הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

אנטיגנים מוגנים תאי דם אדומים פונקציונליים על ידי ההשתלה של ממברנה Polyglycerols Hyperbranched הקומפקטי

17.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/50075

⸱

2 בינואר 2013

 ,  ,  ,  , 

במאמר זה

סיכום

שינוי קרום התא של תאי דם אדומים (RBCs) עם polyglycerol hyperbranched (HPG) מוצג. RBCs השתנה התאפיינו מחיצות מימיות 2 שלב, שבריריות האוסמוטי ותמוגה משלים מתווכת. ההסוואה של חלבונים על פני שטח ואנטיגנים הוערכה באמצעות cytometry הזרימה ומערכת מייקר הקלדה (MTS) כרטיסי phenotyping דם.

תקציר

תא דם אדום עירוי (RBC) הוא חיוני לטיפול במספר בעיות אקוטיות וכרוניות רפואיות כגון תלסמיה ואנמיה חרמשית הגדול אנמיה 1-3. בשל הנוכחות של מספר רב של אנטיגנים על פני שטח RBC (~ 308 אנטיגנים ידועים 4), חולים בטיפול עירוי הדם הכרוני לפתח alloantibodies בשל ההתאמה מתגעגעת של אנטיגנים קטין על RBCs עירוי 4, 5. השתלה של פולימרים הידרופילי כגון פוליאתילן גליקול (PEG) וpolyglycerol hyperbranched (HPG) יוצרת שכבת הדרה על קרום RBC שמונעת את האינטראקציה של נוגדנים עם אנטיגנים על פני שטח מבלי להשפיע על המעבר של מולקולות קטנות כמו חמצן, גלוקוז, ויונים 3. בשלב הנוכחי אין שיטה זמינה עבור הדור של תאי תורם אוניברסליים דם אדומים בחלקו בגלל האתגר המרתיע הוצג על ידי הנוכחות של מספר רב של אנטיגנים (חלבונים ופחמימות המבוססות) על פני שטח RBC ודevelopment שיטות כאלה באופן משמעותי לשפר את בטיחות עירוי, ולשפר באופן דרמטי את הזמינות והשימוש בRBCs. בדוח זה, בניסויים המשמשים לפיתוח RBCs הפונקציונלי המוגן אנטיגן ידי קרום השתלת HPG ואפיונם מוצגים. HPGs מאוד הם ביולוגיים פולימרים 6 קומפקטיים, 7, והם צפויים להיות ממוקמים בתוך התא glycocalyx שמקיף את הקרום השומני 8, 9 ואנטיגנים מסכת RBC שטח 10, 11.

פרוטוקול

שינוי Polyglycerol Hyperbranched א (SS-HPG)

  1. מקום lyophilized HPG 60 kDa (0.5 גרם, 0.0083 mmol) בבקבוקון תחתית עגול ולייבש אותו בלילה תחת ואקום ב 90 ° C.
  2. מכניס למקרר הבקבוק לטמפרטורת חדר, ולפזר את HPG המיובש בפירידין הנטול מים (3 מ"ל).
  3. לfunctionalize כ 8 קבוצות הידרוקסיל בHPG עם קבוצות carboxyl, להוסיף כמות קטליטי של dimethylaminopyridine (טיפה אחת של פתרון מ"ל 5 מ"ג / בפירידין) לפתרון HPG. לתערובת זו, מוסיף אנהידריד succinic, (0.0067 גרם, 0....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הסוואה של אנטיגן רזוס D וחלבוני CD47 RBC משטח הייתה לכמת ידי cytometry זרימה באמצעות ניאון נוגדנים חד השבטיים שהכותרת, ותוצאת נציג ניתן באיור 1. במקרה של RBCs HPG מושתל-(אפור), עוצמת אות ירד (שיא עבר לשמאל) בהשוואה לשליטת RBCs (אדום וירוק) המצביע על ירידה בקשירת נוגדנים לתא שטח שמצביע על המיסוך של חלבוני שטח .

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

RBCs תורם האוניברסלי יש פוטנציאל גדול בשיפור הזמין דם ובטיחות לטיפול בעירוי דם. RBCs נחשב גם רכב משלוח סמים מבטיח בשל תפוצתם הארוכה וbiocompatibility הגלום 14, 15. ניסויים שהוצגו במאמר זה להעריך את המאפיינים במבחנה של HPG RBCs שונה. במבחנה ונכסים שבמחזור vivo של RBCs שונה HPG נחקר בקבוצה שלנו לאחרונה 8, 11. חלוקת RBCs במערכת Dextran500K/PEG8K מימית 2 שלב, השלימה עם NaCl ופוספט נתרן, תלויה במטען המשטח הכדורי האדום ועל רכב פני שטח גלי.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

תודות

מחקר זה מומן על ידי השירותים הקנדיים דם (למ"ס) והמכון הקנדי לקרן למדעי הבריאות (CIHR) מחקר שותפות. המחברים מודים לרכזת מקרומולקולה LMB בUBC המרכז למחקר דם לשימוש במתקני המחקר שלהם. מתקן התשתית נתמך על ידי קרן קנדה עבור חדשנות (CFI), ומייקל סמית הקרן לבריאות מחקר (MSFHR). ר 'Chapanian הוא מקבל (CIHR / מ"ס) מלגות דוקטורט במדע העירוי ומקבל מלגת מחקר MSFHR מתאמן פוסט דוקטורט. י"נ Kizhakkedathu הוא חתן פרס חוקר מלומד קריירה של MSFHR.

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Glycidol סיגמה אולדריץ (ON, קנדה)
Trimethylolpropane Fluka (ON, קנדה)
methylate אשלגן סיגמה אולדריץ (ON, קנדה)
נטול המים פירידין סיגמה אולדריץ (ON, קנדה)
4-Dimethylaminopyridine סיגמה אולדריץ (ON, קנדה)
אנהידריד succinic סיגמה אולדריץ (ON, קנדה)
אצטון הפישר סיינטיפיק (ON, קנדה)
פוראמיד דימתיל נטול מים סיגמה אולדריץ (ON, קנדה)
N-Hydroxysuccinimide סיגמה אולדריץ (ON, קנדה)
N, ניצבת בין Diisopropylcarbodiimide סיגמה אולדריץ (ON, קנדה)
MTS כרטיסים מייקר הקלדת מערכת (MTS) כרטיסים (פלורידה, ארה"ב)
500 kDa dextran כימיקלים עדינים Pharmacia (שוודיה)
PEG 8 kDa סיגמה אולדריץ (ON, קנדה)
נגד רזוס FITC חד השבטי D (RHD) Biodiagnostics מנה (פנסילבניה, ארה"ב)
PE חד שבטי אנטי CD47 BD Biosciences (ניו ג'רזי, ארה"ב)
המגיב של דרבקין סיגמה אולדריץ (ON, קנדה)
שולחן. כימיקלים וריאגנטים משמשים להשתלה של HPG פולימרים לRBC קרום והניתוח שלהם.

מקורות

  1. Bradley, A. J., Murad, K. L., Regan, K. L., Scott, M. D. Biophysical consequences of linker chemistry and polymer size on stealth erythrocytes: size does matter. Biochim. Biophys. Acta. 1561 (2), 147-158 (2002).
  2. Murad, K. T., Mahany, K. L., Brugnara, C., Kuypers, F. A., Eaton, J. W., Scott, M. D.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

פוליגליצריול היפר-מסועףהגנה על אנטיגןציטומטריה של זרימההשתבת פולימריםעירוי דםאנטיגנים של פני השטחHPG פונקציונליהפרדת דקסטראן-PEGכימות המוגלובין