התגובה החיסונית המארחת לזיהום הפתוגן היא תהליך מוסדר היטב. ניצול מודל חשיפת ריאות lipopolysaccharide בעכברים, ניתן לבצע הערכות ברזולוציה גבוהה של המנגנונים המורכבים הקשורים להיווצרות מחלה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הניצול של לוע התחתון Intratracheal PAMP מנהל ושטיפה ברונכואלוואולרית כדי להעריך את תגובת מארח חיסון של עכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
התגובה החיסונית המארח לפתוגנים היא תהליך ביולוגי מורכב. רוב במחקרי vivo מועסק קלסי לאפיין אינטראקציות בין המאכסן לפתוגן לנצל את זריקות intraperitoneal של חיידקים בחרו או דפוסי הפתוגן הקשורים מולקולריים (PAMPs) בעכברים. בעוד טכניקות אלה הניבו נתונים עצומים הקשורים pathobiology מחלות זיהומיות, מודלים זריקת intraperitoneal הם לא תמיד מתאימים ללימודי אינטראקציה המאכסן לפתוגן בריאות. ניצול מודל דלקת ריאות חריף בעכברים, ניתן לבצע ניתוח ברזולוציה גבוה של מארח תגובה חיסונית מולדת ניצול lipopolysaccharide (LPS). כאן, אנו מתארים את השיטות לניהול LPS באמצעות ממשל intratracheal הלוע התחתון לא נזקק לניתוח, לעקוב אחר פרמטרים קליניים הקשורים להיווצרות מחלה, ולנצל את נוזל שטיפת רונכואלוואולרית כדי להעריך את התגובה החיסונית המארחת. הטכניקות המתוארותחלים נרחב ללימוד התגובה החיסונית המולדת המארח למגוון רחב של PAMPs ופתוגנים. כמו כן, עם שינויים קלים, יכולות להיות מיושמות גם בטכניקות אלה במחקרים להערכת דלקת בדרכי הנשימה ואלרגיות ביישומים תרופתיים.
מבוא
דלקות ריאה הקשורים למיני חיידקים פתוגניים הם גורמים שכיחים לתחלואה ותמותה בעולם. קביעת המנגנונים המניעים את התגובה החיסונית המארחת לפתוגנים אלה יהיו לקדם את הפיתוח של אסטרטגיות חדשניות למניעה וסוכנים טיפוליים שיהיה להחליש את ההשפעה של זיהומים אלה. המטרה הכללית של הפרוטוקול המתואר כאן היא לספק את המשתמש עם שיטה גמישה כדי להעריך את התגובה החיסונית המולדת המארח לזיהום הפתוגן באמצעות דפוס הפתוגן הקשורים מולקולרי (PAMP) כתחליף לחיידקים חיים. רוב המחקרים הקודמים להערכת התגובה החיסונית המולדת לחיידקי המארח התמקדו בדגמי הצפק בשל הקלות היחסית של ביצוע. בעוד מודלים אלה הם שימושיים מאוד והביאו להתקדמות משמעותית בתחום של אינטראקציות בין המ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל המחקרים נערכו באישור הוועדה המוסדי לטיפול ושימוש (IACUC) לוירג'יניה טק ובהתאם למכונים הלאומיים לבריאות מדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה.
1. חיסון Intratracheal (את זה) של LPS באמצעות מנהל מלוע תחתון
- ודא שכל חיה היא ייחודי מזוהות או באמצעות אגרוף באוזן, תג אוזן, או שיטה אחרת שאושרה מוסדי.
- רשום את משקל הגוף הבסיסי ואת טמפרטורת גוף לכל חיה.
- הכן את מניית העבודה של L....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
דופן התא של חיידקי גרם שלילי מורכבים מLPS, שהוא נרחב ביותר בסביבה. שאיפה של LPS באוכלוסיות אנושיות רגישות מחריפה תגובתיות דרכי הנשימה ומסוגלת להפעיל response11 חיסונית חזק. LPS גם PAMP נפוץ בשימוש במודלים של עכבר כדי לעורר תגובה חיסונית מולדת חזקה. בפרוטוקול מתואר כאן, העכברים קיבלו מינון זה של LPS מבודד מE. coli (סרוטיפ 0111: B4) באמצעות ממשלו הלוע התחתון. במודלים של חשיפת LPS, גם טמפרטורת הגוף ומשקל הם סמנים פונדקאיות אופייניים לתחלואה בעלי חיים והתקדמות מחלה. אתגר LPS .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
השלבים הקריטיים ביותר להערכת התגובה החיסונית המארחת בריאות עכבר בהצלחה הוא כדלקמן: 1) לבחור את הזן המתאים עכבר ומין עבור הדגם נבדק; 2) לייעל את משלוח PAMP לריאות; 3) בצורה נכונה לאסוף ולעבד את בלף; ו -4) לתקן כראוי ולהכין של הריאות להערכות histopathological.
