מאמר שיטה

עוקב בvivo הדמיה של תאי גזע / אב osteogenic במהלך תיקון שבר

DOI:

10.3791/51289

⸱

23 במאי 2014

 ,  ,  , 
1Center for Regenerative Medicine, Massachusetts General Hospital, Harvard Stem Cell Institute, 2Wellman Center for Photomedicine and Center for Systems Biology, Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מדידת כמותית של פונקצית אב עצם בריפוי שבר דורשת טכנולוגיית הדמיה סידורי ברזולוציה גבוהה. הנה, פרוטוקולים ניתנים לשימוש במיקרוסקופיה intravital ומעקב osteo שושלת ברצף תמונה ולכמת את ההגירה, השגשוג והתמיינות של תאי גזע / אב osteogenic אנדוגני בתהליך של תיקון שברים בעצמות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עצם מתהפך ברציפות, והוא מאוד משובי בעקבות פציעה. תאי גזע / אב osteogenic כבר מזמן שיערו להתקיים, אבל בהפגנת vivo של תאים כאלה יש רק לאחרונה הושגו. כאן, in vivo בטכניקות הדמיה כדי לחקור את תפקידם של תאי גזע / אב osteogenic אנדוגני (OSPCs) וצאצאיהם בתיקון עצם מסופקות. שימוש בתא osteo שושלת התחקות דגמים והדמיה intravital של microfractures המושרה בעצמות calvarial, OSPCs ניתן לצפות ישירות במהלך הימים הראשונים לאחר פציעה, שבאירועים קריטיים בתהליך התיקון מוקדם להתרחש. אתרי פגיעה יכולים להיות צילמו ברצף חושפים כי OSPCs לעבור לפציעה, עלייה במספר ולהתמיין לosteoblasts עצם טביעה. שיטות אלה מציעים אמצעי חוקר את התפקיד של רגולטורים מולקולריים גזע תאים פנימיים וחיצוניים להתחדשות עצם ותיקון.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלות עצם ניווניות ואיבוד מסת עצם הקשור לגיל שמוביל לסיכון גבוה לשברי אוסטיאופורוזיס הפך אתגר גדול בתחום בריאות ציבור 1. תחזוקת עצם נשלטת על ידי אוסטאובלסטים יוצרי עצם וosteoclasts resorbing עצם. פגמים של תאי עצם ויוצרים הם גורם עיקרי לאובדן עצם הקשור לגיל ומחלות עצם ניווניות 2,3. בעוד מחקר מקיף התמקד בשיפור של ריפוי שבר, את הגילוי של תרופות אמינות כדי לרפא מחלות עצם ניווניות ולהפוך את החולשה של שברי אוסטיאופורוזיס נשאר נושא חשוב. כך, לומד את המקור לתאי עצם יוצר ומנגנוני הבקרה שלהם בהתחדשות עצם ותיקון מספק תובנה רומן כדי לשפר את התחדשות שלד ולהפוך מחלות איבוד מסת עצם.

קיומם של תאי mesenchymal multipotent במח עצם הוצע מבוסס על זיהוי של אוכלוסיות clonogenic שיכול שונהiate לosteogenic, שושלות adipogenic וchondrogenic vivo לשעבר 4. לאחרונה, מחקרים רבים דיווחו כי תאי גזע השלד / mesenchymal (SSCs / MSCs) הם מקור טבעי של אוסטאובלסטים והם קריטיים עבור מחזור עצם, שיפוץ ותיקון שבר 5,6 . בנוסף, מחקר התחקות השושלת שלנו גילה שיש לי osteoblasts הבוגר מחצית חיים קצרים באופן בלתי צפוי (~ 60 ימים) ומתחדשים ללא הרף על ידי תאי גזע / אביהם בשני תנאי homeostatic ותיקון שבר רגילים 6. עם זאת, זהות vivo של תאי גזע וכיצד כגון תאים מגיבות לשברי פציעה ולספק תאי יוצרי עצם אינם ברורים. לכן, חשוב לפתח שיטה שהוא מסוגל לנתח את ההגירה, השגשוג והתמיינות של SSCs / MSCs אנדוגני בנסיבות פיסיולוגיות.

