הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בידוד של תאים חיסוני רקמת שומן

36.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/50707

⸱

22 במאי 2013

 ,  , 
1Department of Molecular Physiology and Biophysics, Vanderbilt University School of Medicine

במאמר זה

סיכום

רקמת שומן (AT) היא אתר של הפעלת תא חיסונית חזקה ואינטראקציה. כמעט בכל התאים של המערכת החיסונית נמצאים בAT ויחסים שלהם שונו על ידי השמנת יתר. בידוד נכון, כימות, ואפיון של אוכלוסיות בתא חיסון הם קריטיים להבנת תפקידם במחלה immunometabolic.

תקציר

הגילוי של חדירת מקרופאג גדל ברקמת השומן (AT) של מכרסמים ובני אדם סובלים מהשמנת יתר הוביל להתגברות העניין בתרומה של תאים חיסונית לעמידות לאינסולין מקומית ומערכתית. בידוד וכימות של אוכלוסיות תאי חיסון שונות ברזה והשמנת יתר בחברה הוא טכניקה מנוצל בדרך כלל במעבדות immunometabolism; טיפול עדיין קיצוני יש לנקוט הן בבידוד בתא בכלי דם סטרומה וניתוח תזרים cytometry כך שהנתונים המתקבלים הוא אמין ולפרש . בסרטון הזה אנחנו מדגימים איך בשר טחון, לעכל, ולבודד את החלק היחסי של כלי הדם המועשר בתאי סטרומה החיסונית. כתוצאה מכך, אנו מראים כיצד מקרופאגים נוגדני התווית ולימפוציטים מסוג T וכיצד כראוי שער עליהם בניסויי cytometry זרימה. חלקות זרימת cytometry נציג מעכברים שמנים שאוכלים שומן רזים וגבוהים בשומן האכילו נמוכים מסופקות. אלמנט קריטי של ניתוח זה הוא השימוש בנוגדנים שעושיםלא לזרוח בערוצים שבו במקרופאגים הם autofluorescent אופן טבעי, כמו גם שימוש בפקדי פיצוי הולם.

מבוא

מבחינה היסטורית, רקמת השומן (AT) כבר נתפסה כאיבר אדיש של אחסון שומנים בדם, שמתרחב ומתכווץ בתגובה למאזן אנרגיה. כעת אנו מבינים כי AT מייצג איבר האנדוקרינית דינמי שמפריש באופן פעיל מספר ההורמונים, אשר משפיעים באופן ישיר התנהגות אכילה והומאוסטזיס הגלוקוז מערכתי. בנוסף, בעשור האחרון חלה עלייה הולכת וגובר לאוכלוסיות הרבות של תאים חיסוניים המתגוררות בכל חלק סטרומה וסקולרית (SVF), כמו גם את תרומתם ל-AT הומאוסטזיס.

היכולת להפריד בין AT adipocyte וSVF באמצעות לעכל collagenase אחריו צנטריפוגה ההפרש תואר לראשונה בשנת 1964 על ידי Rodbell 1. Collagenase השני משמש לרוב להפרדת adipocyte וSVF בשל תחזוקה של הקולטנים לאינסולין adipocyte 1. חלוקה במוקדם, האנזימטית של AT הייתה בעיקר מועסק ללמוד adipocyte חילוף חומרים וכדי לבודד preadipocytes. לאחרונה, בטכניקה זו, בשילוב עם הזמינות הנרחבת של cytometers הזרימה ומספר הגדל וההולך של נוגדני fluorophore-מצומדות זמינים מסחרי, יש להקל אפיון של AT תאים חיסוניים.

למרות נוכחותם של תאי מערכת חיסונית בדלקת שתוארה בעבר 2, את המסמכים על ידי הזרע וייסברג ואח'. ושו et al. פורסם בשנת 2003 היו הראשון לתעד את ההצטברות של AT מקרופאגים (כספומטים) בהשמנה יתר, אשר מפרישה ציטוקינים דלקתיים ולתאם עם תנגודת לאינסולין AT ספציפית ומערכתית 3,4. תצפיות אלה שימש כבסיס לשדה חדש של חקירה לאחרונה שטבע, "immunometabolism," 5 וכבר במעקב על ידי מחקרים לכך לאוכלוסיות תאי חיסון שונות, כוללים תאים דנדריטיים, תאי פיטום 6 7, 8 תאי T -10, 11, תאי B NKT תאים 12, 13, אאוזינופילים ונויטרופילים 14,15 בהתפתחות של תנגודת לאינסולין השמנת יתר קשור.

