RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
he_IL
Menu
Menu
Menu
Menu
Research Article
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Erratum Notice
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
אנו מתארים פרוטוקולים להכשרת חולדות עבור קלטות אלקטרו כרוניות במשימות קוגניטיביות אוטומטיות לחלוטין בהקרנה מקיר לקיר מבוך.
משימות נוירופסיכולוגיים המשמשות בפרימטים לחקור מנגנונים של למידה וזיכרון הן בדרך כלל חזותית מודרכים משימות קוגניטיביות. פיתחנו משימות קוגניטיביות חזותיות לחולדות באמצעות ההקרנה מקיר לקיר מבוך 1,2 שמותאמים ליכולות חזותיות של חולדות המאפשרות השוואות חזקות יותר של ממצאי ניסוי עם מינים אחרים.
על מנת לחקור וקושרת עצבית של למידה וזיכרון, יש לנו משולב הקלטות אלקטרו למשימות קוגניטיביות אוטומטיות לחלוטין בהקרנה מקיר לקיר מבוך 1,2. תוכנת התנהגות ממשק עם מערכת מעקב בבעלי חיים מאפשרת ניטור של התנהגותו של בעל החיים עם שליטה מדויקת של הצגת תמונה ולתגמל תלויות לבעלי חיים טובים יותר מאומנים. אינטגרציה עם מערכת הקלטת אלקטרו in vivo מאפשרת בחינה של קושרת התנהגותיים של פעילות עצבית בתקופות נבחרות של משימה קוגניטיבית נתון. </ P>
אנו מתארים פרוטוקולים למערכת מודל המשלבת מצגת ויזואלית אוטומטית של מידע למכרסמים ותגמול תוך גולגולתי עם גישות אלקטרו. מערכת המודל שלנו מציעה סט של כלים מתוחכם כמסגרת למשימות קוגניטיביות אחרות לבודד טוב יותר ולזהות מנגנונים ספציפיים תורמים לתהליכים קוגניטיביים מסוימים.
משימות חזותיים משמשות בדרך כלל במחקרים בבני אדם וקוף לבחון מנגנוני למידה וזיכרון בסיסי. מודלים של מכרסמים, לעומת זאת, הם יותר נגישים לחוקרים לקנה מידה גדולה יותר, טוב יותר מחקרים מבוקרים, ויש להם יתרון הנוסף של התרת טכניקות אלקטרו פולשניים יותר. בשילוב עם גישות אחרות, כגון מניפולציות גנטיות, קלטות אלקטרו בנעו בחופשיות חולדות לספק מודל שימושי עבור דווקא מיקוד מנגנונים ומעגלי תהליכים קוגניטיביים הבסיסיים. משימות חזותיות הפרימאטים דורשות נושאים לכוון את מבטו לגירויים חזותיים על צג, ואילו משימות חולדה דורשות נושאים לאינטראקציה עם סביבה. ההקרנה מקיר לקיר המבוך מנצלת את הנטייה הטבעית של חולדות כדי לחקור באופן פעיל הסביבה, תוך השתתפות בו זמנית לגירויים חזותיים.
משימות קוגניטיביות באמצעות מנגנוני מסך מגע שתוכננו במיוחד עבור מכרסמים אפשרותרגום טוב יותר של ממצאים ממודלים של מכרסמים לבני אדם 3. משימות מסך מגע מתבצעות בדרך כלל בחדר עם שני גירויים חזותיים ממדיים שהוצגו בצורה אנכית על קירות 3-7. משימות אלו דורשות מסך מגע בכפוף לאחורי לכיוון הגירוי החזותי היעד ולשבור photobeam אינפרא אדום או לחצו על משטח לחץ לרשום את תגובתה. עדויות אנטומיות והתנהגותיים, לעומת זאת, מראות כי חולדות לעבד מידע חזותי בhemifield החזותי נמוך יותר בצורה יעילה יותר להנחיית התנהגות 8-10. המעבדה שלנו פיתחה משימות קוגניטיביות ניצול ההקרנה מקיר לקיר מבוך 2 שבו גירויים חזותיים דו ממדים מוקרנים בחזרה על רצפת זירת המבחן. בהקרנה מקיר לקיר יכולה להיות במעקב חולדות במבוך בעת ביצוע משימות בזירה פתוחה גדולה בהשוואה למנגנון מסך מגע. לפיכך, ניתן לקבל מידע מרחבי בפעילות העצבית שנרשמה בנוסף לקושרת עצבית של מידע חזותיקבלת החלטות ד.
