הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ייצור והשרשה של מדי עיבור Dual-אלמנט הזעיר למדידה

9.9K צפיות

DOI:

10.3791/51739

18 בספטמבר 2014

במאמר זה

סיכום

המדידה in vivo של התכווצויות שרירים חלקים לאורך מערכת העיכול של חיות מעבדה נותרה טכניקה רבת עוצמה, אם כי לא מנוצלת כראוי. מדי מתח גמישים עם שני אלמנטים אינם זמינים מסחרית ודורשים ייצור. פרוטוקול זה מתאר בניית מדי מתח אמינים וזולים להשתלה חריפה או כרונית במכרסמים.

תקציר

תפקוד לקוי של מערכת העיכול נותר גורם עיקרי לתחלואה ותמותה. ואכן, תנועתיות מערכת העיכול (GI) בבריאות ובמחלות נותרה תחום מחקר פרודוקטיבי עם למעלה מ-1,400 מחקרים בבעלי חיים שפורסמו בחמש השנים האחרונות בלבד. פותחו טכניקות רבות לכימות פעילות השרירים החלקים של הקיבה, המעי הדק והמעי הגס. טכניקות in vitro ו-ex vivo מציעות כלים רבי עוצמה למחקרים מכניסטיים של תפקוד מערכת העיכול, אך מחוץ להקשר של המערכות המשולבות הטבועות באורגניזם שלם. בדרך כלל, מדידת התכווצויות שרירים חלקים של הקיבה כללה תכשיר מורדם יחד עם הכנסת חיישן לחץ הממוקם בניתוח, עומס לחץ סטטי כגון בלון מנופח קלות או על ידי ניפוח הקיבה בנוזל תחת משוב מבוקר ברוסטטי. עם זאת, רבות מהגישות הללו מציגות חסרונות ייחודיים הן לגבי פרשנות התוצאות והן לגבי הישימות לשימוש in vivo במודלים מודעים של חיות ניסוי. השימוש במדי מתח דו-אלמנטיים שהוצמדו למשטח הסרוזלי של מערכת העיכול הציע יתרונות ניסיוניים רבים, שעשויים להמשיך לעלות על החסרונות. מכיוון שמדדים אלה אינם זמינים מסחרית, מצגת וידאו זו מספקת מדריך מפורט שלב אחר שלב לייצור העיצוב הנוכחי של מדדים אלה. מד המתח המתואר בפרוטוקול זה הוא תכנון לרישום תנועתיות הקיבה בחולדות. עיצוב זה שונה לתיעוד פעילות שרירים חלקים לאורך כל מערכת העיכול ודורש רק וריאציה עדינה בייצור הכולל. כלולים נתונים מייצגים מכל מערכת העיכול וכן דיון בשיטות ניתוח, פרשנות נתונים והצגתם.

מבוא

מחקרי ניסויים ששיא בתנועתיות מערכת העיכול vivo (GI) על פני מספר תנאי ניסוי יישאר כלי רב עוצמה להבנת התהליכים התקינים וpathophysiological הבסיסיים דרושים הומאוסטזיס תזונתי. באופן מסורתי, מתודולוגיות ניסיוניות רבות, חלקם עם קווי דמיון לאלה שנמצאו בפרקטיקה קלינית 1, להיות מועסקת לכמת באופן ישיר משינויים בשיעור GI התכווצות 2-5, לחץ intraluminal 6, 7, או המעבר במערכת העיכול של סמנים שאינם נספגים 8, 9 או איזוטופים יציבים 10-12. לכל אחת מהטכניקות הללו יתרונות וחסרונות ייחודיים, שטופלו בעבר בספרות. לדוגמא, השירות של מנומטריה הבלון לכמת שינויי לחץ נחקר בשל עמידתו העצמית של חומר הבלון תוך התאוששות במערכת העיכול של סמני nonabsorbable דורשת הרדמת חסד האנימה הניסיוניתl לנקודת נתונים יחיד. לאחרונה, דווח היישום והאימות של קטטר לחץ דם זעיר שמציע שיטה לא ניתוחית לניטור התכווצות קיבה בחולדות ועכברים 3. בעוד מתמר לחץ להציב orogastrically מבטל למעשה משתנים מבלבלים על תפקוד מערכת העיכול על ידי הימנעות מפעולות כירורגיות פולשניות, גישה כזו מתאימה רק להכנות בהרדמה. יתר על כן, חוסר ההדרכה חזותית אינו מאפשר מיקום של המתמר בתוך אזורים הספציפיים של הקיבה עולה בקנה אחד. ככזה, יישום זה מוגבל לקיבה או המעי הגס מאז הדמיה, בשילוב עם חוט המתמר יחסית נוקשה, בתוך התריסריון או מעי עקום הוא לא אופציה.

