הקלטת אלקטרו מ<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Labellar טעם Sensilla

סיכום

פרוטוקול זה מתאר הקלטה תאית מתגובות פוטנציאל הפעולה שנורו על ידי נוירונים טעם labellar בדרוזופילה.

תקציר

תגובת הטעם ההיקפית של חרקים יכולה להיחקר בעוצמה עם טכניקות אלקטרו. השיטה המתוארת כאן מאפשרת לחוקר כדי למדוד את תגובות התעוררו אצלם באופן ישיר וכמותית, המשקף את הקלט החושי שמערכת העצבים של החרקים מקבלת מגירויי טעם בסביבתו. פרוטוקול זה מתאר את כל השלבים העיקריים בביצוע טכניקה זו. השלבים הקריטיים בהרכבת מתקן אלקטרופיזיולוגיה, כגון מבחר של ציוד דרוש וסביבה מתאימה להקלטה, מסומנים. אנו גם מתארים כיצד להתכונן להקלטה על ידי ביצוע אלקטרודות התייחסות והקלטה מתאימות, ופתרונות tastant. אנו מתארים בפירוט את השיטה המשמשת להכנת החרקים על ידי החדרת אלקטרודה התייחסות זכוכית לתוך הזבוב על מנת לשתק את חוטם. אנחנו מראים עקבות של הדחפים החשמליים שנורו על ידי נוירונים טעם בתגובה לסוכר ומתחם מרים. היבטים של הפרוטוקול הם לאechnically מאתגר וכוללים תיאור נרחב של כמה אתגרים משותפים טכניים שעשויים להיות נתקלו, כגון חוסר אות או רעש מוגזם במערכת, ופתרונות אפשריים. הטכניקה יש מגבלות, כגון חוסר היכולת לספק גירויי temporally מורכבים, להתבונן ברקע הירי מייד לפני גירוי משלוח, או להשתמש בתרכובות טעם לא מסיסים במים בנוחות. למרות מגבלות אלה, בטכניקה זו (כולל שינויים קלים בהפניה בפרוטוקול) היא תקן, הליך מקובל באופן רחב להקלטת תגובות עצביות דרוזופילה לטעום תרכובות.

מבוא

חוש הטעם מאפשר חרקים כדי לזהות מגוון רחב של כימיקלים מסיסים וממלא תפקיד חשוב בקבלה של חומר מזין, או הדחייה של אחד מזיק או רעיל. טעם הוא חשב גם לשחק תפקיד בבחירת בן זוג, באמצעות זיהוי של פרומונים ^1-5. תפקידים חשובים ומגוונים אלה הפכו את מערכת טעם החרקים יעד משכנע של חקירה כיצד מערכות חושיות לתרגם אותות סביבתיים לתפוקות התנהגותי רלוונטיות.

היחידה העיקרית של מערכת טעם melanogaster דרוזופילה היא שיער הטעם, או Sensillum. מולקולות להיכנס Sensillum דרך נקבובית ^ב2,6 קצהו. Sensilla נמצא על labellum, הרגליים, מרווח הכנף, והלוע ^6.

פרוטוקול

הפרוטוקול הבא עומד בכל הנחיות טיפול בבעלי החיים של אוניברסיטת ייל.

1. חומרים כימיים וציוד הכנה

1. התקנת ציוד הקלטה (איור 1 א).
   1. בחר מקום להתקנת מתקן שהוא ללא שינויים גדולים בטמפרטורה או לחות וגם מבודד ממקורות רעש חשמלי ומכאני, כגון מקררים וצנטריפוגות.
      

תוצאות

איור 5 א מציג את התגובה של Sensillum L לסוכר, סוכרוז. אותו Sensillum אינו מגיב למתחם המר, berberine. איור 5 מראה כי Sensillum סוג I, אשר מכיל תאי עצב מגיב מרים, מציג קוצים גדולים המשרעת בתגובה לberberine, וקוצי משרעת קטנים יותר בתגובה לסוכרוז. L sensilla להציג תגובת רקע מינימאלית לשליטת הממס, TCC, בזמן שאני sensilla להציג כמעט שום תגובה לTCC (איור 5). לקבלת מידע נוסף על תגובות מלח ומים של GRNs labellar, עיין Hiroi ^10. <.......