אנו מספקים גירוי תוך גולגולתי (ICS) לחבילה המדיאלי המוח הקדמי (MFB) כפרס 11. לשיטה זו של משלוח הפרס יתרונות על פני תגמולים מזון ומשקה. תגמולים מזון ושתייה יכולים להוביל לשובע, גם בחולדות שנשלל מזון, להגביל את מספר הניסויים בבעלי חיים יבצעו ואפשרות להאט את תהליך ההכשרה. ICS מספק תגמול מיידי מתן משוב מיידי על ביצוע משימה. תוצאות מיידי השכר בעיצוב ורכישה מהירים יותר ומפחיתות באופן משמעותי את משך הזמן של פרוטוקולי אימונים. יתר על כן, מספר גדול יותר של ניסויים יכול להסתיים בפגישה, להגדיל את כמות הנתונים שנאספו וכתוצאה מכך מדגם אמין יותר של התנהגות הקשורות למשימה.
שימוש במבוך הקרנה מקיר לקיר, אנו מתארים פרוטוקול כללי לעצב את ההתנהגות של חולדות כדי לבצע משימות קוגניטיביות מורכבות. תיפרוטוקול כללי של מספק מסגרת להכשרת חולדות על פני מגוון רחב של משימות מועסקות כיום להקלטה וקושרת עצבית של תשומת לב ואפליה חזותית 1. לפיכך, ההקרנה מקיר לקיר המבוך מותאמת ליכולות חזותיות של חולדות ומאפשרת השוואות חזקות יותר עם משימות חזותיות בבני אדם ופרימטים לא אנושיים.
כל ההליכים היו בהתאם להנחיות ועדת אוניברסיטת בראון מוסדי טיפול בבעלי חיים ושימוש.
1. סקירת מערכות
מערכת מעקב וידאו האינטראקציה עם מערכת בקרת התנהגותי כדי לפקח על ההתקדמות של החולדה במשימת נתונה, להעריך התנהגויות יעד, הצגת גירוי שליטה ולספק תגמולים בהתבסס על ההתקדמות של החולדה. מערכת הקלטת אלקטרו vivo אוספת נתונים עצביים לניתוחי אירוע קשור. (איור 1 א).
2. הכנת בעלי החיים
3. עיצוב התנהגות: כללי עיצוב מורכב משלושה שלבים: מוקדם, בינוני, ועיצוב המאוחר (איור 2).
הערה: המטרה של עיצוב מוקדם וביניים היא להכשיר את העכברוש כדי לשמור על 'עמדה מוכנה "נייחת באזור מוכן לכל ניסוי, ולבצע ניסויים רבים בפגישה. כך אימון חצי אוטומטי בעיצוב התנהגותי יכול להיות מותאם לשיעורי הלמידה הפרטניים של חולדה. Oncעכברוש ea הוא שמירה על 'מצב מוכן' מצליח, המשך למשימת עיצוב ספציפי (עיצוב המאוחר), במטרה להעביר את העכבר על גבי פרוטוקול אוטומטי לחלוטין לשליטה התנהגותית מדויקת ובלתי מוטה (איור 2).
מטרת צעדי העיצוב הכלליים היא להסתגל החולדה לזירת הבדיקות, לאמן את החולדה להישאר בעמדה מוכנה "נייחת להצגה של הגירויים החזותיים היעד, ומתקרב למיקומו של הגירוי החזותי הנכון. לאחר התרגלות לחדר הבדיקות, בזירה, ורצועות, עיצוב מוקדם בדרך כלל דורש 100-150 ניסויים עד לחולדות לסירוגין בין הצדדים המזרח והמערב של הזירה. במהלך מוקדם מעצב את החולדות בדרך כלל לרוץ דרך השטח מוכן במרכז הזירה ומבלות את רוב הזמן לחקור את המערכת של הזירה (איור 4 א). חולדות בשלב עיצוב ביניים לומדות בהדרגה כדי לשמור על 'עמדה מוכנה "נייחת באזור מוכן דורשת 600-700 ניסויים. בשלב זה, שבילים "בעלי החיים הם סטריאוטיפיים לולאות מהאזור מוכן לפינת התמונה עם פחות זמן בילו לחקור את המערכת של המבוך. עם זאת, חולדות אינן שמירה "פו מוכן נייחsition ', שמסומן על ידי המהירות שבה חולדות חוצות את המרכז מוכן השטח (איור 4).