תיקון שבר הוא תהליך רב תאי ודינמי מוסדר על ידי מערך של מתחםציטוקינים וצמיחת גורמי 7. הגישה הפופולרית ביותר ללימודי שבר היא להשתמש במודל של בעלי חיים עם שבר ארוך עצם ולנתח את עצמות על ידי חתך עצם וטכניקות immunofluorescent 8-10. תהליך תיקון זה יכול להיות פיקוח על ידי שיטות הדמיה מרובות כולל 11 מיקרו-CT, הקרינה אינפרא אדום קרובה 12, וההדמיה chemiluminescence 13. עם זאת, לכל טכניקה מגבלות מסוימות ולא הייתה שום דרך יעילה כדי לעקוב אחר תפקוד SSCs / MSC ברמה התאית בגוף חי. לאחרונה, confocal / מיקרוסקופיה intravital שני הפוטונים פותחה ומשמשת לאיתור תאים סרטניים מושתלים ותאי גזע hematopoietic בהקשר של microenvironment מח העצם שלהם אפילו ברזולוציה תא בודד חי חיות 14. על ידי שילוב של טכנולוגיה זו עם סדרה של דגמי התחקות שושלת, היינו יכול להגדיר שתאי גזע osteogenic / אב יכולים להיות מסומנים גנטי על ידי ac החולףtivation של התנגדות myxovirus -1 אמרגן (MX1) ואת אבות מושרה MX1 יכול לשמור על הרוב של osteoblasts הבוגר לאורך זמן, אך אינו משתתף בדור של כונדרוציטים בעכבר המבוגר 6. בנוסף, החוקרים הדגימו כי OSPCs כותרת MX1 לספק את רוב osteoblasts החדש בריפוי שבר 6.

כאן, תוך שימוש במודלי מעקב osteo שושלת ומיקרוסקופיה intravital, פרוטוקול מסופק להגדיר in vivo קינטיקה של + בתאי גזע / אב osteogenic MX1 בתיקון שבר. פרוטוקול זה מציע הדמיה רציפה כדי לעקוב אחר המעבר של גזע / אבות osteogenic לאתרי שבר ומדידת כמותית של התרחבות osteoprogenitor בתהליך התיקון מוקדם. גישה זו עשויה להיות שימושית בהקשרים רבים, כולל ההערכה של מועמדים טיפוליים לשיפור תיקון עצם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. עכברים ואכשור קד

הערה: כל העכברים נשמרו בתנאי הפתוגן ללא וכל הפרוטוקולים שאושרו על ידי הוועדה המוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש (IACUC) בבית החולים הכללי מסצ'וסטס. כל הניתוח צריך להתבצע בתנאים סטריליים באמצעות ציוד סטרילי autoclaved. 15 MX1-Cre, Rosa26-loxP-stop-loxP-EYFP (Rosa-YFP), וRosa26-loxP-stop-loxP-tdTomato (Rosa-עגבניות), היו נרכש ממעבדות ג'קסון. עכברי osteocalcin-GFP נמסרו על ידי ד"ר הנרי קרוננברג. לניתוח כמותי של הגירת OSPC ושגשוג in vivo, עכברי MX1-Cre + רוזה-YFP + (צבע כתב יחיד) היו בשימוש. למעקב מפורט יותר של הבידול שלהם לתוך osteoblasts osteocalcin בוגר +, השתמשנו trigenic MX1-Cre + רוזה-עגבניות + OCN-GFP +עכברים.

