הדפנות מפרצת דגם הלסינקי עכברוש Microsurgical

סיכום

מפרצת דופן מיקרו-כירורגית בחולדות נוצרת על ידי אנסטומוזה מקצה לצד של שתל אבי העורקים לאבי העורקים הבטני. אנו מציגים הוראות שלב אחר שלב ודנים בפרטים אנטומיים וכירורגיים ליצירת מפרצת שקית ניסיונית.

תקציר

מודלים מפרצת saccular ניסוי הם הכרחיים לבדיקת אפשרויות טיפול כירורגים וendovascular רומן והתקנים לפני שהם הציגו לתוך פרקטיקה קלינית. יתר על כן, יש צורך במודלים ניסיוניים על מנת להבהיר את הביולוגיה מפרצת המורכבת מובילה לקרע של מפרצת saccular.

כמה סוגים שונים של מודלים ניסיוניים לפרצת saccular הוקמו במינים שונים. רבים מהם, לעומת זאת, דורשים כישורים מיוחדים, ציוד יקר, או סביבות מיוחדות, המגביל את השימוש הנרחב שלהם. מודל ניסיוני פשוט, חזק, ולא יקר שדרוש ככלי סטנדרטי שניתן להשתמש באופן אחיד במוסדות שונים.

המודל מפרצת דפנות אב העורקים בבטן עכברוש מייקרו משלב את האפשרות ללמוד שני אסטרטגיות טיפול endovascular רומן והבסיס המולקולרי של ביולוגיה מפרצת בסטנדרטית וזולאופן. שתלי סטנדרטיים באמצעות צורה, גודל, וגיאומטריה נקצרים מאב העורקים החזי יורדים של חולדה תורם ולאחר מכן הושתלו בעכברי נמען syngenic. מפרצת הם נתפרו מקצה לצד עם רציף או קטע 9-0 תפרי ניילון לאב העורקים בבטן infrarenal.

אנו מציגים הוראות נוהל צעד אחר צעד, מידע על ציוד דרוש, ולדון בפרטים אנטומיים וכירורגים חשובים ליצירת מייקרו מוצלחת של מפרצת דפנות אב העורקים בבטן בחולדה.

מבוא

קרע של מפרצת עורק מוח saccular גורם דימום מסכן חיים מוביל לשבץ, נזק נוירולוגים קבוע, או מוות. קרע ניתן למנוע על ידי אחד גזיר מייקרו או חסימת פרצת endovascular. טיפול רפואי למניעת צמיחה מפרצת וקרע טרם הוקם.

מודלים ניסיוניים לפרצת saccular יש צורך ללמוד את הביולוגיה של מפרצת עורקים ולבדיקה של מכשירים טיפוליים חדשניים ואסטרטגיות. למטרות אלה, כמה דגמים שונים במינים שונים פותחו ופורסמו ^1. מודלים מפרצת גדולות בחזירים, כלבים, ארנבות ומשמשים רצוי כדי לבדוק את חידושי endovascular באדריכלות מפרצת מורכבת ^1,2. מודלים עכבריים מפרצת, ומצד שני, לאפשר בדיקת שאלות מחקר במינים מהונדסים גנטי ^3,4 ולהקל על בירור ביולוגיה מפרצת בתאית ומולקולרירמה טובה בהרבה ממינים גדולים יותר ^1. למרות שטרנס התרדמה endovascular ופריסת מכשיר טרנס הכסל מוגבלת לחולדות גדולות יותר (> 400-500 גר ') וסטנטים קטנים יותר מ2.0 מ"מ ו1.5 מ"מ קוטר ^5,6, יכולים גם להיות ממוקמים סטנטים באמצעות החדרה ישירה לתוך אב העורקים בבטן קטע מחסה מפרצות הניסיוניות. עבודה קודמת באמצעות עכברוש מודל פרצת מייקר בטן דפנות אב העורקים הוכיחה ההיתכנות שלה במכשירי תסחיפי רומן בדיקות והשימוש בו בחקר הבסיס המולקולרי של ביולוגיה מפרצת ^3,7.

