Method Article

Electrotaxis מבוסס microfluidic לניתוח כמותי על פי דרישה של Elegans Caenorhabditis 'נידות

DOI:

10.3791/50226

May 2nd, 2013

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שיטת מייקרו אלקטרו fluidic חצי אוטומטית כדי לגרום לתנועה על פי דרישה ב Elegans Caenorhabditis מתואר. שיטה זו מבוססת על תופעת neurophysiologic של תולעים המגיבים לשדות חשמליים קלים ("electrotaxis") בתוך ערוצי microfluidic. Microfluidic electrotaxis משמש כטכניקה מהירה, רגישה, בעלות נמוכה, וניתן להרחבה למסך לגורמים המשפיעים על בריאות עצבית.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

את Caenorhabditis elegans נמטודות הוא אורגניזם מודל תכליתי למחקר ביו בגלל השימור של גנים הקשורים למחלות ושבילים, כמו גם את קלות הטיפוח שלה. כמה ג מודלים המחלה elegans כבר דיווחו, כולל הפרעות ניווניות כגון מחלת הפרקינסון (PD), הכולל ניוון של דופאמין (DA) תאי עצב 1. שני transgenes והכימיקלים neurotoxic היו בשימוש כדי לגרום לניוון מוחיה תובע וליקויי תנועה וכתוצאה מכך בתולעים, מה שמאפשר לחקירות הבסיס של ניוון מוחיים והמסכים לגנים ותרכובות 2,3 neuroprotective.

מסכים באאוקריוטים נמוכים כמו ג elegans לספק אמצעי יעיל וחסכוני לזיהוי תרכובות וגנים המשפיעים על איתות העצבית. מסכי קונבנציונליים מבוצעים בדרך כלל באופן ידני וכבש על ידי בדיקה חזותית, וכתוצאה מכך, הם זמן חסרונות- uming ונוטה לטעויות אנוש. בנוסף, רובם מתמחים בניתוח רמה תאי תוך התעלמות מתנועה, שהוא פרמטר חשוב במיוחד להפרעות תנועה.

אנחנו פיתחו מערכת microfluidic הקרנת רומן (איור 1) ששולטת ומכמת ג התנועה 'אלגנס באמצעות גירויי שדה חשמליים בתוך microchannels. אנחנו הראינו כי שדה (DC) זרם ישיר וחסונה יכול לגרום על פי דרישת תנועה לכיוון הקתודה ("electrotaxis") 4. היפוך הקוטביות של השדה גורם לתולעת להפוך את כיוונו במהירות גם כן. יש לנו גם הראו כי פגמים בעצב סנסורי דופאמין ואחרים לשנות את תגובת שחייה 5. לכן, ניתן לקבוע ליקויים באיתות העצבית באמצעות תנועה כקריאה החוצה. תגובת התנועה ניתן לכמת במדויק תוך שימוש במגוון של פרמטרים כגון שחייה מהירות, תדירות כיפוף גוף וזמן היפוך.

S = "jove_content"> העבודה שלנו גילתה כי תגובת electrotactic משתנה עם גיל. באופן ספציפי, הצעירים להגיב לטווח תחתון של שדות חשמליים ולנוע מהר יותר בהשוואה לזחלים 4. ממצאים אלה הובילו אותנו לעצב מכשיר microfluidic חדש למיין תולעים פסיביים על ידי גיל ופנוטיפ 6.

כמו כן, אנו צריכים לבדוק את התגובה של תולעים ל DC פעם לסירוגין ושדות (AC) זרם חשמלי. שדות DC פעם של מחזורי החובה שונים electrotaxis שנוצר בצורה יעילה בשניהם ג elegans ובת דודתו ג briggsae 7. בניסוי נוסף, שדות סימטריים AC עם תדרים הנעים בין הרץ 1 עד 3 קילוהרץ משותק תולעים בתוך הערוץ 8.