דיון

sensilla Labellar להשתנות בקלות ההקלטה, בשל הבדלים במורפולוגיה וארגון אנטומיים. לפעמים Sensillum אינו מגיב לכל tastants, אפילו אחד, כי ידוע כדי לעורר תגובה חיובית. התדירות שבה זה קורה משתנה בהתאם לסוג Sensillum. sensilla L הם הכי מגיב באופן עקבי וקלים יחסית לגשת בשל אורכם. באופן כללי, sensilla S מגיבים באופן עקבי, אבל האורך הקצר שלהם והעמדה בlabellum ליצור קשר טוב מאתגר. אני sensilla ניתן לגשת בקלות רבה יותר, תלוי בזווית של ההכנה, עם זאת, הם לעתים קרובות יותר שאינם מגיבים. על כל ה.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מיקרוסקופ זום סטריאו	אולימפוס	SZX12 DFPLFL1.6x עיניות PF: WHN10x-H/22	מסוגל להגדיל ~150X עם מעמד לשולחן למרחק עבודה ארוך מערכות
קינטיות	שולחן נגד רטט	ספסל Mate2210
מיקרומניפולטורים	Narishige	NMN-21
מעמדים מגנטיים	ENCO	דגם #625-0930
התייחסות מחזיק אלקטרודה	מכשיר הרווארד	ESP/W-F10N	ניתן להרכבה על פיפטה סרולוגית של 5 מ"ל לטווח מורחב
דיוק עולמיים	של חוטי כסף	AGW1510	קוטר 0.3-0.5 מ"מ
מעמד
גנרי יציאה צינור			גנרי, קוטר 1 ס"מ
צינורות פלסטיק גמישים	Nalgene	8000-0060	דרגה VI 1/4 בקוטר פנימי
500 מ"ל בקבוק			גנרי, עם זרוע צד
משאבת אקווריום	Aquatic Gardens	משאבת אוויר 2000
מקור אור סיבים אופטיים	דולן-ג'נר תעשיות	סיבים-לייט 2100
כרטיס לבן/נייר	Whatman	1001-110
מערכת רכישה דיגיטלית	Syntech	IDAC-4	אלטרנטיבה: National Instruments NI-6251
Headstage	Syntech	DTP-1	Tasteprobe
Tasteprobe מגבר	Syntech	DTP-1	Tasteprobe
קליפים תנין	Grainger	1XWN7	כל מותג הוא בסדר
		חשמל מבודד	גנרי
זהב מחבר פינים	World Precision Instruments	5482
מחשב	אישיVostro של Dell		בודק תאימות למערכת רכישה דיגיטלית ולתוכנה
תוכנת רכישה	Syntech	Autospike	Autospike פועל עם IDAC-4; לחלופין, השתמש ב-LabView עם רדיד אלומיניום NI-6251
ו/או כלוב			סיכוך רעשים אלקטרומגנטי
נימי זכוכית בורוסיליקט	Precision Instruments	1B100F-4
מושך פיפטה	Sutter Instrument Company	דגם P-87 Flaming/Brown Micropipette Puller
Beadle ו-Ephrussi Ringer Solution			ראה מתכון בסעיף הפרוטוקול
Tricholine citrate, 65%	Sigma	T0252-100G
סטריאומיקרוסקופ	אולימפוס	VMZ 1x-4x	מסוגל להגדלה של פי 10-40
דלי			גנרי
p200 קצות			גנרי
מחט עמוד השדרה	Terumo	SN*2590
1 מ"ל מזרק	Beckton-Dickenson	301025
שואב זבובים			מורכב מקצות פיפטה P1000, צינורות פלסטיק גמישים ורשת
דוגמנות חימר			מלקחיים גנריים
	כלי מדע עדינים מאת Dumont	11252-00	#5SF (טיפים עדינים במיוחד)
מזרק 10 מ"ל	Beckton-Dickinson	301029
	Tygon	R-3603

מכשירי רטרט פלסטיק חרוטי חוט פאראדיי World קרח פיפטה צינורות פלסטיק