מטרת מאמר זה היא לספק תיאור מפורט של הטכניקה לעכל collagenase משמשת לבודד תאים של AT SVF ולאפיין כספומטים ו-AT תאי T באמצעות cytometry הזרימה. פרוטוקול זה כבר מותאם לעכבר ב, עם זאת, צופים יכולים ליהנות מקריאת מאמר מצוין המספק פירוט נרחב על אופטימיזציה של טכניקה זו לאדם בגיל 16. קהל היעד של מאמר זה כולל חוקרים בעלי ניסיון מוגבל בעבודה עם עכבר ובביצוע cytometry זרימה. כמה שיקולים מעשיים לאיזון תשואה סלולרית וכדאיות עם זמן ומשאבים מוצגים כמו גם בקרות cytometry זרימה אופטימליות לאפיון AT אוכלוסיות תאים חיסוניים. בנוסף לפרוטוקול שלנו, קוראים referrאד למאמר יופיטר לאחרונה על ידי Basu et al. לדיון מצוין של חלק מההיבטים הטכניים של cytometry זרימה לכוללים בקרות ופיצויים נאותות 17.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. חומרים כימיים ומתכלה

לפני שתתחיל בפרוטוקול הניסוי הזה, להכין את ריאגנטים הבאים:

  1. 70% אתנול
  2. 1X PBS
  3. 1X DPBS (ללא Ca וMg) בתוספת 0.5% BSA
  4. FACS חיץ: 1X DPBS (ללא Ca ומ"ג), 2 mM EDTA, ו -1% FCS
  5. חיץ ACK: Cl 150 מ"מ NH 4, 10 מ"מ 3 KHCO, ומ"מ Na 2 EDTA 0.1 במים

2. קצירת והכנה של רקמת שומן

  1. להרדים עכברים על פי נהלים שאושרו IACUC ספציפיים לכל מוסד.
  2. יסודיות להרטיב את הפרווה עם 70% אתנול.
  3. עושה חתך ברמה של תהליך xiphoid (חלק תחתון של עצם החזה) ולפתוח את חלל בית החזה כדי לחשוף את הלב, נזהר שלא לנתק את כל כלי דם גדולים.

הערה: בשלב זה, היא גם מועילה להשאיר את הדיאפרגמה שלמה ככל אפשר ולחתוך חריץ מהצד של כלוב הצלעות הימני כדי לאפשר לדם לזרום וperfusate מתוך חלל בית החזה.

  1. קליפ העלייה הימנית כדי לאפשר לדם וperfusate להימלט מערכת הדם.

שים לב: כאשר מתמודדים עם עכברים שמנים, קרום לב עודף בייתכן שיהיה הצורך להסיר על מנת לאפשר גישה אל הלב.

  1. לתפוס את הלב עם מלקחיים ובעדינות להכניס מחט לתוך החדר השמאלי דרך הקודקוד. לאט perfuse העכבר עם 15 מ"ל סטרילי PBS.

שימו לב: להפחית את שיעור זלוף אם הריאות מתחילות למלא ולהרחיב.

  1. פתח את חלל הצפק ולהסיר את רפידות שומן perigonadal באמצעות טיפול, כדי למנוע כל רקמות האשכים.
  2. הנח כריות שומן במשקל סירה על קרח המכיל 2 DPBS מ"ל 1X (ללא מ"ג או Ca) בתוספת 0.5% BSA, ובשר טחון AT לחתיכות דקות.

התחת = "jove_content"> הערה: הגבל את כמות AT לשוקלת סירה עד 1.2 גרם. אם הכמות של AT עולה על 1.2 גרם, לחלק אותו שווה בשווה בין שתי סירות שוקלות.

  1. לשמור על דגימות על קרח ולהכין לעכל פתרון מיליליטר collagenase 3 לכל מדגם AT בהיקף של 1X DPBS בתוספת 0.5% BSA, 10 מ"מ CaCl 2, ו -4 מ"ג / מיליליטר collagenase, מהסוג II.