באופן דומה, biosusceptometry הנוכחי טכניקת biomagnetic החלופית (ACB) קבלה תוקף לניתוח התכווצות GI 4. בעוד טכניקת ACB מספקת ap לא פולשניתproach למדידת התכווצויות במערכת העיכול, ACB סובל ממגבלה דומה שבשימוש במדיה מגנטי זיהוי בליעה אינו מאפשר רישום מדויק של אזורים הספציפיים של מערכת העיכול. מגבלה זו ניתן להתגבר באמצעות ההשתלה כירורגית של סמנים מגנטיים. עם זאת, טכניקת ACB מחייבת כי בעל החיים להיות מורדם לאיסוף נתונים.

Ultrasonomicrometry כבר מועסק בכמה GI לומד 13, 14 כדי לנצל את גודלו הקטן, מרחבי, ויתרונות זמניים של משדר גביש / מקלטים פיזואלקטריים. גלים של התכווצות שריר חלק בקיבה לא יהיו אירוע בתדירות גבוהה ולהתרחש בשיעור של כ 3 - מחזורים / 5 דקות. לכן, היתרונות זמניים של sonomicrometry עשויים להיות מיותרים כדי להצדיק את העלות. יתר על כן, בעוד שתנועה ליניארית נמדדה במדויק עם sonomicrometry, מגבלות הוצגו לגבי נתונים במערכת העיכול מדויקיםפרשנות שעלולה להיגרם כתוצאה מהשתלת מספר מספיק של גבישים 14.

בהתבסס על העיצובים המקוריים של באס ועמיתים 2, 15 פרוטוקול דמיין זה מתעד את ייצור צעד אחר צעד ויישום ניסיוני של מיניאטורי, מדי עיבור אלמנט כפול שיש להם רגישות גבוהה וגמישות להקלטת התכווצויות שריר חלק לאורך כל מערכת העיכול באופן מלא יותר בדרכי. הממדים של אלמנטי מד העיבור מתאימים לכל יישום מכרסם מאז רגישות וגודל של מד העיבור המוגמר התלויים ביותר על גיליונות סיליקון מתמצתים את האלמנטים. מדי עיבור אלו מותאמים בקלות ליישום אקוטי וכרוני במודלים של בעלי חיים במעבדה בהרדמה ומתנהגים בחופשיות ובכך לספק טכניקה יחידה לכימות התכווצויות שריר חלק.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הנהלים המיושמת המכונים הלאומיים לבריאות הנחיות ואושרו על ידי ועדת הטיפול ושימוש בבעלי חיים המוסדיים בהרשי המכללה לרפואת פן סטייט. חולדות שוכנו באמצעות פרקטיקות ביבר נפוצות. הערה: פרוטוקול זה משתמש חולדות זכרים וויסטר, ≥8 שבועות של גיל ותחילה במשקל 175 - גרם 200.

