאי T שעברו סידור מחדש אקראי, עוברים תהליכי ברירה חיובית ושלילית על בסיס יכולתם לזהות מולקולות של פפטיד עצמי/קומפלקס היסטו-תאיים ראשי (MHC) המבטאות על ידי תאי הסטרומה של הטימוס. ניתוח in vivo של תפקיד תאי הסטרומה של הטימוס במהלך הברירה האינטרה-תימית מקושה בשל המורכבות התאית של המיקרו-סביבה התימית בטימוס של מבוגר במצב יציב, ובשל המחסור באסטרטגיות התמסורה מתאימות להשפעה על ביטוי גנים במדורי סטרומה תימיים ספציפיים. הראינו שניתן להשפיע בקלות על המיקרו-סביבה התימית in vitro באמצעות שימוש בתרביות איברים של טימוס במבנה של צבירי תאים (reaggregate thymus organ cultures), המאפשרות הכנה של אונונים תימיים תלת-ממדיים מתאי סטרומה ותאי לימפה מוגדרים. למרות שמערכות in vitro אחרות תומכות בהיבטים מסוימים של התפתחות תאי T, תרבית איברים של טימוס במבנה של צבירי תאים נותרת מערכת ה-in vitro היחידה המסוגלת לתמוך בתהליכי ברירה יעילים של תימוציטים המתווכים על ידי MHC class I ו-II, ולכן היא יכולה לשמש ככלי יעיל לחקר הוויסות התאי והמולקולרי של הברירה החיובית והשלילית בטימוס.

פרוטוקול

בוצע תיקון בכתבה: Reaggregate Thymus Cultures. תקציר מעודכן פורסם מחדש עקב טעות של המוציא לאור. התקציר תוקן ל:

תאי סטרומה ברקמות לימפואידיות מאורגנים במבנים תלת-ממדיים המספקים פיגום אשר נחשב לשולט בנדיקה ובפיתוח של תאים המטופואטיים. באופן משמעותי, נראה כי שמירה על ארגון תלת-ממדי זה היא קריטית לתפקוד תקין של תאי הסטרומה, כאשר תרביות בשכבה אחת (monolayer) דו-ממדית הראו לעיתים קרובות יכולת לתמוך רק בחלקים בודדים מתפקוד הרקמה הלימפואידית. בטימוס, רשתות מורכבות של תאי אפיתל קורטיקליים ומדולריים משמשות כמסגרת השולטת בגיוס, שגשוג, דיפרנציאציה והישרדות של פרוגניטורים לימפואידיים בעת שהם עוברים את התהליך רב-השלבי של התפתחות תאי T תוך-טימוסית. הבנת התפקיד התפקודי של מדורי סטרומה בודדים בטימוס היא חיונית לקביעת האופן שבו הטימוס מבצע הבחנה בין עצמי לבלתי-עצמי. כאן אנו מתארים טכניקה שבה אנו מנצלים את הפלסטיות של רקמות עובריות כדי להרכיבן מחדש למבנים תלת-ממדיים שלמים in vitro, בעקבות פירוק אנזימטי שלהן. פירוק של אונויי טימוס עובריים לתערובות תאיות הטרוגניות, ולאחריו הפרדתם לרכיבים תאיים בודדים, משולב לאחר מכן עם הרכבה מחדש in vitro של סוגי תאים רצויים אלה למבני רב-צבירה (reaggregate) תלת-ממדיים ביחסים מוגדרים, ובכך מסופקת הזדמנות לחקור היבטים מסוימים של התפתחות תאי T תחת תנאים תאיים מוגדרים. (מאמר זה מבוסס על עבודה שדווחה לראשונה ב-Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pages 185-196).

מתוך

בטימוס, תימוציטים לא בשלים CD4+8+ המבטאים גנים של שרשראות α ו-β של קולטן T שעברו סידור מחדש אקראי, עוברים אירועי ברירה חיובית ושלילית בהתבסס על יכולתם לזהות מולקולות של פפטיד עצמי/מכלול תאימות היסטו-מג'ורי (MHC) המבטאות על ידי תאי הסתומה (stromal cells) של הטימוס. ניתוח in vivo של תפקיד תאי הסתומה של הטימוס במהלך הברירה האינטרה-תימית מקושר לקשיים בשל המורכבות התאית של המיקרו-סביבה התימית בטימוס של מבוגר במצב יציב, וכן בשל המחסור באסטרטגיות פגיעה (targeting) מתאימות למניפולציה של ביטוי גנים במרכיבי סתומה תימיים ספציפיים. הראינו שניתן לבצע מניפולציה בקלות של המיקרו-סביבה התימית in vitro באמצעות שימוש בתרביות איברים של טימוס במבנה צביר (reaggregate), המאפשרות הכנה של אונוני טימוס תלת-ממדיים מתאי סתומה ותאי לימפה מוגדרים. למרות שמערכות in vitro אחרות תומכות בחלק מהיבטים של התפתחות תאי T, תרבית איברים של טימוס במבנה צביר נותרת המערכת היחידה in vitro המסוגלת לתמוך באירועי ברירה יעילים של תימוציטים המתווים על ידי MHC class I ו-II, ולכן היא יכולה לשמש ככלי יעיל לחקר הוויסות התאי והמולקולרי של הברירה החיובית והשלילית בטימוס.