3. עיכול collagenase

  1. העברה לצינורות חרוטי 50 מ"ל על ידי שפיכת homogenate ושטיפת סירה לשקול עם 1 DPBS מ"ל (0.5% BSA) ופתרון לעכל מיליליטר collagenase השני 3.
  2. לדגור על homogenate בייקר סיבובי (200 סל"ד) על 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.
  3. הוסף 10 מ"ל DPBS (0.5% BSA) לצינורות החרוטים ומניחים על קרח.
  4. Triturate homogenate פעמים רבות באמצעות פיפטה סרולוגיות 10 מ"ל, ולהעביר השעיות תא דרך 100 מיקרומטר במסנן לצינור חדש 50 מיליליטר חרוטי.
  5. צנטריפוגה השעיה תא בXG 500 עבור 10 דקות ב 4 & Dלמשל, ג
  6. למזוג supernatant ו resuspend תא גלולה SVF במאגר ACK 3 מ"ל לlyse מזהמים אריתרוציטים.
  7. הוסף חיץ FACS מ"ל 12 והשעית תא צנטריפוגות ב XG 500 עבור 10 דקות ב 4 ° C.
  8. למזוג supernatant ו resuspend תא גלולה ב SVF חיץ FACS.

הערה: השתמש בגודל של התא גלולה כמדריך לכמה חיץ FACS לresuspend פנימה אם התא גלולה מכסה את החלק התחתון של צינור חרוטי 50 מ"ל, השתמש 0.5-1 חיץ FACS מ"ל, אחרת resuspend ב0.25-0.5 מ"ל.

  1. דגימות מניחים על קרח ולהכין aliquots דילול 1:10 של כל דגימה לספירת תאים על ידי ערבוב 40 μl חיץ FACS, פתרון כחול 50 μl trypan (0.2%), ו10 השעיה תא μl.
  2. ספירת תאי קיימא המבוסס על הרחקת trypan הכחולה ולדלל השעיות תא לריכוז סופי של x 05-10 אוקטובר 6 תאים / מ"ל.

4. צביעה של אנטיגנים תא שטח

  1. הוסף אנטי עכבר CD16/CD32 נוגדן (FC בלוק) לריכוז סופי של 0.5-1 μg/10 6 תאים, ולדגור על קרח למשך 10 דקות.
  2. דגימות העברה (≥ 10 6 תאים) עד 12 x 75 צינורות תחתית עגולות קלקר מ"מ. הכן צינורות נפרדים אם ניתוח כספומטים ותאי T, ולשלב את תאים נוספים כדי להכין מספר מספיק של צינורות כדי להתאים את הפיצוי הנדרש וקרינה שונה מינוס אחד (FMO) פקדים.

הערה: כדוגמה, כאשר כימות שיעור הכספומטים המבוסס על פקדי FMO F4/80 וCD11b, הפיצוי הבא ויצטרך להיות מוכנים:

- מחולל (תאים)

- DAPI או יודיד propidium (PI) כתם בודד (תאים, לא להוסיף צבע כדאיות עד שלב 5.1)

- F4/80 APC (תאים או חרוזים פיצויים) כתם בודדים

- CD11b FITC תאים בודדים או כתם (חרוזים פיצויים)

- FMO 1 (תאים): + + CD11b FITC צבע כדאיות עכברוש IgG2a κ אלוטיפ השליטה APC (הוסיף בשלב 5.1)

- FMO 2 (תאים): F4/80 APC + עכברוש IgG2b κ אלוטיפ השליטה FITC + צבע כדאיות (הוסיף בשלב 5.1)

  1. הוסף נוגדנים fluorophore-מצומדות עיקריים ו / או פקדי אלוטיפ בריכוז המתאים (ראה טבלה של חומרים כימיים וחומרים).
  2. הגן על דגימות מאור ודגירה על 4 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
  3. הוסף חיץ FACS מ"ל 2 והשעית תא צנטריפוגות ב XG 500 במשך 5 דקות ב 4 ° C.
  4. למזוג supernatant ו resuspend תא גלולה ב SVF 2 חיץ FACS מ"ל.
  5. צנטריפוגה XG תא ההשעיה 500 דקות 5 ב 4 ° C, ו resuspend תא גלולה ב SVF ≥ 400 חיץ FACS μl.
  6. העבר את הדגימות ל12 x 75 צינורות תחתית עגולות קלקר מ"מ מאובזר עם 35 סטרפלס מסננת תא מיקרומטר.
  7. להגן מפני אור, ודגימות חנות ב 4 מעלות צלזיוס עד ניתוח FACS.

הערה: לקבלת תוצאות אופטימליות יש לנתח תאי immeadiately, עם זאת, ניתוח FACS עם פרוטוקול זה נערך בהצלחה על תאים שכותרתו מאוחסנים במאגר FACS ל1-2 שעות ב 4 ° C. אם תאים צריכים להיות קבועים כדי להגדיל את זמן אחסון, ניתן לתקן תאים שכותרתו עם paraformaldehyde 2% על 4 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות לפני ניתוח FACS. חברות נוגדנים מצביעות על כך שניתן לאחסן את תאי שכותרתו לתקופה של עד שבוע אחד, עם זאת, זה לא נבדק במסגרת הליך זה.