רבים מהמודלים מפרצת saccular פורסמו כרגע הניסיוניים דורשים ציוד יקר, סביבות מיוחדות (לדוגמא: חדרי ניתוח סטריליים עם יכולות שיקוף), יכולת רדיולוגיה התערבותית, או שימוש במינים יקרים. דרישות אלו מגבילות את השימוש הנרחב במודלים אלה, ולהוביל לשימוש במודלים שונים במעבדות שונות, אשר מ 'akes השוואת נתונים וניתוח-קשה, אם לא בלתי אפשרי. מודל ניסיוני פשוט, חזק, ולא יקר שדרוש ככלי סטנדרטי שניתן להשתמש באופן סטנדרטי במעבדות שונות כדי לקבל תוצאות דומות מהמוסדות שונים. לשם כך, יצרנו מודל מפרצת אב העורקים החולדה דפנות עורקי saccular.

מטרת דו"ח זה היא להציג הוראות נוהל צעד אחר צעד, מידע על ציוד דרוש, וכדי לדון במאפיינים אנטומיים וכירורגים חשובים ליצירת מייקרו מוצלחת של מפרצת דפנות אב העורקים בבטן בחולדה.

פרוטוקול

הערה: חולדות וויסטר, זכר (משקל גוף ממוצע: 356 ± 44 גרם; 10-14 שבועות) שוכנו בחדר של בעלי החיים ב22-24 ° C ו אור שנים עשר שעות ביממה / מחזור כהה עם גישה חופשית לדיאטה גלולה, במים ברז רגילים וגם קיבל טיפול הומני בקנה אחד עם הנחיות מוסדיות. הניסויים היו נבדקו ואושרו על ידי הוועדה לרווחת בעלי החיים באוניברסיטת הלסינקי, פינלנד.

הערה: בהפגנה הבאה השיטה כירורגית שלנו היא כדלקמן: להרדים את העכברוש על ידי הזרקה תת עורית מותאמת משקל של hydrochloride medetomidine (0.5 מ"ג / קילוגרם) וזריקת intraperitoneal של קטמין הידרוכלוריד (50 מ"ג / קילוגרם). מבחן לחוסר רפלקס הבוהן קמצוץ כדי לאשר שהעכברוש הוא בהרדמה מלאה. החל המשחה העין, קליפ האתר כירורגית, ולנקות את העור בחומר חיטוי מתאים, למשל כלורהקסידין, או באלכוהול או מים. שטוף את הידיים, לשים על ביגוד מגן, כיסוי ראש ופניםמסכה, וכפפות מנתחים סטרילית. יש לי סיוע עוזר כירורגית בשמירה על תנאי ניתוח ספטית ולתעד את המאפיינים כירורגית (כמפורט בטבלה 1). לפקח על עומק ההרדמה כל 15 דקות במהלך ניתוח על ידי ביצוע קצב נשימה, קצב לב, ותגובה לגירוי מזיק (מבחן קמצוץ הבוהן). הזרקה תת עורית של עצירות (0.03 מ"ג / קילוגרם) ניתנה לשיכוך כאבים לאחר ניתוח וחזרה במידת צורך בכל שעות 12.