.1 נהלים לייצור של מד עיבור

  1. רוב נוסע ורכיבים יישארו זמינים מחברות המקוריות או יורשו ומסוכמים בטבלה 1.
  2. הכנה ומליטה של ​​שני מדי עיבור אלמנט יחיד
    1. ידית אלמנטי מד העיבור (EA-06-031-350) בזהירות עם # 5 מלקחיים דומון נקיים. כדי להגביל את התנועה לא רצויה של אלמנטים, להשתמש חתיכה קטנה, נקייה, דביקה של נייר כאשר צד הדבק פונה כלפי מעלה כדי לאבטח אלמנטים למשטח העבודה ללא הסיכון של זיהום או הידבקות מוגזמת.
    2. בונד שני מד עיבור אחתאלמנטי גב אל גב, כדי ליצור אלמנט כפול. נקה את הגב של כל סרט אלמנט עם אלכוהול איזופרופיל ולאפשר ייבוש על ידי אידוי (ייבוש עם גזה לעתים קרובות מציג מזהמי סיבים שקשה להסיר). תחת הדרכתו סטראו (1 - 3x), ובעזרת מברשת נקייה אמן (צמר גמלים 10-0), להחיל שכבה דקה של דבק אפוקסי-פנוליות לחלק האחורי של אלמנט אחד ומייד למקם את התנגדותו אחורית של האלמנט השני במגע וליישר את הרשתות בנייר כסף (איור 1 א).
    3. הנח את היסודות מלוכדות ב50 - תנור C ° 60 O / N לרפא אפוקסי באופן מלא.
      הערה: אל מהדק את אלמנטי ערובה מאז אפוקסי העודף עלול לחלחל אל האלמנטים ולחץ עלול לגרום לחוסר תיאום בין הרשתות. יש אפוקסי בשני החלקים בקירור חיים שמישים של רק 6 שבועות לאחר הערבוב. בונד ולרפא אספקה ​​מספקת של אלמנטים בזמן אחד ולאחסן אותם בנקיה, אבק חינם, סביבה לשימוש מאוחר יותר.
  3. שינוי גודל וחיווטמדי עיבור אלמנט כפול
    1. לקצץ אלמנטים כפולים קשורים לגודל סופי של 3 x 3 מ"מ עם אזמל # 11 או סכין גילוח קצה אחד. עיכוב זמירה החלק העליון של האלמנטים כפולים בשלב זה על מנת שיהיה אזור לטיפול באלמנט (איור 1 א) בשלום.
    2. כל רכיב דורש חוט ארבעה מנצח מפוברק משלושה מוליכים, bondable, טפלון מבודד תיל (P / N 336-FTE). לפרק גדיל קלוע 30 סנטימטר אחד של חוט שלושה מוליכים לשלושה חוטים מכונן.
    3. כדי להפוך כבל ארבעה תיל, זוג אחד של חוטים בודדים וכתוצאה מכך עם החוט כמו בצבע הכלול באורך 30 סנטימטר שני של שלושה תיל מוליך. בשלבים הבאים, חוטים צבעוניים התואמים אלה יצטרפו בסוף המסוף כדי ליצור חוט משותף למגרש ואת מד המתח הסופי (איור 1).
    4. הסר כ 1 מ"מ של בידוד טפלון משני הקצוות של כל חוט עם חשפניות תיל תרמית. באמצעות סול רוזין מופעל(נקודת התכה 183 ºC) דרינג הלחמת טמפרטורת שטף ונמוך פח החוט מסתיים בעיפרון הלחמה.
    5. לקראת השלב הבא, יש צורך בקצה microsoldering ליצירת משותפת הלחמה דיסקרטית יותר כדי למנוע נזק חום לשכבת הסרט של האלמנט (איור 1 ג). לפברק קצה microsoldering קטן יותר, לעטוף חתיכה קטנה של חוט נחושת (~ 0.25 מ"מ קוטר) פעם אחת סביב קצה ההלחמה הסטנדרטי, על מנת להבטיח כי החוט נחושת חורג האורך של קצה ההלחמה הסטנדרטי.