5. ניתוח FACS

  1. לפני ניתוח FACS, להוסיף צבע כדאיות לדגימות ובקרות מתאימות כדי לאפשר לאפליה תא חי / מת.

הערה: צבעי כדאיות רבים זמינים באופן מסחרי, אבל DAPI וPI מומלצים בהתאם לפרופ 'עירור / פליטהIles של נוגדני fluorophore-מצומדות בשימוש. DAPI ויודיד Propidium מתווספים לכל דגימה בריכוז סופי של 0.2 מ"ג / מ"ל.

  1. השתמש במדגם בלא כתם שלילי שליטה, רצוי תאים מבודדים מאותה הרקמה כמו דגימות ניסוי, כדי להתאים את פיזור צד (SSC) ופיזור קדימה (FSC), כך שאוכלוסיית התא (ים) של עניין הן בקנה מידה.

הערה: לניתוח של AT תאי SVF, מומלץ שSSC יוצג בקנה מידה לעומת יומן FSC בקנה מידה ליניארי. השימוש בקנה מידת יומן לSSC חשוב במיוחד בעת ניתוח כספומטים, שהן לעתים קרובות גדולות מאוד ופרטניות.

  1. צייר שער פיזור אור ראשוני המבוסס על הסוג של התא (ים) להיות מנותחים, ולהתאים את הצינור המכפיל (PMT), כך שעלייה בתאים בלא הכתם הם בקצה שמאלי של ההיסטוגרמה פרמטר יחיד (מרוכז כ ב -10 ב2) עבור הערוצים המתאימים.

הערה: מומלץ שלימפוציטים ומקרופגים (או תאי מיאלואידית אחרים) להיות מנותחים בנפרד בשל הבדלים בautofluorescence.

  1. שימוש בפקדים מוכתמים בודדים או חרוזים פיצויים ללכוד נוגדנים לבצע פיצוי צבע רב.

הערה: השימוש בחרוזי פיצויים מומלץ, עם זאת, התאימות של כל נוגדן חייבת להיות מובטחת. לדוגמה, חרוזים פיצוי עשויים שלא לחצות-מגיבים עם נוגדני ארנבות, במקרה שבו תאים מבודדים נדרשים להשיג שליטת כתם יחידה מתאימה.

  1. קבע שערים ניסיוניים המבוססים על פקדי FMO שונים.
  2. הגדר את cytometer הזרימה לאסוף את המספר המתאים של אירועים המבוססים על השכיחות של האוכלוסייה של עניין ולהקליט את נתוני ניסוי.
  3. קבצי נתונים FCS יצוא לניתוח מצב לא מקוון. ישנם מספר רב של תוכניות זמינות לcytometr הזרימהניתוח נתונים y. אנו ממליצים Cytobank, פלטפורמה מבוססת אינטרנט המאפשרת investigatores לאחסן ולנתח נתונים וליצור דמויות מכל מחשב עם גישה לאינטרנט 18. בנוסף, Cytobank מציע את היכולת לבצע ציבור נתונים נגיש או להגביל את הגישה למשתפי פעולה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

עיכול collagenase של AT אחריו צנטריפוגה ההפרש שימש לבודד את SVF מרפידות שומן epididymal של עכברים ממין זכר C57BL/6J האכיל שומן נמוך (10% מקלוריות שומן) או שומן גבוה (60% קלוריות משומנים) דיאטה (LFD וHFD , בהתאמה) במשך 16 שבועות. תאים של SVF אז תויגו עם נוגדנים ראשוניים fluorophore-מצומדות לכמת את שיעור הכספומטים קיימא (איור 1) ובתאי T (איור 2) באמצעות ניתוח FACS. gating הראשוני, כולל פיזור אור, אפליה כפיל, ושערים כדאיות מתואר באיורים 1 א &...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

עניין גובר בתפקידה של המערכת החיסונית בהשלכות מטבוליות של השמנה הוביל לשימוש הנרחב בזרימת cytometry לאפיין תאים חיסוניים של AT. אף על פי הפרוטוקול המדויק ישתנה בין מעבדות המבוססות על הניסיון שלהם וציוד זמין, כוללים את השלבים הקריטיים עיכול collagenase, צנטריפוגה ההפרש, וסימון אנטיגן פני תא. מטרתו של המאמר הנוכחי היא לספק לפרוטוקול מפורט ומדריך מעשי לבידודה של AT SVF לחוקרים בעלי ניסיון מוגבל בעבודה עם AT ו / או ביצוע cytometry זרימה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

יש לנו מה למסור.