בסופו של עיצוב ביניים, חולדות לשמור על עמדה מוכנה "נייחת באזור מוכן לפני שמתקרבת לגירוי החזותי היעד. העכברוש אז יוזם את הניסוי הבא בצד השני של הזירה (איור 4C).
האינטגרציה של תוכנת המעקב ומערכת איסוף נתונים העצבי עם מערכת בקרה התנהגותיים מאפשרת לניתוחי אירוע הקשור של נתונים עצביים. מערכי האלקטרודה במצב נסיעה יכולים להיות ממוקמים באופן אסטרטגי כדי להקליט פעילות פוטנציאלית יחידה אחת והשדה מקומי. הקלטות בוצעו בpostrhinal קליפה כאשר חולדות ביצעו את משימת vBCD. היסטוגרמות Perievent וחלקות סריקה מראים כי תאים בקליפת מוח postrhinal להגיב להתקפה של הגירוי החזותי והיעד לתחילתה של תבנית הרצפה (איור 5 א). בקליפת המוח הקודקודית האחורית של rats ביצוע תאי משימת VSA להגיב להצגת התמונה, וכאשר הבחירה נעשתה על ידי הזנת האזור שהגדיר את תמונת היעד (איור 5). פעילות מקומית שדה פוטנציאל בקליפת המוח הקודקודית האחורית במהלך הופעה במשימת VSA מציגה כוח חזק בטווח תטא (~ 8 Hz), כאשר חולדות נמצאות בעמדה מוכנה "לפני הצגת התמונה (איור 5 ג).

איור 1. התקנה ניסיונית. א סכמטי של חדרי התנהגות ושליטה. ההקרנה מקיר לקיר המבוך שוכנת בחדר התנהגותיות. חולדות נמצאות תחת פיקוח באמצעות מצלמה מעל לראש. חדר בקרת בתי הציוד לשלוט במשימה וכדי לאסוף נתונים עצביים. ב ממדים שלמבוך פרפר. לכידת מסך ג Cineplex סטודיו. אזורים המוגדרים על ידי המשתמש. אירועים הגיוניים יותר יישלחו כיציאות דיגיטליות Cineplex למערכת בקרת התנהגותי (מד Associates) כדי לפקח על ההתקדמות של החולדה. לחצו כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.

איור 2. סכמטי של שלבי העיצוב. א בתחילת עיצוב העכברוש מקבל ICS לכניסה לפינה מוכנה, וחבל תמונה להיכנס למזרח והמערב. המטרה היא להכשיר את העכברוש לשייך אזורים אלה עם הפרס ICS. עיצוב B. ביניים מתמקד באימון החולדות כדי לשמור על 'עמדה מוכנה "נייחת בפינה מוכנה. התמונות מוצגות only לאחר שמירה על עמדה מוכנה "מוצלחת. חולדות ימשיכו לקבל ICS למתקרב לתמונה באזור התמונה. C. בעיצובה המאוחר, העכברוש הוא שמירה בהצלחה 'מצב מוכן' נייח. ההדרכה היא משימה ספציפית, והחולדה מאומנת ללמוד כללים ספציפיים לביצוע משימה נתונה. ברק מציין משלוח ICS. לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.

איור 3. א סכמטי של משימת vBCD כאשר הרצפה היא אפורה, הכוכב השחור מתוגמל;.. כאשר הרצפה מפוספסת, העיגול הלבן מתוגמל ב '. סכמטי של משימת VSA. עיגולים אפורים מציינים את מיקומי היעד באזורי התמונה.גירוי היעד הוא קצר תאורה (500 אלפיות שנייה) (לבן) של אחד מהמעגלים. החולדות מתוגמלות עבור מתקרב למיקום היעד הנכון. לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.

