במאמר זה, אנו מציגים שיטה לניתוח microvessels גידול in vivo באמצעות videomicroscopy הקרינה משופרת ניגודיות דינמי. שני פרמטרים כמותיים נרכשו: צפיפות תפקודית נימים המשקפת את כלי הדם של הגידול, וזליגת מדד המשקפת את הדליפות של קיר אנדותל.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
בהדמית vivo של אנגיוגנזה גידול באמצעות הקרינה Confocal Videomicroscopy
במאמר זה
סיכום
תקציר
confocal הקרינה בתחום ההדמיה vivo fibered עם צרור סיבים אופטי משתמשת באותו העיקרון כמו מיקרוסקופיה confocal פלואורסצנטי. זה יכול לרגש את הניאון באלמנטים באתרו דרך הסיבים אופטיים, ולאחר מכן להקליט חלק מהפוטונים הנפלטים, דרך אותו הסיבים אופטיים. מקור האור הוא לייזר ששולח אור המרגש באמצעות אלמנט בתוך צרור הסיבים וכמו סריקות על המדגם, משחזר פיקסל תמונה בפיקסל. כסריקה זו מהירה מאוד, על ידי שילוב עם תוכנת עיבוד תמונה ייעודית, ניתן לקבל תמונות בזמן אמת עם תדר של 12 מסגרות / sec.
פיתחנו טכניקה לאפיון מורפולוגיה נימים ותפקוד כמותית, באמצעות מכשיר videomicroscopy הקרינה confocal. השלב הראשון בניסוי שלנו היה לרשום 5 סרטי שניות בארבעה הרביעים של הגידול כדי להמחיש את רשת הנימים. כל הסרטים עובדו באמצעות תוכנה (אניmageCell, מאונה קיאה טכנולוגיה, פריז צרפת) שמבצעת פילוח אוטומטי של כלי סביב קוטר בחר (10 מיקרומטר במקרה שלנו). לפיכך, אנו יכולים לכמת את "הצפיפות תפקודית נימים", שהוא היחס בין שטח הכלי המוחלט והשטח הכולל של התמונה. פרמטר זה היה סמן הפונדקאי לצפיפות כלי הדם, נמדד בדרך כלל תוך שימוש בכלים לפתולוגיה.
הצעד השני היה להקליט סרטים של הגידול מעל 20 דקות לכמת דליפת חומר ניגוד macromolecular של דרך קיר הנימים לתוך interstitium. על ידי מדידת היחס בין עוצמת אות בinterstitium על זה בכלי, "זליגת מדד 'הושגה, הפועלת כסמן הפונדקאי לחדירות נימים.
מבוא
אנגיוגנזה היא תהליך מורכב 1 המערב את היווצרותם של כלי דם חדשים מכלי קיימים מראש. שינויים פתולוגיים בזרימת דם לרקמות, מורכבים מarterioles, נימים, וvenules, הם מעורבים במגוון רחב של מחלות כגון סרטן, דלקת, או סוכרת. לכן זה חיוני כדי לפתח שיטות להערכת מבנה דם קטן ותפקוד כמותית. הדמיה מאפשרת המחקר של microvessels באופן שאינו או מייקר פולשנית, בזמן אמת וin vivo, וצעדים חוזרים ונשנים לאורך זמן באותה החיה 2.
נכון לעכשיו, הדמיה דינמית משופר לעומת זאת, (DCE) 3 משמשת בדרך כלל כדי להעריך את זרימת דם לרקמות. הדמיה משופרת ניגודיות ד....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנת חומר הניגוד
- לFITC-dextran 70 kDa, חומר המוזרק הוא 500 מ"ג / קילוגרם (10 מ"ג FITC-dextran בדילול מלא ב0.1 מיליליטר של תמיסת מלח לעכבר במשקל 20 ז).
- הסוכן לא צריך להיות חשוף יותר מדי זמן לאור. כדי להימנע מהלבנה, מומלץ לכסות את הצינור עם רדיד אלומיניום.
2. הרדמה
- עכברים מורדמים בזריקת intraperitoneal של תערובת של 1:4 של xyl....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
שימוש בנתונים שנאספו, אנחנו יכולים לנתח כמותית פרמטרים שונים המשקפים את זרימת דם.
למדנו בvivo רשת כלי הדם ההיקפי של גידול במעי הגס שהושתל בעכברי BALB-c באמצעות מערכת fibered confocal videomicroscopy הקרינה (Cellvizio, Maunakea טכנולוגיה, פריז, צרפת 2), לאחר הזרקת חומר ניגוד ניאון macromolecular של ההעמסה isothiocyanate-dextran ( FITC-dextran) עם משקל מולקולרי של 70 kDa (סיגמא אולדריץ, סנט קוונ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מחקר מייקרו מחזורי גידול הפך להיות חיוני בהבנת הפתופיזיולוגיה של צמיחת גידול, הפצה ותגובה לטיפול 1. הדמיה אופטית היא אחת הטכניקות שיכולים לשמש כדי לבחון את נימי הדם באמצעות חומר ניגוד ניאון ולכמת (צפיפות פונקציונלית נימי) מורפולוגיים ופרמטרים תפקודיים (זליגת מדד).
יש ההדמיה מיקרוסקופ פלואורסצנטי ששמשנו במחקר זה גם יתרונות ומגבלות. אחד יתרונות הוא יכולת לבחור את גודל חומר הניגוד בשימוש של. כאן, עם 70-kD.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
יש לנו מה למסור.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אינסולין serynge Myjector 1 מ"ל 29G | Terumo Europe | BS-05M2913 | |
| פלואורסצאין איזותיוציאנט-דקסטרן 70 kDa | סיגמא-אולדריץ' | 01619HH | 100 מ"ג/מ"ל מדולל במי מלח |
| מיקרוסקופיה קונפוקלית סיבים | Cellvizio - MaunaKea Technologies | ||
| ערכת כיול וניקוי עבור LEICAFCM1000 | Leica Microsystems | חנות LSU-488 | ב-4 מעלות; C |
| Probe ProFlexTM Z | MaunaKea Technologies | ||
| תוכנת פסיפס | MaunaKea Technologies | ||
| תוכנה לזיהוי כלי שיט | MaunaKea Technologies |
מקורות
- Folkman, J. Fundamental concepts of the angiogenic process. Curr Mol Med. 3 (7), 643-651 (2003).
- Laemmel, E., Genet, M., Le Goualher, G., Perchant, A., Le Gargasson, J. F., Vicaut, E. Fibered confocal fluorescence....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