    6. שטף רק רפידות ההלחמה בצד אחד של האלמנט הכפול מלוכד עם מברשת נקייה 10-0 ולהוביל הלחמה אחת ואחת מההפניות הנפוצות לזווג לכרית ההלחמה (1D איור). שטף השיורי ניתן להסיר אחר כך עם מברשת נקייה הטבולה בממס שרף.
    7. חזור על התהליך בצד השני, על מנת להבטיח כי החוט המוליך נפוץ שנותר הוא מולחם ללוח מול העופרת המשותפת המקורית.
  4. בדיקהnd epoxying מדי עיבור אלמנט כפול
    1. מחברים לשקע זהב הלחמה (E363 / 0) לקצוות חופשיים של מוביל החוט. בשלב זה, לחבר את מד העיבור למגבר הקלטה (שיפורט להלן) כדי לבדוק את תקינות ההרכבה האלמנט הכפולה.
    2. מדוד את ההתנגדות עם מד וולט אוהם באיכות טוב. אלמנטים להירשם התנגדות של כ 350 Ω. חיבורים לקויים Resolder בנקודה עם הלחמה טרי זה.
    3. אם חיבורי ההלחמה והרכבת האלמנט הכפול נחשבים משביעות רצון, לקצץ את כל סרט אלמנט שנותר.
    4. לבודד את מפרקי הלחמה על רפידות הלחמת אלמנט בשכבה דקה של שרף בשני חלקים אפוקסי סיליקון הגומי (P / N E211). לקבלת התוצאות הטובות ביותר, לרפא בחלקו השרף ל20 - 30 דקות לפני היישום (איור 1E).
  5. Encapsulating מדי עיבור אלמנט כפול בסיליקון
    1. לחתוך שלוש חתיכות של 0.5 מ"מ גיליון עבה סיליקון (P / N 20-20) ל15 מ"מ 2 וגלהישען סיליקון עם מים מזוקקים. לחתוך חתיכה של גיליון סיליקון אחד לU-צורה על מנת להתאים ההרכבה האלמנט הכפולה הסופית ללא עיוות סיליקון encapsulating (איור 1F).
    2. מעיל המשטחים הפנימיים של גיליונות סיליקון ללא חריץ עם דבק סיליקון ברור.
    3. כריך ההרכבה האלמנט הכפול בתוך החריץ ואת הגיליונות החיצוניים מיושרים, אז לחץ בעדינות את כל סיליקון עודף, כמו גם בועות אוויר, מהמרכז כלפי חוץ. מהדק בזהירות את ההרכבה במארז בין שני בלוקים של שורת מניות מתכת ל24 שעות על מנת להבטיח עובי אחיד ושאין עיוותים להתרחש.
    4. לאפשר סיליקון העודף להישאר לאורך הגבולות של ההרכבה והריפוי. עודף זה יוסר כאשר סיליקון גיליון גזוז לממדים הרצויים הסופיים (בדרך כלל 6 מ"מ x 8 מ"מ; איור 1G).
  6. השלמת מחבר חוט והכיול
    1. לחזק משותף ההלחמהמהמחברים לשקע זהב על חוט מסוף הפרט מוביל עם 3 מ"מ (1/8 אינץ) לכווץ צינורות וליישר בתוך הכן אלקטרודה פלסטיק (MS363, איור 1H). אבטח את הדום אלקטרודה וחוטים עם 0.125 ו0.25 קוטר סנטימטר לכווץ צינורות כדי למנוע ניתוק במהלך הניסוי (איור 1 ט).
    2. אותות מד עיבור מעובדים באמצעות מגבר רווח גבוה גשר (P / N AMP-01-SG). חבר את מד העיבור למגבר באמצעות כבל עם תקע הזדווגו (363 - SL / 6) כדי להתאים את הדום אלקטרודה. כובע הליכי מספק אבטחה נוספת כדי לשמור על אותות רציפים במהלך הניסוי.
    3. התאם את הגדרות גשר, מאזן ורווח המגבר למגרש ואת מד לחץ ייעודי להוראות יצרן. הצמד את סוף מד העיבור שבו החוטים לצאת אופקי כדי מהדק נוקשה ולכייל על ידי הצבת 1 גרם עומס סטטי בצד השני כפי שתוארו במקור על ידי Pascaud ועמיתים2, 16, 17.