1 חומרה, חומרים מתכלים, ומיקום

1. לשמור את חדר הניתוח של בעלי החיים הקטנים ושקט, בקטריאלית, ולשמור על טמפרטורת החדר ב23 +/- 3 מעלות צלזיוס. כדי לבצע את הניתוח מפרצת הניסיונית הציוד המינימלי הבא הוא הכרחי:
   1. השתמש במיקרוסקופ ניתוחי ראש הטבלה באופן אידיאלי מצויד בהיקף עוזר ומצלמה מיקרוסקופ דיגיטלי. השתמש במשטח nonporous לשימוש חוזר תפעולי ומשטח מכשיר cleanable כדי להגן על ספסל המעבדה.
   2. הכן את חומרים מתכלים כגון חומרי חיטוי עור, מלח פיסיולוגי, ספוגיות גזה קטנות יותר וגדולות יותר וחומר תפר כולל 9-0 מיקרו תפרים, 5-0 לא נספג, ו3-0 תפר נספג.
   3. השתמש בכלים הבאים סטנדרטיים כירורגית: מספריים כירורגי, מלקחיים רקמות, מפזר רקמות רך או מפשק שמירה עצמית, ושני חבקים כירורגית נגד יתושים.
   4. השתמש בערכה בסיסית מייקרו מכשיר הכוללת: בעל microneedle מעוקל, microforceps אחד מעוגל ושני ישר, וmicroscissor ישר או עקום.
   5. שמור את מכשירי מייקרו בצלחת כליות מלאות בתמיסת מלח סטרילית כדי לשמור על המכשיר שאינו דביקים ונקיים במהלך ניתוח. צלחת הכליות מרופדת בשטיח גומי או כפפה כירורגית כדי למנוע נזק לעצות של מיקרו המכשירים. ודא שכל הציוד הוא סטרילי וההליך מבוצע בטכניקת ספטית על פי ההמלצות הנוכחיות לניתוח הישרדות בחיות מעבדה ^8-10.
   6. בנוסף, משתמש במוליך קליפ כלי דם ושלושה מלחציים כלי דם זמניים atraumatic. חשוב שיש לי מלחציים משמשים כוח סגירה נמוך כדי למנוע פגיעה בקיר דק מאוד של אב העורקים החולדה. כמו כן להכין שליט עם ברים מחצית מילימטר בקנה מידה, רפידת גומי צבעונית קטנה, ומחט קהה קצרה.
   7. הנח את החולדות במצב שכיבה, לשתק את שני קדמי ואחוריים כפות עם קלטת כירורגית מבלי להחיל מתיחה או דחיסה לעור, ולכופף את הגב שלהם עם סמן עבה או עט כויה על ידי הצבתו תחת האזור בקרשים של הגב. חשוב לקבל כמה שיותר לורדוסה עמוד השדרה המותני ככל האפשר על מנת לשפר את חשיפת retroperitoneal וגישה לאב עורקי infrarenal המאפשר השקה מייקרו. מיצוב זה מומלץ ליצירה מפרצת אב העורקים בבטן, אבל לא הכרחי לקצירת שתל חזה.

2 שתל קציר

1. Uהרדמה כללית nder, לפתוח את חלל בית החזה (שעת ההתחלה איסכמיה שתל). החל קמצוץ הבוהן רעיל כדי לאשר שהחולדה אינה מגיבה לפני שתמשיך לשלבים הבאים. לחתוך דרך דופן בטן midventral, לזהות את הסרעפת בדיוק מעל הכבד, ולחתוך את רקמות חיבור בחלק התחתון של סרעפת כדי לאפשר גישה לכלוב הצלעות. במספריים גדולים, צד קהה כלפי מטה, חותכים את צלעות רק סנטימטר אחד שמאלה וימינה של קו האמצע כלוב צלעות ולפתוח את חלל בית החזה. הריאות מגויסות לצד הימני של הלב. להקריב את החולדות על ידי מינון יתר עם הזרקת intracardiac של תא מטען hydrochloride.Pulmonary קטמין, וריד subclavian שמאל, וריד נבוב גולגולת עזב, ווריד azygous להפריע למסיק של אב העורקים החזי הפרוקסימלי.
2. זנב לורידים הבולטים יש נקודת כניסה טובה להתחיל הנתיחה של אב העורקים החזי יורדים באמצעות מיקרו מספריים וmicroforceps.
3. עקוב אחר b אב העורקים החזיAck מהקיר הגבי של בית החזה כלפי מעלה לקשת אב העורקים על ידי הכחשה עדינה בוטה ונתיחה עם המהדק כירורגית נגד יתושים.
4. מהדק ולאחר מכן לחתוך את הוורידים עם מספריים. לשמור את ווי התלייה על הוורידים ולהשתמש בו כמפשק כדי לחשוף את קשת אב העורקים הבסיסית.
5. הנח קשירת משי שאינו נספגת 6-0 בדיוק מעל עורק הצלע הראשון שעזב את אב העורקים.
6. חותך את אב העורקים היורדים ממש מתחת לעורק subclavian השמאלי ולאחר מכן מתחת למייתר. זמירה ניתן לעשות על מנת לקבל את גיאומטריה מפרצת תקנית בניצב, או במידת צורך, כדי לקבל זווית מסוימת בין הציר של מפרצת אב העורקים ו. מדוד את השתל ברוחב והאורך שלה.
   הערה: שתלים שנקטפו יכולים גם להיות מושתלים באופן מיידי לחולדות נמען או נוסף מעובד כדי להשיג decellularization של קיר השתל. ניתן לאחסן שתלי decellularized ב-4 מעלות צלסיוס עד מחדש השתלה במועד מאוחר יותר (איור 1). הdecellularization הדואר של הקיר מפרצת הוכח נטיית הפרצה להגדלת ^11.

