פרוטוקולים להכנה יעילה של דגימות אחידות של קרדית עכביש, התפשטות של צמחים ניסיוניים, והערכה של נזק צמח, כפי שנדרש למחקרים של אינטראקציה בין צמחים למזיקים פותחו.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
פרוטוקולים להכנה יעילה של דגימות אחידות של קרדית עכביש, התפשטות של צמחים ניסיוניים, והערכה של נזק צמח, כפי שנדרש למחקרים של אינטראקציה בין צמחים למזיקים פותחו.
קרדית העכביש שני המנומרת, Tetranychus urticae, הוא אוכלי עשב arthropod polyphagous בכל מקום שייזון ממגוון רחב להפליא של מינים, עם יותר מ 150 של ערך כלכלי. זה מזיקים עיקריים של גידולים בחממות, בעיקר בהסולניים ודלועיים (למשל, עגבניות, חצילים, פלפלים, מלפפונים, קישואים) ונוי חממה (למשל, ורדים, חרציות, ציפורנים), גידולי שדה שנתי (כגון תירס, כותנה, סויה, וסלק סוכר), ובתרבויות רב שנתית (אספסת, תותים, ענבים, הדרים, ושזיפים) 1,2. בנוסף לpolyphagy הקיצוני שהופך אותו למזיק חקלאי חשוב, ט יש urticae נטייה לפתח עמידות למגוון רחב של חומרי הדברה וacaricides המשמשים לשליטתה 3-7.
ט urticae הוא אורגניזם ניסיוני מצוין, שכן יש מחזור חיים מהיר (7 ימים ב27 ° C)ויכול להישמר בקלות בצפיפות גבוהה במעבדה. שיטות לassay ביטוי גנים (כולל הכלאה באתרו ומכתים נוגדן) וכדי להשבית את הביטוי של גנים אנדוגניים קרדית עכביש באמצעות התערבות RNA פותחו 8-10. לאחרונה, כל רצף הגנום של ט ' urticae כבר דיווח, יצירת הזדמנות לפתח אוכלי עשב המזיק הזה כאורגניזם מודל עם משאבי גנומי מקבילים שכבר קיימים בחלק ממפעליה מארח (thaliana ארבידופסיס וlycopersicum Solanum העגבניות) 11. יחד, אורגניזמים מודל אלה יכולים לספק תובנות לתוך בסיסים מולקולריים של אינטראקציות בין צמחים למזיקים.
הנה, שיטה יעילה לאיסוף מהיר וקל של מספר גדול של קרדית נקבה הבוגרת, היישום שלהם על מארח מפעל ניסיוני, וההערכה של נזק הצמח בשל האכלת קרדית עכביש מתוארות. הפרוטוקול המובא enables אוסף מהיר ויעיל של מאות אנשים בכל שלב התפתחותי (ביצים, זחלים, נימפות, זכרים בוגרים, ונשים) שיכול לשמש ליישום ניסיוני שלאחר מכן.
אינטראקציה בין צמחים למזיקים היא נושא בעל חשיבות מדעית וכלכלית גדולה. זה מבחינה היסטורית נחקר באמצעות שני צמחי היבול (כגון עגבניות) וצמח המודל, א ' thaliana. בשני המקרים, רגישות של צמח לאוכלי עשב ניתן הייתה למדוד באופן ישיר דרך הערכה של פנוטיפ צמח לאחר התקף אוכלי עשב או בעקיפין באמצעות ההערכה של ביצועי מזיקים.
מדידה ישירה של רגישות צמח נוצלו בעבר למספר מיני חרקים מזיקים באמצעות מגוון של שיטות. לדוגמא, herbivory של זחלי lepidopteran נמדד כהערכה של החלק מרקמות צמח שנצרכו על ידי שתי xylostella Plutella (עש Diamondback) או Trichoplusia ni....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
1. תחזוקה של עכביש קרדית האוכלוסייה
הערה: קרדית עכביש שגדל על קליפורניה כליה אדומה שעועית (Phaseolus vulgaris).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
שימוש 20-30 צמחי שעועית שורצים, אחד יכול לאסוף סביב 2,000 קרדית נקבה בוגרת באמצעות הנפות. הזמן הנדרש לשורץ 10 צמחים עם 20 קרדית לכל צמח הוא כ 15 דקות אם בעזרת מברשת להעביר קרדית. שילובים של שיטות איסוף ויישום מוצגים באיור 2.
פרוטוקול זה מייצר תוצאות לשחזור של נזק צמח, הוכחת כי קרדית נאספים ממצב דומה פיסיולוגי ומתאים למחקרי אינטראקציה קרדית צמחים עכביש (איור 3). כדי להעריך שחזור פ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
וידאו זה מדגים פרוטוקולים משמשים כדי לבודד ושורצים צמחים עם מספר גדול של קרדית נקבה הבוגרת. למרות שהצגנו בפני פרוטוקול זה באמצעות א thaliana, ניתן להשתמש בו לכל מערכת אינטראקציה קרדית צמחים עכביש וכיום הוא מיושם בהצלחה גם על צמחי עגבניות וגפן (vinifera ויטיס). תשואות פרוטוקול תוצאות לשחזור, המציין כי קרדית נאספים ממצב פיסיולוגי דומה (איור 3).
בעוד פרוטוקולים אלה הם פשוטים לביצוע.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
פרויקט זה מומן על ידי ממשלת קנדה באמצעות Genome Canada והמכון לגנומיקה של אונטריו (OGI-046), וקרן המחקר של אונטריו – מנהיגות גלובלית בגנומיקה ומדעי החיים GL2-01-035 (ל-M.G. ו-V.G.). T.V.L. הוא עמית פוסט-דוקטורט בקרן למחקר מדעי בפלנדריה (FWO).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| חומר צמחי: | |||
| שעועית אדומה קליפורניה | סטוקס, תורולד, ON, קנדה | בת שבועיים, נגועה היטב בקרדית עכביש יומיים או שלושה לפני השימוש. ניתן להשתמש בזנים אחרים של Phaseolus vulgaris. | |
| כימיקלים: | |||
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P9416 | פתרון מלאי 1% מוכן כדי לפשט את הצעת המחיר |
| מי | בטמפרטורת החדר, הלם חום וקור משפיעים על שיעור ההישרדות והביצועים של הקרדית | ||
| חומרים וציוד אחרים: | |||
| מגש | |||
| סט מספריים | |||
| כוסות | |||
| מגבות | |||
| סטים של מסננות | תוצרת הבית | הוראות מפורטות זמינות | |
| מברשת | |||
| פיפטות | |||
| קצות | 0.2 ו-1 מ"ל | ||
| 1.5 מ"ל צינורות צנטריפוגה | |||
| משאבת | משאבה מסוג אקווריום עם זרימת אוויר הפוכה. ניתן להשתמש בקו ואקום. ירידת הלחץ הנדרשת היא כ. 2-4 psi | ||
| סורק סטריאוסקופ | |||
| Epson | V30 | כל סורק שטוח המאפשר מידה נחוצה של שליטה על איכות הסריקה. אנו משתמשים ב- Epson V30 לניסויים שלנו. | |
| מחשב | Windows או OS X PC התואם לחומרת הסורק ולתוכנת Adobe Photoshop. | ||
| תוכנת Adobe Photoshop | Adobe Systems Inc., סן חוזה, קליפורניה, ארה"ב | שונות | כל גרסה עם כלי היסטוגרמה כלולה. |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.