מאמר זה מציג מתודולוגיה שלמה להכין ולשמור במבחנה פרוסות בהיפוקמפוס חריפות מעכברים בוגרים. פרוטוקול זה מאפשר הקלטה של הגברה לטווח ארוך לטווח ארוך מאוד יציב (LTP) ליותר מ 8 שעות עם שיעור הצלחה של 95%.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הכנה משופרת ושימור פרוסות עכבר היפוקמפוס להקלטה יציבה מאוד ושחזור של הגברה לטווח ארוך
במאמר זה
סיכום
תקציר
הגברה לטווח ארוך (LTP) הוא סוג של פלסטיות הסינפטית מתאפיין בעלייה בכח הסינפטי והאמינה להיות מעורבים בקידוד זיכרון. LTP שהושרו באזור CA1 של פרוסות בהיפוקמפוס חריפות, נחקר בהרחבה. עם זאת את המנגנונים המולקולריים שבבסיס שלב התחזוקה של תופעה זו עדיין הם הבינו היטב. זה יכול להיות גם בגלל תנאי הניסוי השונים המשמשים במעבדות שונות. ואכן, שלב התחזוקה של-LTP הוא מאוד תלוי בפרמטרים חיצוניים כמו חמצון, טמפרטורה ולחות. זה גם תלוי בפרמטרים פנימיים, כמו נטייה של מטוס החיתוך וכדאיות פרוסה לאחר נתיחה.
אופטימיזציה של כל הפרמטרים הללו מאפשרת אינדוקציה של potentiation מאוד לשחזור ומאוד יציב לטווח ארוך. מתודולוגיה זו מציעה את האפשרות להמשיך לחקור את המנגנונים המולקולריים מעורבים בגידול היציבבחוזק סינפטי בפרוסות בהיפוקמפוס. זה גם מדגיש את החשיבות של תנאי ניסוי במבחנה בחקירה של תופעות neurophysiological.
מבוא
כיום, יש הבנה מוגבלת של איך זכרונות מאוחסנים מורכבים ונזכרו ברמת המעגל העצבית. עם זאת, השערה מאחדת של זכרון אחסון זמינה ומקובל באופן כללי: זכרונות מאוחסנים כשינויים בעוצמת קשרים סינפטיים בין תאי עצב במערכת העצבים המרכזית. בכוחות עצמו, מחקר על פלסטיות הסינפטית יש נהנה במידה רבה משתי תגליות פריצת דרך. (1) בניסוי זרע, בליס ו1 Lomo, תוך שימוש בהרדמה הארנב בשלמותה, מצאו כי מסירה של תדר גבוה קצר (1 שניות, 100 הרץ) גירוי לנתיב perforant של ההיפוקמפוס שנגרמה לטווח ארוך (כמה שעות) להגדיל בקשרים סינפטיים בנושא. תופעה מרתקת זו נקראה "הגברה לטווח ארוך" או LTP על ידי דאגלס וגודארד בשנת 1975 2. (2) בהמשך, נמצא כי תופעה ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
נהלי כל החיה בוצעו על פי מכון הלאומי לתקנות בריאות לטיפול ושימוש בבעלי החיים במחקר ובהסכמה של ועדת האתיקה המקומית.
1. הכנת נוזל השדרה Cerebro-מלאכותי
אותה התקשורת משמשת לנתח, לחתוך וperfuse פרוסות (1 מ"ל / דקה) במהלך תקופת מנוחה ואת קלטות אלקטרו. מדיה זו מורכבת מ124 מ"מ NaCl, 4.4 מ"מ KCl, 26 מ"מ NaHCO 3, 1 מ"מ אא 2 PO 4, 2.5 מ"מ CaCl 2, 1.3 מ"מ MgSO 4 ו-D-גלוקוז 10 מ"מ.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
מתודולוגיה זו נעשתה שימוש כדי לנתח את המאפיינים של הגברה לטווח ארוך לטווח ארוך הנגרם בפרוסות בהיפוקמפוס חריפות מעכברים בוגרים (C57BL/6J Janvier SAS, צרפת) 14. באופן מפתיע, שיפור של תנאי הניסוי הוביל לדרך חדשה להסתכל על LTP. אנחנו הראיתי כי עלייה ארוכת טווח בחוזק סינפטי לא דורשת סינתזה של חלבונים חדשים.
כאן, אנו מראים כי האינדוקציה LTP תלויה בכדאיות ורגישות פרוסות. גדלה כאשר הנתיחה של ההיפוקמפוס הייתה א.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פיתחנו במעבדה שלנו וכתוצאה מפרוטוקול השילוב של שיטות שפותחו והופעל על ידי מעבדות אחרות בעלי מומחיות גדולה בLTP הקלטות 11,17. פרוטוקול זה מותאם ליפוקמפוס עכבר המבוגר, וניתן להשתמש בבעלי חיים, בכל גיל ובכל גנוטיפ רקע. זה גם מאפשר ניתוח של LTP בעכברים מהונדסים לפתח מחלות ניווניות כמו אלצהיימר 18,19.
ניצול של פרוטוקול זה לפרוסות בהיפוקמפוס חולדה יכול להצריך כמה עיבודים. לדוגמה, רוב המחקרים שבוצע.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
תודות
אנו מודים ברנרד Foucart לקבלת סיוע טכני. עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הבלגית למחקר מדעי (FRS-FNRS) ועל ידי קרן מלכת אליזבט למחקר רפואי. אגנס Villers הוא עמית מחקר בקרן הבלגית למחקר מדעי.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>ריאגנט/חומר | |||
| NaCl | סיגמא - Aldrich | S7653 | |
| NaHCO3 | Sigma - Aldrich | S8875 | |
| KCl | Sigma - Aldrich | P9333 | |
| D-glucose | Sigma - Aldrich | G7528 | |
| NaH2PO4 | סיגמא - אולדריץ' | S9638 | |
| MgSO<תת>4 1M | סיגמא - Aldrich | 63126 | |
| CaCl2 | Sigma - Aldrich | C4901 | |
| קרבוגן | אוויר נוזלי (בלגיה) | ||
| נימים | WPI, Inc. (בריטניה) | TW150-4 | |
| אלקטרודות מגרות | FHC (ארה"ב) | CE2B30 | |
| כלים כירורגיים | FST (גרמניה) | ||
| נייר סינון 84 g/m2 | Sartorius | FT-3-105-110 | |
| Mesh | Lycra | 15 den | |
| Glue | UHU | plus endfest300 | |
| Instrument | |||
| Amplifier | WPI, Inc. (UK) | ISO-80 | |
| תא הקלטת ממשק | FST (גרמניה) | ||
| משאבות פריסטלטיות | גילסון (ארה"ב) | בקר טמפרטורה Minipuls 3 | |
| אוניברסיטת אדינבורו | www.etcsystem.com | ||
| Tissue Chopper | Mcllwain | ||
| ממריצים | דשא (ארה"ב) | S88X + SIU-V | |
| ניתוח תוכנית | WinLTP | www.winltp.com | |
| מיקרומניפולטורים | Narishige | MM-3 ו-MMO-220A | |
| מיקרוסקופ כירורגי | Leica Microsystem | ||
| ממיר A/D | מכשירים לאומיים | סדרת NIPCI-6229 M |
מקורות
- Bliss, T. V., Lomo, T. Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the anaesthetized rabbit following stimulation of the perforant path. J. Physiol. 232 (2), 331-356 (1973).
- Douglas, R. M., Goddard, G. V.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