  1. לתייג MX1 + תאי in vivo, להכין חומצת polyinosinic-polycytidylic (PIPC, 2.5 מ"ג / מיליליטר) בפתרון PBS סטרילי ומזריק 200 μl ל20 גרם של עכבר + כתב MX1-Cre intraperitoneally פעם אחת בכל יום אחר ל10 ימים.
  2. כדי לחסל תאי MX1 + hematopoietic תושב, להקרין עכברים עם מנה בודדת של 9.5 Gy. לאחר 24 שעות של קרינה, תאים להשתלה מסוג בר מח עצם (1x10 6 תאים / עכבר) לווריד 16. הערה: מאחר ותאי MX1 המושרים כוללים תאי hematopoietic וosteoclasts נגזר hematopoietic, חיסול + תאי hematopoietic MX1 משפר את איכות ההדמיה ולכמת את תאים + osteogenic MX1.
  3. לאחר השתלת מח העצם, לעקוב אחר בעלי חיים לארבעה עד שישה שבועות כדי להשיג אכלוס מוצלח של תאים במח תורם.

2. מולהשתמש בתכשיר

  1. הרדימי עכבר על ידי זריקת intraperitoneal של 50 μl של קטמין / xylazine (100 מ"ג / קילוגרם, מ"ג xylazine 12 / קילוגרם משקל גוף) באמצעות הליך שאושר IACUC. הערה: משך ההשפעה ניתן להארכה למנה נוספת של קטמין / xylazine.
  2. לקבוע אם העכבר הוא בהרדמה מלאה על ידי חוסר התגובה לבוהן ו / או צובט זנב. (אופציונאלי) כאשר העכבר הוא הרדים, לאבטח את מסכת גז isoflurane מעל האף על ידי מקליט. התאם את הרמה של isoflurane כדי להבטיח את החיה היא מסוממת באופן מלא.
  3. קליפ שיער הקרקפת בעזרת גוזם חשמלי או מספריים קטנים. הסר את שברי השיער ולעקר את העור החשוף עם 70% ספוגית אלכוהול. החל ג'ל המדמיע על מנת למנוע התייבשות של קרנית.

3. Microfracture פגיעה

  1. לאחר הבטחת בעלי החיים הוא מסוממים לחלוטין, לעשות חתך בצורת אות הפוך בודד כדי לפתוח את עור הקרקפת. בקצרה, לעשות חתך רוחבי ראשון (סנטימטר פחות מ 1) starting מאוזן אחת לאוזן אחרת. הפעל ~ 60 מעלות וממשיכים לחתוך לכיוון האף עד ~ 2-3 מ"מ מאף. הערה: חתך זה ממזער את היווצרות רקמות צלקת מעל לאזור להיות צילם.
  2. הפרד את דשי עור על ידי משיכת כלפי הצדדים עם מלקחיים. שני עצמות קדמיות והצומת של תפרי sagittal ועטרה צריכים להיות ברורות חשופות.
  3. נקה את פני השטח הפתוחים על ידי שטיפה עם PBS סטרילי ומנגב בעדינות עם מטליות גזה או צמר גפן סטרילי עד שכל שערות השייר בוטלו.
  4. כדי ליצור microfractures על calvarium, להחזיק את ראש העכבר ביד אחת ומחט G 30 עם יד אחרת. הפוך מיקרו לנקב (פצע ~ 0.2 מ"מ קוטר עם <עומק 1 מ"מ) על העצם הפרונטלית השמאלי בסמוך לצומת של תפרי sagittal ועטרה על ידי החדרת קצה מחט 30 G עם לחץ עדין ומתפתל בתנועה. זהירות: זה קריטי כדי למנוע את המחט לחדור לתוך המוח, ובכך לצמצם bleeding ונזק לרקמות.
  5. לעבור למחט גדולה יותר (25 20 או G) ולהרחיב את החור לנקב על ידי סיבוב המחט (~ קוטר 0.5 מ"מ).
  6. חזור על שלב 3.3-3.5 ליצור לנקב שני על העצם החזיתי הנגדי.
  7. למחוק את הכתמים שנפגעו מצניחה המתמשכת של PBS עד שהדימום ייעצר.
    הערה: הדימום באתרים שבר יפריע להדמיה מתאימה ולגרום להיווצרות צלקת.
  8. החל ירידה של תמיסת מלח פיזיולוגית או 2% Methocel סטרילי על הגולגולת כדי למנוע התייבשות. שים לב: אין לאפשר למשטח הגולגולת לייבוש, אשר יפחית את בהירות תמונה. חשוב להשתמש בכמות מספקת של ג'ל או תמיסת מלח כדי לכסות את האזור.