הבחירה של זן עכבר היא גורם חשוב בהערכת התגובה החיסונית המארחת. C57Bl / 6 עכברים בדרך כלל נחשבים רקע העכבר האופטימלי לחקר חסינות מולדת עקב תגובת העיקום וחזקה .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שום אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
המחברים מודים למכללה האזורית VA-MD ברפואת וטרינרית למתן תמיכת ליבה וטכנית עבור פרויקט זה. עבודה זו נתמכת על פיתוח קריירה פרס NIH (K01DK092355) על ידי.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| C57Bl/6J | מלאי מעבדת ג'קסון | 000664 | |
| קומפקטי בקנה | מידה Ohaus Scale Corporation | 71142845 | |
| מדחום רקטלי לבעלי חיים קטנים | Braintree Scientific | TH 5 | |
| בדיקה רקטלית למכרסמים | Braintree Scientific | RET 3 | |
| Ear Punch | Braintree Scientific | EP-S 901 | |
| ליפופוליסכריד מ-E. coli 0111:B4 | InvivoGen | LPS-EB | |
| 1x Phosphate Buffered Saline | Life Technologies | 10010-023 | |
| איזופלורן | בקסטר | 40032609 | |
| מתן תוך-קנה ודוכן ניפוח ריאות | ICAP ייצור | n/a | |
| מעמד אינטובציה למכרסמים | Braintree Scientific | מספריים RIS 100 | |
| (קהה/חד) | פישר סיינטיפיק | 13-806-2 | |
| מלקחיים (ישר) | פישר סיינטיפיק | 22-327-379 | |
| מלקחיים (45º, מעוקל) | פישר סיינטיפיק | 10-275 | |
| מספריים (קהה/בוטה) | פישר סיינטיפיק | 08-940 | |
| פיפטה (200 ומיקרו; l קיבולת) | גילסון | F123601 | |
| אתנול | סיגמא | 459844 | |
| 1 מ"ל מזרק | BD רפואי | 301025 | |
| 10 מ"ל מזרק | BD רפואי | 301604 | |
| 27 גרם x 0.5 במחט | BD רפואי | 305109 | |
| מיקרוצנטריפוגה מקוררת | פישר סיינטיפיק | 13-100-676 | |
| צינורית קנה הנשימה 1.2 מ"מ עם מתאם לואר | מנגנון הרווארד 732836 | ||
| תמיסת מלח מאוזנת של האנק | טכנולוגיות חיים | 14025-076 | |
| 4-0 תפר כירורגי קלוע משי | Ethicon | A183 | |
| ערכות מחבר לואר לצינור | הרווארד מכשיר | 721406 | |
| ערכת Luer Stopcock | מכשיר הרווארד 721664 | ||
| Tygon Formula E-3603 צינורות מעבדה | Sigma | R-3603 | |
| תמיסת פורמלין, חוצץ ניטרלי, 10% | Sigma | HT501128-4L | |
| עכבר IL-1β OptEIA ELISA Kit | BD Biosciences | 559603 | |
| Mouse IL-6 OptEIA ELISA Kit | BD Biosciences | 550950 | |
| עכבר TNF-α OptEIA ELISA Kit | BD Biosciences | 560478 | |
| Hemocytometer | Hausser Scientific | 3520 | |
| Hemocytometer כיסוי משקפיים | Thermo Scientific | 22-021-801 | |
| Trypan Blue | Thermo Scientific | SV3008401 | |
| Cytology Funnel Clips | Fisher Scientific | 10-357 | |
| Cytology Funnels | Fisher מדעי | 10-354 | |
| כרטיסי סינון | פישר סיינטיפיק | 22-030-410 | |
| מיקרוסקופ שקופיות | פישר סיינטיפיק | 12-544-1 | |
| כיסוי משקפיים | פישר סיינטיפיק | 12-540A | |
| ציטוספין ציטוצנטריפוגה | תרמו סיינטיפיק | A78300003 | |
| Diff ערכת צביעה מהירה | פישר סיינטיפיק | ||
| הרכבה בינונית | פישר מדעי | SP15-500 |
מקורות
- Matute-Bello, G., et al. An official American Thoracic Society workshop report: features and measurements of experimental acute lung injury in animals. Am. J. respir. Cell Mol. Biol. 44, 725-738 (2011).
- Egger, C., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