תודות

התזמורת סימפונית נתמכת על ידי NIH רות ל 'Kirschstein NRSA (F32 DK091040), AK נתמך על ידי מלגת דוקטורים מהאגודה האמריקנית לסוכרת (7-10-MI-05), והוא נתמך על ידי אהה פרס איגוד לב אמריקאי הוקם חוקר (12EIA8270000). ניסויי cytometry זרימה בוצעו במשאבים משותפים Cytometry זרימת VMC. משאבי cytometry זרימת VMC משותפים נתמך על ידי המרכז לחקר מחלות העיכול ונדרבילט (DK058404).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DPBS (ללא Ca או Mg) 10 x 500 מ"לLife Technologies14190-250
DAPILife TechnologiesD3571
BSASigmaA2153-100G
קולגנאזSigmaC6885-5G
תמיסת יודיד פרופידיוםסיגמאP4864-10 מ"ל
ערימה יציבה 20 מיקרוליטרRaininSS-L10
20 מיקרוליטר טיפים מסנןRaininSRL10F
מחסנית יציבה 250 מיקרוליטר טיפיםRaininSS-L250
1000 מיקרוליטר טיפיםRaininGPS-L1000
1000 מיקרוליטר טיפים מסנןRaininGP-L1000F
250 מיקרוליטר טיפים לסנןRaininSR-L200F
FC בלוקBD Biosciences553142
פישר 100 דקות מסננותפישרברנד22-363-549
צלחת במשקל בינוניפישרברנד02-202B
רדיד אלומיניוםפישרברנד1213100
מספריים טחינהפישרברנד089531B
וורטקספישרברנד2215365
צינורות חרוטיים 50 מ"לBD Falcon14-959-49A
צינורות FACS עליונים מסנניםBD Falcon352235
10 מ"ל נרתיק פיפטה 200BD Falcon1367520
צינורות תחתונים עגוליםBD Falcon352058
5 מ"ל מזרקBD Falcon309646
V צלחות תחתונותCostar07-200-107
העברת נורת פיפטהThermo Scientific13-711-22
שייקרThermo Scientific11 676 071
מחצלת דבקThermo Scientific1368750
צנטריפוגהתרבית תאים Sorvallמתאמי 75253839
Sorvall75003723
חולדה נגד עכבר CD16 / CD32BD Biosciences553142ריכוז: 0.5 - 1 μ g/ 106 תאים
חולדה נגד עכבר F4/80eBioscience17-4801מצומד פלואורופור: APC
ריכוז: 0.2 μ g/ 106 תאים
מספר קטלוגי בקרת איזוטיפ: 17-4321
עכברוש נגד עכבר CD11beBioscience11-0112מצומד פלואורופור: FITC
ריכוז: 0.5 μ g/ 106 תאים
מספר קטלוגי בקרת איזוטייפ: 11/1/4031
אוגר ארמני נגד עכבר CD11ceBioscience12-0114מצומד פלואורופור: PE
ריכוז: 0.8 μ g/ 106 תאים
מספר קטלוגי בקרת איזוטיפ: Dec-88
עז נגד עכבר MGL1/2R& D SystemsFAB4297Pמצומד פלואורופור: PE
ריכוז: 0.1 μ g/ 106 תאים
מספר קטלוגי בקרת איזוטיפ: IC108P
עז נגד עכבר CD206R& D SystemsFAB2535Pמצומד פלואורופור: PE
ריכוז: 0.1 μ g/ 106 תאים
מספר קטלוגי בקרת איזוטיפ: IC108P
Rat נגד עכבר CCR2R& D SystemsFAB5538Pמצומד פלואורופור: PE
ריכוז: 0.1 μ g/ 106 תאים
מספר קטלוגי בקרת איזוטיפ: IC013P
אוגר ארמני נגד עכבר TCRβBD Biosciences553174מצומד פלואורופור: APC
ריכוז: 0.2 μ g/ 106 תאים
מספר קטלוגי בקרת איזוטיפ: 553956
Rat anti-mouse CD8aBD Biosciences552877מצומד פלואורופור: PE-Cy7
ריכוז: 0.8 μ g/ 106 תאים
מספר קטלוגי בקרת איזוטיפ: 552784
Rat anti-mouse CD4BD Biosciences557956מצומד פלואורופור: Alexa Fluor 700
ריכוז: 0.2 μ g/ 106 תאים
מספר קטלוגי בקרת איזוטיפ: 557963

טבלה 1. רשימת חומרים וריאגנטים.

