תיקון: הכנה של תרביות איברים של תימוס שטופלו ב-2-dGuo

סיכום

בוצע תיקון למאמר: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. תקציר מעודכן פורסם מחדש עקב טעות של המוציא לאור.

תקציר

בוצע תיקון ל: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. תקציר מעודכן פורסם מחדש עקב טעות של המוציא לאור. התקציר תוקן ל:

בטימוס, אינטראקציות בין תאי קדם של תאי T מתפתחים לבין תאים סטרומליים, הכוללים תאי אפיתל קורטיקליים ומדולריים, ידועות כמשחקות תפקיד מרכזי בפיתוחו של מאגר תאי T בעל כשירות תפקודית. עם זאת, המורכבות של התפתחות תאי T בטימוס in vivo עלולה להגביל את ניתוח הרכיבים התאיים הבודדים ושל שלבי התפתחות מסוימים. מערכות תרבית in vitro מספקות אמצעי נגיש לחקר תהליכים תאיים מורכבים ומרובים. מערכות תרבית של אישן הטימוס מייצגות גישה נפוצה לחקר ההתפתחות האינטרה-טימוסית של תאי T תחת תנאים מוגדרים in vitro. כאן אנו מתארים מערכת שבה ניתן להדל תאי קדם המטופויטים אנדוגניים מאונות טימוס עובריות של עכבר על ידי תרבית איברים מוקדמת ב-2-deoxyguanosine, תרכובת שהיא רעילה באופן סלקטיבי לתאים המטופויטיים. בנוסף לאספקת מקור נגיש של תאים סטרומליים של הטימוס לבחינת תפקידם של מיקרו-סביבות טימוסית בפיתוח ובברירה של תאי T, טכניקה זו מהווה בסיס לגישות ניסיוניות נוספות, הכוללות שחזור של אונות טימוס אלימפואידיות in vitro עם רכיבים המטופויטיים מוגדרים, השתלה של טימוסים אלימפואידיים לעכברים מקבלים, ויצירת תרביות איברים של טימוס באמצעות ר-אגרגציה. (מאמר זה מבוסס על עבודה שדווחה לראשונה ב-Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pages 185-196).

מאת

בטימוס, תימocytes לא בשלים מסוג CD4+8+ המבטאים גנים של שרשראות α ו-β של קולטן תאי T שעברו ארגון מחדש אקראי, עוברים תהליכי ברירה חיובית ושלילית בהתבסס על יכולתם לזהות מולקולות של פפטיד עצמי/complex תאיות ראשי (MHC) המבוטאות על ידי תאי הסרקoma של הטימוס. ניתוח in vivo של תפקידם של תאי הסרקoma של הטימוס במהלך הברירה האינטרה-טימיסית הוא קשה בשל המורכבות התאית של המיקרו-סביבה הטימיסית בטימוס של בוגר במצב יציב, ובשל היעדר אסטרטגיות הת targeting מתאימות למניפולציה של ביטוי גנים במדורי סרקoma טימיסיים ספציפיים. הראינו שניתן לבצע מניפולציה בקלות במיקרו-סביבה הטימיסית in vitro באמצעות שימוש בתרביות איבר של טימוס שעבר רה-אגרגציה, המאפשרות הכנה של אונוני טימוס תלת-ממדיים מתאי סרקoma ותאי לימפואידים מוגדרים. למרות שמערכות in vitro אחרות תומכות בהיבטים מסוימים של התפתחות תאי T, תרבית איבר של טימוס שעבר רה-אגרגציה נותרת מערכת ה-in vitro היחידה המסוגלת לתמוך באירועי ברירה יעילים של תימocytes המתווכים על ידי MHC class I ו-II, ולכן היא יכולה לשמש ככלי יעיל לחקר הוויסות התאי והמולקולרי של ברירה חיובית ושלילית בטימוס.

פרוטוקול

בוצע תיקון ל: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. תקציר מעודכן פורסם מחדש עקב טעות של המוציא לאור. התקציר תוקן ל:

בתיםוס, אינטראקציות בין תאי מקור של תאי T מתפתחים לבין תאי סטרומה, הכוללים תאים אפיתליאליים קורטיקליים ומדולריים, ידועות כבעלות תפקיד מרכזי בפיתוחו של מאגר תאי T בעלי כשירות תפקודית. עם זאת, המורכבות של התפתחות תאי T בטימוס in vivo עלולה להגביל את ניתוחם של מרכיבים תאיים בודדים ושל שלבי התפתחות ספציפיים. מערכות תרבית in vitro מספקות אמצעי נגיש לחקר תהליכים תאיים מורכבים ומרובים. מערכות תרבית של אישון הטימוס מהוות גישה נפוצה לחקר ההתפתחות האינטרה-טימוסית של תאי T תחת תנאים מוגדרים in vitro. כאן אנו מתארים מערכת שבה ניתן להדל תאי מקור המטופויטיים אנדוגניים מאונות טימוס עובריות של עכבר באמצעות תרבית איברים מוקדמת ב-2-deoxyguanosine, תרכובת שהיא רעילה באופן סלקטיבי לתאים המטופויטיים. מעבר לאספקת מקור נגיש של תאי סטרומה של הטימוס לבחינת תפקידם של מיקרו-סביבות טימוסיות בפיתוחם ובברירתם של תאי T, טכניקה זו מהווה בסיס לגישות ניסיוניות נוספות הכוללות רקונסטיטוציה של אונות טימוס א-לימפואידיות in vitro עם מרכיבים המטופויטיים מוגדרים, השתלה של טימוסים א-לימפואידיים לעכברי מקלט, ויצירה של תרביות איברים של טימוס במבנה ר-אגרגט. (מאמר זה מבוסס על עבודה שפורסמה לראשונה ב-Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 pages 185-196).

מאת

בתיםוס, תימוציטים לא בשלים CD4+8+ המבטאים גנים של שרשראות α ו-β של קולטן תאי T שעברו ארגון מחדש אקראי, עוברים תהליכי ברירה חיובית ושלילית על בסיס יכולתם לזהות מולקולות של פפטיד-עצמי/מכלול תאימות רקעיתי ראשי (MHC) המבטאות על ידי תאי הסטרומה של התימוס. ניתוח in vivo של תפקידם של תאי הסטרומה של התימוס במהלך הברירה האינטרה-תימית מקושר לקושי בשל המורכבות התאית של המיקרו-סביבה התימית בתימוס של מבוגר במצב יציב, וכן בשל היעדר אסטרטגיות פנייה מתאימות למניפולציה של ביטוי גנים במדורי סטרומה תימיים ספציפיים. הראינו כי ניתן לבצע מניפולציה בקלות של המיקרו-סביבה התימית in vitro באמצעות שימוש בתרביות איבר של תימוס באמצעות רה-אגרגציה, המאפשרות הכנה של אונולי תימוס תלת-ממדיים מתאי סטרומה ותאי לימפה מוגדרים. למרות שמערכות in vitro אחרות תומכות בהיבטים מסוימים של התפתחות תאי T, תרבית איבר של תימוס ברה-אגרגציה נותרת מערכת ה-in vitro היחידה המסוגלת לתמוך בתהליכי ברירה יעילים של תימוציטים המתווכים על ידי MHC class I ו-II, ולכן היא יכולה לשמש ככלי יעיל לחקר הוויסות התאי והמולקולרי של ברירה חיובית ושלילית בתימוס.