.3 השתל Decellularization

1. שתלי תורם הקפאה בפוספט שנאגרו מלוחים ב-4 מעלות צלזיוס.
2. למחרת, להפשיר את השתלים, לשטוף עם מים מטוהרים וללא יונים בטמפרטורת חדר, ודגירה של 10 שעה על 37 מעלות צלזיוס ב0.1% סולפט dodecyl נתרן.
3. לבסוף, לשטוף את השתלים שטופל סולפט dodecyl נתרן שלוש פעמים עם תסיסה עדינה, להקפיא מחדש בופר פוספט, ולשמור ב-4 מעלות צלזיוס עד לשימוש.

.4 מפרצת בריאה

1. Dissection של אב העורקים בבטן
   1. אחרי החיה כבר מורדמת, קליפ הפרווה מהאתר כירורגית ולנקות את העור בחומר חיטוי מתאים. מבחן לחוסר תגובת הבוהן קמצוץ לפני חתך בעור. התחל הפרוקסימלי 1cm החתך לאיברי המין iעמדת midventral n (שעת התחלת מבצע). להפריד בזהירות את העור מהשרירים הבסיסיים. נתיחת קצה אחד לשני סנטימטרים מתחת לעצם החזה.
   2. בזהירות אך בתקיפות למשוך את שרירי בטן הבסיסיים, כדי למנוע נזק לאיברים שבבסיס. להאריך את חתך אורכי לאורך alba LINEA כלפי מעלה לתהליך xiphoid וסופו של דבר בכיוון זנב ברמה של שלפוחית ​​השתן.
   3. בעדינות יפעיל לחץ על שלפוחית ​​השתן לרוקן אותו כדי להקל על גישה למרחב retroperitoneal.
   4. הזז את המעי הדק וcecum הבולט לימין או מהשמאל. זהה את המעי הגס כלומר המעי הגס היורד בפינה השמאלית התחתונה של חלל הבטן.
   5. חותך את הרצועות שבבין המעי הדק והמעי הגס יורד בכיוון גולגולת כדי לאפשר חשיפה רחבה יותר של קיר גוף הגבי. הנח מפשק שמירה עצמית להחזיק את המעיים לגזרים.
   6. המיקום האידיאלי של i השקה פרצת קצה לצדs שנמצא ברמה שבין הכליות וורידי iliolumbar. אב העורקים בבטן טמון retroperitoneal המשובץ ברקמת שומן. במהלך הנתיחה לשים לב במיוחד לכמעט השופכנים השקופים המותאמים וכלי אשכים.
   7. אם יש צורך בנסיגה נוספת של מעיים, להשתמש חילופי גזה גדולים יותר. ורדוסה עמוד השדרה המותני מושרה במהלך מיצוב על ידי הצבת עט כויה או חפץ דומה מתחת לגב התחתון של העכברוש, מפחיתה באופן משמעותי את הצורך של נסיגת מעי.
   8. משטח הגחון של קיר גוף גב מכוסה הצפק הקודקודית דק. ברגע שזה נפתח, לדמיין את אב העורקים רק מתחת. במהלך נתיחה חדה ובוטה זהירה של אב העורקים בבטן מורידים גדולים סמוכים לתפוס רק adventitia כדי למנוע נזק לדופן כלי הדם.
   9. לעתים רחוקות, עורקים המותני קטנים מתעוררים ככלי מגזרי מפני שטח הגב של אב העורקים בבטן ומפריעים להכנה. קשירה וחיתוך של הכלי הוא לביתטוליפ אין כדי למנוע דליפה מדרדר במהלך תפירה מפרצת. שימוש במייקרו מלקחיים מעוקלים יכול להקל על מיקום קשירה בעומק.
2. סוף לצד Anastomosis
   1. שים רפידת גומי בצבע מתחת לאב העורקים בבטן ולרפד אותו עם ספוגית גזה קטנה. הסר רקמת חיבור רופפת וadventitia ברמה של אתר ההשקה המתוכנן.
