גלי הלם כיום ידועים אפקטי ההתחדשות שלהם. לכן בניסויים במבחנה הם עניין הולך וגובר. לפיכך, אנו פיתחנו מודל לניסויים במבחנה הלם גל (IVSWT) המאפשר לנו לחקות בתנאי vivo ובכך להימנע השפעות פיזיות מסיחות את הדעת.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
גלי הלם כיום ידועים אפקטי ההתחדשות שלהם. ממצאי מחקר בסיסיים הראו שגלי הלם שגורמים לגירוי ביולוגי למקד תאים או רקמות ללא כל נזק שלאחר מכן. לכן, בניסויים במבחנה הם עניין הולך וגובר. שיטות שונות של יישום גלי הלם על תרביות תאים כבר תיארו. באופן כללי, כל הדגמים הקיימים להתמקד איך ליישם הטוב ביותר גלי הלם על גבי תאים.
עם זאת, שאלה זו נותרה פתוחה: מה קורה לגלים לאחר שעבר את תרבית התאים? ההבדל של העכבה אקוסטית של מדיום תרבית התאים ואוויר הסביבה הוא כל כך גבוה, כי יותר מ 99% מגלי הלם מקבלים לידי ביטוי! לפיכך, אנו פיתחנו מודל המורכב בעיקר מיכל פרספקס בנוי המאפשר הגלים כדי להפיץ במים לאחר שעברו את תרבית התאים. זה ימנע תופעות cavitation, כמו גם השתקפות של הגלים שאחרת להפריע הקרובים אלה. Wiה מודל זה אנו מסוגלים לחקות in vivo תנאים וכך לקבל עוד ועוד ידע על איך הגירוי הפיזי של גלי הלם מקבל מתורגם לאותות ביולוגיים תא ("mechanotransduction").
מבוא
גלי הלם הם גלי לחץ קול הנובעים משחרור פתאומי של אנרגיה, למשל. כמו רעם כאשר ברקים. ברפואת גלי הלם היו בשימוש במשך 30 שנים בLithotripsy להתפוררות של אבנים בכליות. מאז הממצא הנלווה של עיבוי עצם הכסל בחולי Lithotripsy בתחילת 1980s, מחקרים ראשונים שנערכו על מנת להעריך את ההשפעה של טיפול גל הלם (SWT) על עצם ריפוי 1. תוצאות מרשימות של ריפוי משופר של nonunions ארוך עצם יכולה להיבחן 2. בהמשך לכך, הורחבו אינדיקציות לפצעים ברקמות רכים 3. ממצאי מחקר בסיסיים הראו שגלי הלם שגורמים לגירוי ביולוגי לרקמות היעד ללא כל נזק שלאחר מכן. שחרורו של גורמי גדילת angiogenic (למשל VEGF, PlGF, FGF) ואחריו ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
אישור אתי
לאחר קבלת כתב הסכמה מדעת של חולים, חבלי טבור התקבלו מניתוח קיסרי במחלקה לגינקולוגיה לבידוד של תאים אנושיים טבור אנדותל הווריד (HUVECs). הרשאה ניתנה מוועדת האתיקה של האוניברסיטה הרפואית אינסברוק (מס 'UN4435).
1. הכן את אמבט IVSWT המים
- הכן 3.5 L של מים ברז במכל מתאים. מים צריך להיות מחוממים ל37 מעלות צלזיוס (ראה פרוטוקול 6).
- למלא את המים לתוך אמ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
שימוש בשיטה המתוארת אנחנו מוחלים גלי הלם לתאי אנדותל וריד טבור אנושיים (HUVECs) שצוינו מבודדת מחבלי טבור. חבלי טבור התקבלו מסעיפים קיסריים אלקטיבי.
טופלו HUVECs במפגש של 90% בבקבוק תרבית תאי T25 עם מערכת טיפול גל הלם אלקטרו. פרמטרים טיפול היו צפיפות שטף אנרגיה של 0.1 mJ / 2 מ"מ ותדר של 5 הרץ. 300 דחפים יושמו ממרחק של 5 ס"מ ממקור גל ההלם לשכבת התאים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
המשמעות של המודל המוצע לטיפול במבחנה גל הלם היא העובדה שגלים יכולים להפיץ לאחר שעברו את תרבית התאים בניגוד לדגמים קיימים. ובכך, ניתן להימנע מתופעות מטרידות פיזיות כגון כוחות מתיחים. המודל דומה יותר בתנאי vivo מזה על ידי אחרים יישום גלים לצלוחיות תרבית תאים שלהם באופן ישיר.
יתרון נוסף הוא האפשרות של שינוי המרחק בין מקור גל הלם ותאים. זה לא יהיה אפשרי אם טיפול בבקבוק תרבות באופן ישיר. עם זאת, .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
יש המחברים אין לחשוף.
תודות
המחברים מודים ריינר Schultheiss וולפגנג Schaden להשראה שלהם עבור דגם זה. אנו מודים גם Dorfmüller הנוצרי עבורו את כל המאמצים אדירים הזמן כדי לתמוך במחקר שלנו.
תודה רבות לרוברט Göschl והנס Hohenegger למימוש טכני מדוקדק של הרעיונות שלנו!
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מכשיר גלי הלם Orthogold | Tissue Regeneration Technologies, Woodstock, GA – מיוצר על ידי MTS-Europe GmbH, קונסטנץ, גרמניה | ||
| IVSWT Water Bath V2.0 | Johann Hohenegger - מוצרים טכניים | ||
| EBM-2 בזאלי בינוני 500 מ' + EGM-2 SingleQuot Suppl. & גורמי גדילה | Lonza | CC-3156 & CC-4176 | מדיום זה שימש לניסויים המוצגים עם HUVECs למילוי בקבוק תרבית התאים. עבור סוגי תאים אחרים, השתמש במדיום המומלץ. |
| Pechiney Parafilm M PM996 | Pechiney אריזות פלסטיק | PH-LF-PM996-EA labplanet.com | לאיטום צלוחיות |
| פלקון פיפטות סרולוגיות 25 מ"ל | Becton Dickinson Labware | 357525 | |
| CellMate II פיפטה סרולוגית | Matrix Technologies | ||
| Skintact ג'ל אולטרסאונד | Skintact | UL-01 250 מ"ל | |
| T25 צלוחיות תרבית תאים | COSTAR | 3056 | |
| Mikrozid | Schü lke | ||
| 3.5 ליטר מים | |||
| מגבות |
מקורות
- Haupt, G., Haupt, A., Ekkernkamp, A., Gerety, B., Chvapil, M. Influence of shock waves on fracture healing. Urology. 39, 529-532 (1992).
- Schaden, W., Fischer, A., Sailler, A. Extracorporeal shock wave therapy of nonunion or delayed osseous union. Clin. Orthop. Relat. Res. 38....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