4. הדמיה Intravital

  1. (אופציונאלי) לפני ההדמיה, כמה עכברים מוזרקים עם צבע של כלי דם כדי להמחיש את כלי הדם. הזרק רטרו orbitally עם 20 μl של Qtracker הלא ממוקד 705 (2 מיקרומטר פתרון ב50 מ"מ חיץ borate) בדילול מלא ב80 מl של PBS. השתמש במזרק אינסולין כדי לצמצם את הבזבוז מגיב. אם האות היא לא בהירה מספיק, סכומים נוספים ייתכן שיידרשו.
  2. הפעל את הסורק. הערה: סורק לייזר המבוסס על מצולע מאפשר רכישה בו זמנית רב ערוצית תמונה בשיעור וידאו (30 מסגרות לשנייה). סריקת שיעור וידאו היא מאוד חשובה עבור הדמיה חיה חיות.
  3. הפעל את הלייזר רב פוטון (טיטניום FEMTO השני: לייזר ספיר). קבע את אורך הגל ל880 ננומטר ולהתאים את הכוח להדמית דור שני הרמוני (440 ננומטר) של העצם. לעירור ה-GFP וtdTomato, הדלק את ננומטר 491 ו561 הלייזרים של מצב מוצק ננומטר.
  4. הפעל PMT גלאים (צינור מכפיל) עבור כל אות (± מסנן להקה עוברת 20 ננומטר 435 לדור שני הרמוני, ± מסנן להקה עוברת 19 ננומטר 528 עבור ה-GFP, ו590 ± 20 לtdTomato.) (אופציונאלי) השתמש בליזר הליום ניאון 638 ננומטר וPMT עם ± מסנן להקה עוברת 27.5 ננומטר 695 לזהות Qtracker 705 אות.
  5. Placדואר את החיה על במה מיקרוסקופ ממונע XYZ ציר. שמור את העכבר בעמדה הכי נוחה עם כרית חימום חשמלית כדי לעזור לשמור על טמפרטורת גוף (זה מפחית את הסיכון של אובדן של בעלי חיים). להשתמש בקלטת כדי להחזיק את העכבר כדי למזער את התנועה במהלך הדמיה וכדי לשמור על אזור הדמיה כאופקית ככל האפשר.
  6. החל ירידה של ג'ל החם 2% methylcellulose או תמיסת מלח פיזיולוגית בגולגולת, כדי למנוע התייבשות. שים את מכסה זכוכית באזור ההדמיה. השתמש בעדשה בהגדלה נמוכה (30x אובייקטיבי מים טבילה עם 0.9 NA) כדי לסרוק את מכסה הגולגולת.
  7. שימוש בבקר XYZ הציר, למצוא את פני השטח של מכסה גולגולת על ידי איתור את אות SHG מעצמות ולזהות מיקום ציון דרך חשוב, כגון צומת שבין תפרי sagittal ותפרי העטרה. לרכוש תמונה ולהקליט את קואורדינטות XYZ.
  8. תמשיך לחפש את המיקום של הפגיעה על ידי התבוננות אותות SHG וקרינה.
  9. כאשר אתרי פציעה או o האזורעניין f נמצא, לרכוש תמונה של מטוס המוקד הטוב ביותר המכיל SHG ואותות הקרינה מהתאים של עניין. שמור XYZ קואורדינטות והמרחק עד לצומת של תפרי sagittal ועטרה להגדיר את מיקומם המדויק לסיבובים הבאים של הדמיה.
  10. לאסוף מבנים הסלולר ועצם 3D של פציעת שבר, להקליט תמונות על ידי Z-ערימות (2 - 5 מרווח מיקרומטר) עם ~ 100 עומק מיקרומטר ממשטח עצם endosteal. לאחר השלמת הדמיה של צד אחד של פציעה, חוזר על תהליך הדמיה לאתרי פציעה הבאים.