   2. הצמד את דיסטלי אב העורקים בבטן להשקה ראשון, אז הפרוקסימלי (שעת התחלת הידוק אב העורקים). הדבר מבטיח מילוי איתן של הכלי ומאפשר arteriotomy שלאחר מכן.
   3. בצע arteriotomy או באמצעות מיקרו מספריים ישר או עקום. מיקרו מלקחיים מחזיק את חתיכה קטנה מאוד של קיר הכלי לחתוך את צורה האליפטית.
   4. לשטוף את העורק ביסודיות עם מי מלח בשני הכיוונים באמצעות מחט קהה שקצו.
   5. מניחים את שני התפרים הראשונים של השקה קצה לצד זה בקצה הפרוקסימלי והדיסטלי של arteriotomy (שעת התחלת השקה). הימנע מאחיזה של קיר הכלי עם מיקרו מלקחיים בכל ההזדמנות אפשרית. ודא כי כל תפר ממוקם דרך כל השכבות של קיר הכלי.
   6. לבצע תפירה או כתפרים רציפים או מופרעים. אם תפירה קטעה נבחרה לאחר מכן למקם את תפר o`clock צד האחורי תשע ראשון. ניתן במרווחי תפרים לאחר מתחילים בסמוך לתפר הראשון. לתפוס את adventitia בזהירות. הימנע מכל סחיטה / אחיזה של אינטימה.
   7. כאשר הקיר האחורי גמור, לבדוק את חלק endoluminal של ההשקה לתפרים שלא במקומה. לבצע אותם ההליכים באותו סדר בצד הקדמי. ודא שהראשון של הסכום כולל של שלושה קשרים לתפר הוא מוצק אך לא הדוק מדי.
3. עצירת דימום וסגירה
   1. לאחר סיום ההשקה צד הושלם (זמן השקה סוף), לשטוף את האתר עם מי מלח ולהסיר את מהדק דיסטלי הראשון, כדי לאפשר זרימה חוזרת (אב העורקים הסוף מהדק ti איסכמיה זמן ושתל הסוףלי).
   2. אם דימום ברור מתרחש מזרימה החוזרת ייתכן שיהיה צורך לתפור נוסף (שעת התחלה של עצירת דימום). במקרה של דליפת קטין, להשיג עצירת דימום עם לחץ עדין על אתר הדימום באמצעות חתיכה קטנה של ספוגית גזה.
   3. הסר את המהדק של כלי הדם הפרוקסימלי, לשטוף את אתר ההשקה פעם נוסף, ולחתוך את הקצוות הנותרים של המייתר בכיפה מפרצת.
   4. לאשר patency של מפרצת על ידי תצפית של גידול נפח של מפרצת בגל דופק העורקי שיא. להעריך patency עורק בטן דיסטלי באמצעות "מבחן החליבה" הישיר.
   5. הסר את יריעת הפלסטיק וספוגית הגזה הקטנה מתחת. מערבולת הדם הפועמת בתוך הפרצה שנוצרה נראית בבירור.
   6. כסה קווי תפר סביב ההשקה עם חתיכות קטנות של רקמת שומן או Spongostan לעצירת דימום נוסף, אם דליפה קטנה עדיין קיימת (זמן סוף עצירת הדימום).
   7. הסר את מטליות מפזר וגזת רקמות רכות.הנח את המעי הדק, cecum, ומסת השומן בחזרה במיקום הנכון שלהם.
   8. סגור את שרירי בטן קו האמצע באמצעות 5-0, 4-0, 3-0 או תפרים נספגים או לא נספגים ואחרי סגירת פצע עור באמצעות טכניקת תפר מתמשכת עם 3-0 תפר נספג polyfilament (זמן פעולת סוף). הערה: בחולדות הניסיון שלנו נסבלות תפרי עור נספגים טובים יותר מאשר תפרי monofilament שאינם נספגים.

