משלוח תא intramyocardial במודלים עכבריים של מחלות לב וכלי דם, כגון יתר לחץ דם או אוטם שריר הלב, הוא בשימוש נרחב כדי לבדוק את הפוטנציאל הטיפולי סוגי תאים שונים במחקרי התחדשות של. לכן, תיאור מפורט ויזואליזציה ברורה של הליך כירורגים זה יעזרו להגדיר את הגבולות ואת היתרונות של ניתוחים טיפוליים תא לב וכלי דם במכרסמים קטנים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
משלוח הנייד intramyocardial: תוכן בלבבות Murine
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחקרים קודמים הראו כי משלוח התא מקדם שיפור תפקוד לב על ידי שחרורו של ציטוקינים וגורמים המגבירים revascularization רקמת לב והישרדות תא. בנוסף, תצפיות נוספות העלו כי יש תאי גזע ספציפיים, כגון תאי גזע לב, תאי גזע mesenchymal וcardiospheres היכולת לשלב בתוך שריר הלב שמסביב על ידי הבחנה לתוך שריר לב, תאי שריר חלק ותאי האנדותל.
כאן, אנו מציגים את החומרים ושיטות כדי לספק באופן אמין תאי noncontractile לתוך הקיר של החדר השמאלי של עכברי immunodepleted. הצעדים הבולטים של הליך microsurgical זה כרוך בהרדמה והזרקת שיכוך כאבים, אינטובציה intratracheal, חתך כדי לפתוח את החזה ולחשוף את הלב ואספקה של תאים על ידי מחט 30 מד סטרילי ומזרק microliter דיוק.
עיבוד רקמות בהיקף של קצירת לב, embedding, חתך וצביעה היסטולוגית הראתה כי הזרקת תאי intramyocardial הופקה נזק קטן באזור epicardial, כמו גם בקיר של החדר. תאי Noncontractile נשמרו לתוך קיר שריר הלב של עכברי מדוכאי חיסון והיו מוקפים בשכבה של רקמת fibrotic, עשוי להגן מפני לחץ לב ועומס מכאני.
מבוא
פרוטוקולי מסירת תאים שונים נבדקו במודלים עכבריים ועכברושים של מחלות לב וכלי דם, במטרה לתרגם את היעילות, היעילות ובטיחות של הליך הניסוי בחולים אנושיים. בלב מכרסם קטן, משלוח תא intramyocardial הוא השיטה ריאלי ביותר של תא משלוח 1,2, ואילו בלב החולדה antegrade 3 ועירוי תאים 4 intracoronary מדרדר יכול לשמש גם. שני שיטות יש יתרונות ומגבלות. יש תא משלוח דרך מסלול intracoronary יתרונות תיאורטי על זריקה תוך שרירית ישירה בקידום הפצה סלולרי הגלובלית 3, אבל יש לה גם את הסיכון לגרימת 3,5 תסחיף כלילית. מגבלות על אספקת intramyocardial משויכות פגיעה מכאנית, דלקת חריפה, ו6,7 נזק ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל המחקרים בבעלי החיים בוצעו בהתאם בינלאומי (הוראת 2010/63/EU של הפרלמנט האירופי) ו( Office Home בריטניה, חוק 1986) הלאומי תקנות. ההליכים המתוארים במסמך זה הם חלק מתכנית העבודה תחת רישיון הרשויות בבריטניה שלנו ולא היה מבוצעים במטרה של הקלטה.
1. הכנת תאים
פרוטוקול זה מתאר את הכנתו של קו תאים ספציפי (כליה עוברי אנושית, HEK293 תאים) למטרות הדגמה. פרוטוקולי תא ספציפי חייבים להיות מועסקים לגידול וסופו של דבר תאי גזע pluripotent או מבוגר לשושלות תאים ספציפיים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
אנו מזריקים HEK293 תאים, שניתן להבחין מתאי הלב על ידי המורפולוגיה שונה שלהם (איור 1), עם צורה מרוצפות בהשוואה לשריר הלב המוארך (איור 1 א). תאי HEK293 היו יותר תגובתי לצבע hematoxylin (צבע כחול) בהשוואה לשריר לב (בצבע ורוד), סביר להניח כי התוכן שלהם המוגבר הגרעיני (איור 1 א). כדי להבדיל עוד יותר את התאים המוזרקים מן הרקמה המארחת, HEK293 תאים תויגו עם DAPI 2 שעות לפני הזריקה. שכותרתו תאים היו גלויים לעין ברקמת שריר הלב כפי שמוצגים <.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בכתב היד הזה, שהראינו כיצד לבצע הזרקת intramyocardial של תאים בלב עכברי. כהוכחה של מתודולוגיה זו, יש לנו להשתמש HEK293 תאים. חשוב להדגיש, כי תאי HEK293 אינם משמשים בכל מחקר טיפול בתא, ולכן הממצאים של כתב היד הזה אינם מתאימים לתרגום ישיר לגישה טיפולית. עם זאת, העובדה כי תאי HEK293 אינם תאי התכווצות ולא transdifferentiate בסוגי תאים אחרים ממקדת את תשומת לב בהיבטים טכניים כגון מאפיינים של התאים כדי להיות מועבר ואת המסלול של משלוח.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
יש המחברים אין לחשוף.
תודות
אנו מודים למגדי יעקוב המכון (MYI) לתמיכה בניתוח מיקרוסקופית ופרויקטים של תיקון לב, טכנאים והמנהל של מתקן בעלי החיים שלנו. עבודה זו נתמכה על ידי קרן הלב הבריטית (BHF), PG/10/019 מענק פרויקט. MPS נתמך על ידי MYI וBHF. TP הוא BHF-מחקר מצוינות עמית. NR הוא אוסטרליה עמית NH & MRC.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מבודד | Pfi | דרושה הצעת מחיר | |
| כרית חימום | Vet Tech Solutions | HE006 | עבור בעלי חיים קטנים |
| Medetomidine | השירות | מרשם וטרינרי הוא הכרחי | |
| קטמין הידרוכלוריד | השירות | מרשם וטרינרי הוא הכרחי | |
| Atipamezole | השירות הווטרינרי הלאומי | מרשם וטרינרי הוא הכרחי | |
| סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים | Jeol | JSM-6610 | |
| מספריים קהים | FST | 14084-09 | |
| Minivent | הרווארד מנגנון | 73-0043 | כולל מתאם Y קטן (73-0027) וצינורית אינטובציה (73-2844) |
| מלקחיים | FST | 11052-10 | |
| מערכת נסיגה | FST | 18200-20 | ערכה לבעלי חיים עד 200 גרם |
| 30 G 12 מ"מ; ½ אינץ' | BBraun | A210 | |
| מזרק מיקרוליטר | משובח ESSLAB | 81201 | כולל גם מתקן חוזר של המילטון PB 600-1 מספר קטלוגי 83700 |
| 6-0 תפר משי | Ethicon | W1614T |
מקורות
- Menasche, P., et al. Myoblast transplantation for heart failure. Lancet. 357, 279-280 (2001).
- Taylor, D. A., et al. Regenerating functional myocardium: improved performance after skeletal myoblast transplantation. Nat. Med. 4, 929-933 (199....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