יישום של השדה החשמלי בסביבת microfluidic מאפשר ביצוע מהיר ואוטומטי של assay electrotaxis. גישה זו מבטיחה להקל על מסכי גנטיים וכימיים תפוקה גבוהה עבור גורמיםהמשפיע על תפקוד וכדאיות עצביים.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Photolithography לייצור עובש מאסטר

  1. להתרחץ 3 פנימה פרוסות סיליקון באצטון למשך 30 שניות ולאחר מכן מתנול למשך 30 שניות. לשטוף עם DH 2 0 מים למשך 5 דקות.
  2. לייבש השטח של רקיק עם אקדח מכת N2. מחממים את פרוסות על צלחת חמה ב 140 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות.
  3. פלזמה חמצן פני השטח של פרוסות סיליקון (1 דקות, 50 וואט).
  4. פני השטח של רקיק ספין מעיל עם SU-8 100 photoresist 3 מ"ל (40 שניות; 1,750 סל"....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סרטון מייצג של electrotaxis של נמטודות מבוגר הצעירה פראי סוג והמיקום שלה ותפוקות מהירות מתוכנת מעקב התולעת מוצג בוידאו משלים 1 ואיור 3. תוכנת ניתוח התנועה עצמה אינה מזהה את הכיוון של קוטביות שדה ואת הזמן של היפוך קוטביות, אלא במידע זה יש לקבל ממקור הווידאו. זה יכול להיעשות באמצעות אות קולית או חזותית בוידאו או לכתוב את התנאים ומניפולציות ניסיוניים.

נתונים במהירות Electrotaxis מקבוצה של חיות בר מס.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניצול של התופעה התנהגותית שתוארה לראשונה על ידי גייבל ועמיתיו ובונים על עבודת המניפולציה dielectrophoretic של צ'ואנג ועמיתים 11,12, assay electrotaxis microfluidic מבוסס שלנו מספק שיטה קלה, חזקה ורגישה לבדיקת פעילות עצבית בתולעים באמצעות תנועה כ פלט. הניתוח של פרמטרים תנועה מאפשר השוואת כמותית בין גנוטיפים שונים. הדיוק של ייצור ויישום microchannel שדה חשמלי לספק גם יחד סביבה לשליטה ואמצעים ליצירת קשר עם התולעת לבקרת תנועה. יש צורות גל אותות חשמליות שונות השתקפויות ה.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טכנולוגית assay electrotaxis microfluidic כבר הגישה בקשה לפטנט בארצות הברית של אמריקה וקנדה.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מבקשים להודות למדעי הטבע והנדסת מועצת מחקר של קנדה, תכנית כיסאות מחקר בקנדה, מכון קנדי ​​לחקר בריאות, ואונטריו משרד המחקר והחדשנות באמצעות תכנית פרס החוקרים הראשונה שלהם לתמיכה כספית.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
אצטוןCALEDON Labs1200-1-30
מתנולCALEDON Labs6700-1-30
איזופרופנולCALEDON Labs8600-1-40
SU-8Microchem Corp.Y131273SU-8 100
SU-8 מפתחתMicrochem Corp.
92x16 מ"מ צלחת פטריSarstedt82.1473.001
ערכת אלסטומר סיליקון Sylgard 184Dow Corningמכיל בסיס אלסטומר וחומר ריפוי
מחולל פונקציותTektronix Inc.דגם
AFG3022B AmplifierTrek Inc.דגם 2210-CE
משאבת מזרקמכשיר הרווארד70-4506דגם 11 ELITE
HotplateFisher Scientific11675916Qדגם HP131725Q
Y020100

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kuwahara, T., Koyama, A., et al. Familial Parkinson mutant α-synuclein causes dopamine neuron dysfunction in transgenic Caenorhabditis elegans. J. Biol. Chem. 281 (1), 334-340 (2006).
  2. Kuwahara, T., Koyama, A., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Microfluidic ElectrotaxisC Elegans LocomotionElectric Field StimulationMicrochannel DesignPDMS MoldingWorm Tracking SoftwareSwimming Speed AnalysisBody Bend FrequencyReversal Time MeasurementNeurodegenerative Disorder Screening

Related Articles