מקורות

  1. Rodbell, M. Metabolism of Isolated Fat Cells. I. Effects of Hormones on Glucose Metabolism and Lipolysis. The Journal of Biological Chemistry. 239, 375-380 (1964).
  2. Danse, L. H., Verschuren, P. M. Fish oil-induced yellow fat disease in rats. III. Lipolysis in affected adipose tissue. Veterinary Pathology. 15, 544-548 (1978).
  3. Weisberg, S. P., et al. Obesity is associated with macrophage accumulation in adipose tissue. The Journal of Clinical Investigation. 112, 1796-1808 (2003).
  4. Xu, H., et al. Chronic inflammation in fat plays a crucial role in the development of obesity-related insulin resistance. The Journal of Clinical Investigation. 112, 1821-1830 (2003).
  5. Mathis, D., Shoelson, S. E. Immunometabolism: an emerging frontier. Nature Reviews. Immunology. 11, 81(2011).
  6. Stefanovic-Racic, M., et al. Dendritic cells promote macrophage infiltration and comprise a substantial proportion of obesity-associated increases in CD11c+ cells in adipose tissue and liver. Diabetes. 61, 2330-2339 (2012).
  7. Liu, J., et al. Genetic deficiency and pharmacological stabilization of mast cells reduce diet-induced obesity and diabetes in mice. Nature Medicine. 15, 940-945 (2009).
  8. Feuerer, M., et al. Lean, but not obese, fat is enriched for a unique population of regulatory T cells that affect metabolic parameters. Nature Medicine. 15, 930-939 (2009).
  9. Nishimura, S., et al. CD8+ effector T cells contribute to macrophage recruitment and adipose tissue inflammation in obesity. Nature Medicine. 15, 914-920 (2009).
  10. Winer, S., et al. Normalization of obesity-associated insulin resistance through immunotherapy. Nature Medicine. 15, 921-929 (2009).
  11. Winer, D. A., et al. B cells promote insulin resistance through modulation of T cells and production of pathogenic IgG antibodies. Nature Medicine. 17, 610-617 (2011).
  12. Wu, L., et al. Activation of invariant natural killer T cells by lipid excess promotes tissue inflammation, insulin resistance, and hepatic steatosis in obese mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109. , 1143-1152 (2012).
  13. Wu, D., et al. Eosinophils sustain adipose alternatively activated macrophages associated with glucose homeostasis. Science. 332, 243-247 (2011).
  14. Elgazar-Carmon, V., Rudich, A., Hadad, N., Levy, R. Neutrophils transiently infiltrate intra-abdominal fat early in the course of high-fat feeding. Journal of Lipid Research. 49, 1894-1903 (2008).
  15. Talukdar, S., et al. Neutrophils mediate insulin resistance in mice fed a high-fat diet through secreted elastase. Nature Medicine. 18, 1407-1412 (2012).
  16. Hagman, D. K., et al. Characterizing and quantifying leukocyte populations in human adipose tissue: impact of enzymatic tissue processing. Journal of Immunological Methods. 386, 50-59 (2012).
  17. Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. Purification of specific cell population by fluorescence activated cell sorting (FACS). J. Vis. Exp. (41), e1546(2010).
  18. Kotecha, N., Krutzik, P. O., Irish, J. M. Web-based analysis and publication of flow cytometry experiments. Current Protocols in Cytometry. Chapter 10, Unit 10(2010).
  19. Cho, C. H., et al. Angiogenic role of LYVE-1-positive macrophages in adipose tissue. Circulation Research. 100, e47-e57 (2007).
  20. Roederer, M. Spectral compensation for flow cytometry: visualization artifacts, limitations, and caveats. Cytometry. 45, 194-205 (2001).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

שבר וסקולרי סטרומליניתוח בציטומטריה של זרימהעיכול בקולגנאזסנטריפוגציה דיפרנציאליתנוגדנים מצומדים ל-Fluoro Fourכימות מקרופאגיםהגדרת אוכלוסיות (Gating) של תאי Tצביעת חיוניותבקרות קומפנסציה
בידוד של תאים חיסוני רקמת שומן
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.