נהלי 5. ההודעה מבצע

  1. לאחר הדמיה, לשטוף אתר הדמיה עם תמיסת מלח סטרילית כדי להסיר את הג'ל methylcellulose מהגולגולת. באמצעות מקלון צמר גפן סטרילי, למרוח כמות קטנה של משחה אנטיביוטית משולשת על פני השטח. כסה את שולי העור ומחדש לסגור את הקרקפת על ידי תפירה כירורגית. ניתן לעשות זאת עם חוט תפירה היפואלרגנית (polyglactin נספג suture) ו5-0 מחט תפר גודל. זהירות: טכניקת תפירה טובה ממזערת היווצרות צלקת.
  2. טיפול בכל בעלי החיים בהזרקת ה-IP של 0.05-0.1 מ"ג / קילוגרם עצירות כל שעות 12 ל48 שעות לאחר ניתוח. לשמור על בעלי חיים בחדר התאוששות חם עד שהם יחזרו להכרה מספקת. לאחר 3 עד 5 ימים, לפתוח מחדש את התפר ולחזור על שלבי הדמיה intravital כדי לעקוב אחר השינוי הסלולרי במהלך ריפוי שבר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מודל שבר התייצב ארוך העצם היה פופולרי במחקרים שבר. עם זאת, עצם ארוך או דגמי שבר גדולים לגרום נזק לרקמות רב, ולכן, יש מגבלה במדידת כמותית של תפקוד תא עצם. פיתחנו פגיעה פולשנית (קוטר מ"מ פחות מ 1 עם פלישה מינימאלית או ללא למאטר הדורה) בעצמות קדמיות calvarial עם קידוח מחט (איורים 1 א-1C). בחרנו להציג את דף של העצמות הקדמיות calvarial הדמיה לחיות vivo של microfractures כי יש עצם זה מבנה עצם שטוח ודק עם מח עצם, המאפשר הדמיה ברורה של עצם פגוע, תאי עצם, כלי דם ו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הרגולציה של תאי גזע שלד עשויה להיות בעל חשיבות רבה להגדרת שיטות טובות יותר להשיג התחדשות עצם. הדמיה כמותי ורציפה ברמה התאית הייתה מאתגרת מבחינה טכנית. למרות שמודל שבר ארוך עצם העכבר כבר בשימוש ומתאים למחקרים ביומכנית 17 נרחב, המיקום שלה רקמות עמוקות, גודל שבר לא אחיד, נזק לרקמות רכות, ואת היישום של תופסנים ייצוב מוגבלים הדמיה intravital רציפה. הנה, שיטה כדי להתגבר על מגבלות אלה על ידי השילוב של confocal / מיקרוסקופיה intravital שני פוטונים ומודל שבר calvarial עכבר מסופק...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מודים לג פרק לקריאת כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי NIAMS תחת מספר פרס K01AR061434 ואגודת מלגת פרס לוקמיה ולימפומה (5,127-09) לשארית פליטה ובמענקים מהמוסד הלאומי לבריאות לCPL ו-DTS התוכן הוא באחריות בלעדית של הכותבים ולא בהכרח מייצג את הדעות הרשמיות של המכון הלאומי לבריאות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
C57BL/6J (H-2b)מעבדות ג'קסון (בר הרבור, מיין)000664
הזרקת קטמין הידרוכלורידBionichepharma67457-001-10  גודל בקבוקון: 10 מ"ל (50 מ"ג/מ"ל)
תמיסה סטרילית קסילזיןלויד בע"מNADA# 139-236
בופרנורפין HlBEDFORD LABNDC 55390-100-10בקבוקון: 0.3 מ"ג/מ"ל, מינונים: 0.05-0.1 מ"ג/ק"ג
DPBS, 1XCORNING cellgro21-031-CV
רפידות הכנה לאלכוהול (70% אלכוהול איזופרופיל)Kendall WEBCOL5110
מספריים כירורגיים עדיניםF.S.T14568-09
מלקחיים עדינים במיוחדFST11150-10
VICRYL*Plus SetureEthiconVCP490G
Qtracker 705 נקודה קוונטית לא ממוקדתInvitrogenQ21061
Methocel 2%OmmiVision
pIpC (חומצה פוליאינוסינית-פוליציטידילית)   סיגמאP0913-50MG100 μ l (2.5 מ"ג/מ"ל ב-PBS) עבור 10 גרם עכבר
Mai Tai לייזרים מהירים במיוחד מתכוונניםספקטרה פיזיקה
קליפסו כפול 491 + 532 ננומטר לייזר DPSSCobolt AB
Radius-635 HeNe לייזרקוהרנטי