תוצאות

סדרת טייס מורכבת 14 חולדות. בהמשך לכך כולל של 84 בעלים חיים פעלו על פי הפרוטוקול שהוצג למספר פרויקטי מחקר בין מרץ לספטמבר 2012. 29 בעלי חיים נוספים שימשו כתורמים לשתלי saccular עורקים. הניסויים שנותרו בוצעו באמצעות שתלי טופל מראש שנקטפו ואוחסנו מניסויים קודמים והשתמשו בחולדות מאותו המין, המתח, המשקל, והגיל.

משקל גוף, זמן פעילות כולל, זמן הידוק אב העורקים, זמן ליצירת השקה, זמן לעצירת דימום לאחר יצירת השקה, זמן איס...

דיון

התקדמות בהבנה של הביולוגיה המורכבת של מפרצת עורק מוח saccular שלנו תלויה בניתוח של נתונים אפידמיולוגיים וקליניים, כהשלמה מחקרי מעבדה בדגימות מטופל ועבודה ניסויית במודלים של בעלי חיים ^3,12,13.

בעלי חיים קטנים כמו החולדות קשורים מיסודו עם עלויות נמוכות יותר של ניסויים ודיור, והפחיתו את הצורך של ציוד מיוחד. זמן פעולה ממוצע כולל של פחות מ 60 דקות ליצירת מייקרו של מפרצת דפנות בחולדות הוא הרבה יותר קצר מהזמן...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Medetomidine			כל ג'נריקון
קטמין			כל ג'נריקון
בופרנורפין			כל ג'נריקון
פוספט חוצץ מי
נתרן דודציל סולפט (0.1%)
3-0 תפר נספג	Ethicon Inc., ארה"	ב VCP824G
5-0 תפר לא נספג	Ethicon Inc., ארה"ב	8618G
6-0 תפר משי לא נספג	B. בראון, גרמניה	C0761060
9-0 ניילון מיקרו תפר	ב. בראון, גרמניה	G1118471
Spongostan	Ethicon Inc., ארה"ב	MS0002
מיקרוסקופ הפעלה	Leica , גרמניה	מצלמת
	סוני, יפן	SSC-DC58AP
מכשירים כירורגיים סטנדרטיים	ב. בראון, גרמניה	מספר	ראה פרוטוקול 1.4
מכשירים מיקרוכירורגיים	ב. בראון, גרמניה	מרובה	ראה פרוטוקול 1.5
מוליך קליפ כלי דם	ב. בראון, גרמניה	FT495T
מהדקי כלי דם זמניים	ב. בראון, גרמניה	FT250T
Graph Pad Prism תוכנה סטטיסטית	תוכנת GraphPad, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב		V 6.02 עבור Windows

מלח מיקרוסקופ דיגיטלית M651