איור 4. נתיבי דוגמא בעיצוב נתונים. מיקום משני מקטעים זעירים של עכברוש ביצוע בשלבי עיצוב שונים. מהירות של בעלי החיים מיוצגת על ידי מפת החום. צבעים קרים מייצגים במהירויות האיטית ביותר וחמים הצבעים מייצגים מהירויות גבוהות ביותר. א במהלך בתחילת עיצוב חולדות לחקור ואחוריות על הקירות החיצוניים של האזורים בתמונת המזרח והמערב ולא עוצרות בפינה מוכנה. ב '. דרך סטריאוטיפית מתחילה לצוץ בsh בינייםלחקות. נתיבים ליצור לולאה לכיוון אזורי התמונה בחזרה לפינה מוכנה. חולדות מתחילות לשמור על עמדה מוכנה "בפינה מוכנה. C בהצלחה. כאשר חולדות להתקדם על עיצוב המאוחר, חולדות לשמור על עמדות מוכנות "נייחות והנתיבים של החולדות הם סטריאוטיפיים יותר. לחצו כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.

איור 5. דוגמאות לניתוחים הקשורים perievent.. תאים שנרשמו מקליפת postrhinal במהלך משימת vBCD עם תגובות שונות להצגה של תמונת היעד (משמאל), והמצגת של הרצפה (מימין). ב '. תאים שנרשמו מקליפת המוח הקודקודית האחורי במהלךמשימת VSA עם תגובות שונות להארת העיגול (משמאל). הגברת ירי לאחר בחירת המיקום המרחבי בי מעגל היעד מואר (מימין). C. ספקטרוגרמה מראה כוח תטא חזק בקליפת המוח הקודקודית האחורי בעמדה מוכנה ". הקו האדום האנכי מציין סוף 'מצב מוכן' מוצלח וההצגה של התמונות. הקו הכחול האנכי מציין המצגת של 1 מקיר לקיר במשפט להתחיל במשימת vBCD. הקו הירוק האנכי מציין כי בחירה הייתה רשומה במשימת VSA. לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.
דמי הגשה עבור מאמר וידאו זה הוא בחסות Plexon בע"מ
אנו מתארים פרוטוקולים להכשרת חולדות עבור קלטות אלקטרו כרוניות במשימות קוגניטיביות אוטומטיות לחלוטין בהקרנה מקיר לקיר מבוך.
עבודה זו נתמכה על ידי NSF IOS 1146334, NSF אפרים 0937848, DARPA N66001-10-C-2010, וNSF IOS 0,522,220 לRDB. אנו מודים Stacie הייאט בPlexon Inc לסיוע בהכנת כתב היד הזה.
| OmniPlex D מערכת רכישת נתונים עצביים | Plexon Inc | ||
| DigiAmp מגבר דיגיטציה | Plexon Inc | ||
| מסגרת למבוך הקרנת רצפה | 80/20 Inc | 15 סדרה T-חריץ מסגור | |
| מקרן לזרוק קצר | NEC Display Solutions | WT610E | |
| Da-Lite תחרה ומסך לולאה | חברת | מסך Da-Lite81326C | |
| פרספקס | פלסטיק מודרני | ||
| SuperPort כרטיס קלט | Med Associates Inc | DIG-713A | |
| SuperPort כרטיס פלט | Med Associates Inc | DIG-726 | |
| SmartCtrl מודול ממשק | Med Associates Inc | DIG-716B | |
| כרטיס מפענח | Med Associates Inc | DIG-700F | |
| כרטיס PCI | Med Associates Inc | DIG-704PCI-2 | |
| מחולל אודיו לתכנות | Med Associates Inc | ANL-926 | |
| ממריץ גירוי עצמי תוך גולגולתי לתכנות | Med Associates Inc | PHM-150B | מופעל על ידי כרטיס PHM-152COM |
| אלקטרודה דו-ערוצית | פלסטיק1 | MS303/13/SP | חתוך 15-20 מ"מ מתחת להדום |
| תוכנת | MED-PC IVMed Associates Inc | SOF-735 | |
| OmniPlex Software | Plexon Inc | ||
| CinePlex תוכנה: מודולי מעקב והתנהגות בסיסית | Plexon Inc |