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Harada, S., Rodan, G. A. Control of osteoblast function and regulation of bone mass. Nature. 423, 349-355 (2003).
  2. Manolagas, S. C., Parfitt, A. M. What old means to bone. Trends Endocrinol Metab. 21, 369-374 (2010).
  3. Khosla, S., Riggs, B. L. Pathophysiology of age-related bone loss and osteoporosis. Endocrinol Metab Clin North Am. 34, 1015-1030 (2005).
  4. Friedenstein, A. J., Chailakhyan, R. K., Latsinik, N. V., Panasyuk, A. F., Keiliss-Borok, I. V. Stromal cells responsible for transferring the microenvironment of the hemopoietic tissues. Cloning in vitro and retransplantation in vivo. Transplantation. 17, 331-340 (1974).
  5. Mendez-Ferrer, S., et al. Mesenchymal and haematopoietic stem cells form a unique bone marrow niche. Nature. 466, 829-834 (2010).
  6. Park, D., et al. Endogenous Bone Marrow MSCs Are Dynamic, Fate-Restricted Participants in Bone Maintenance and Regeneration. Cell Stem Cell. 10, 259-272 (2012).
  7. Schindeler, A., McDonald, M. M., Bokko, P., Little, D. G. Bone remodeling during fracture repair: The cellular picture. Semin Cell Dev Biol. 19, 459-466 (2008).
  8. Holstein, J. H., et al. Rapamycin affects early fracture healing in mice. Br J Pharmacol. 154, 1055-1062 (2008).
  9. Maes, C., et al. Osteoblast precursors, but not mature osteoblasts, move into developing and fractured bones along with invading blood vessels. Dev Cell. 19, 329-344 (2010).
  10. Grcevic, D., et al. In vivo fate mapping identifies mesenchymal progenitor cells. Stem Cells. 30, 187-196 (2012).
  11. O'Neill, K. R., et al. Micro-computed tomography assessment of the progression of fracture healing in mice. Bone. 50, 1357-1367 (2012).
  12. Kovar, J. L., et al. Near-infrared-labeled tetracycline derivative is an effective marker of bone deposition in mice. Anal Biochem. 416, 167-173 (2011).
  13. Mayer-Kuckuk, P., Boskey, A. L. Molecular imaging promotes progress in orthopedic research. Bone. 39, 965-977 (2006).
  14. Lo Celso, C., et al. Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche. Nature. 457, 92-96 (2009).
  15. Kuhn, R., Schwenk, F., Aguet, M., Rajewsky, K. Inducible gene targeting in mice. Science. 269, 1427-1429 (1995).
  16. Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 48, 11-22 (2009).
  17. Tu, Q., et al. Osterix overexpression in mesenchymal stem cells stimulates healing of critical-sized defects in murine calvarial bone. Tissue Eng. 13, 2431-2440 (2007).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Intravital ImagingCalvarial BoneMX1 Positive CellsBone Marrow TransplantationMicrofracture GenerationSequential ImagingStem Cell Tracking

מאמרים קשורים