2 ניתוחים לאקוטיים השרשה של הזנים Gage

  1. טיפול בבעלי חיים ואופן הכנה:
    1. מזון לשלול חיות ניסוי בלילה שלפני השתלה כירורגית (מים עשויים להיות כרצונך בתנאי).
    2. עמוק להרדים את החיה. Thiobutabarbital (100 - 150 מ"ג / קילוגרם; ip לחולדות) הוא מועדף למסוף השתלת מד עיבור וניסויים בשל השפעה מתמשכת הרדמה ושינוי מינימאלי של רפלקסים קיבה בעכברים 10 (כלומר, שאינה הישרדות.). מבחן להיעדר רפלקס קמצוץ כפה כדי לקבוע עומק ההרדמה.
    3. הכן את החולדה לניתוח ספטית כפי שהוכתב על ידי עיצוב ניסיוני ואישר הנחיות IACUC כולל חיטוי כלים כירורגיים, גילוח אתרי חתך, החלת משחה העין וטרינר וחיטוי כל התחומים כירורגית הערה:. אם מד העיבור הוא להיות מותאם לשימוש כרוני, לעקרמד העיבור רק עם אתילן אוקסיד עיקור (גז). השימוש בטכניקות חום או עיקור כימי עלול לגרום נזק למגרש ואת מד הלחץ.
  2. אינטובציה לקנה הנשימה לניסויי מסוף:
    1. למשך זמן ארוך, מסוף, ניסויים צנרר העכברוש עם צינור לקנה הנשימה כדי לשמור על נתיב אוויר פתוח. הפוך 1 - חתך קו האמצע 2 סנטימטר בצד הגחון של הצוואר מהגבול הנחותים של הלסת התחתונה לחריץ sternal.
    2. הפרד את שרירי רצועה הבסיסיות באמצעות לנתיחה בוטה על קו האמצע כדי לחשוף את קנה הנשימה. לבודד את קנה הנשימה מהוושט שבבסיס ומניח את לולאה של 3-0 תפר ethilon בין קנה הנשימה והוושט כדי ליצור מייתר.
    3. פתח את קנה הנשימה anteriorly על ידי ביצוע incison קטן בקרום בין שתי טבעות הסחוס של קנה הנשימה רק דיסטלי לבלוטת התריס. הכנס חתיכה קטנה של צינורות פוליאתילן (P / N PE-270), 5 מ"מ באורך (ומשופע בקצה אחד) לתוך קנה הנשימהולאבטח אותו למקומו עם המייתר.
    4. שים את שרירי הרצועה אחורי במקום ותפרת את העור שמעליה עם 3-0 ethilon.
  3. מכשור מד עיבור למשטח במערכת העיכול:
    1. השחל את ארבע הפינות של מד העיבור עם 4 - 5 אורכי סנטימטר של 4-0, או תפר קטן יותר, סטרילי משי באמצעות מחט 3/8 מעגל נקודה להתחדד # 14 לפני הניתוח. תפר משי מספק רמה גבוהה של גמישות ופחות סביר לפגוע בסיליקון מתמצת את אלמנט מד העיבור.
      הערה: חוט משי הוא מקובל עבור ניתוחים שאינם הישרדות ועבור יישומים פנימיים, שבו הפתילה של חיידקים על פני מחסום האפיתל היא לא סיכון. ביישומים הדורשים ניתוח הישרדות, תפר prolene הוא הכרחי על מנת להפחית את הסיכון לזיהום גלום בסיבי הבד הקלוע של תפר המשי.
    2. בצע laparotomy על ידי חיתוך עור הבטן לאורך קו האמצע. סעיף שרירי בטני rectus לאורךalba חיבור LINEA (avascular) כדי למנוע דימום. לאחר מכן לבצע חתך קו האמצע מאוד שטחי בהצפק הקודקודית להימנע קורע את הקרביים בטן בסיסי.
    3. Exteriorize הבטן בעזרת applicators כותנה הטתה מלוח ספוג. שמור את הבטן בעמדה על ידי הצבתו בזהירות על כרית גזה מלוחה ספוגה בסוף הזנב של החתך בבטן.
    4. יישר את הרשת של מד העיבור הגלום במקביל לסיבי שריר החלק המעגלי. שימוש בתפרים המושחל בעבר (הצעד 2.3.1), לצרף את הפינות של המד אל פני השטח serosal הגחון של קורפוס הקיבה באמצעות מחט 3/8 מעגל נקודה להתחדד # 14. על מנת למזער את הנזק לרקמות ודימום פוטנציאלי, לא משתמש במחטים עם קצוות חיתוך ולא לנקב כל כלי דם שטחיים על פני השטח של הקיבה.
    5. בגין דפוס התפר של המד לאורך העקמומיות הגדולה יותר של הבטן ליד הפונדוס / גבול קורפוס ולהמשיךהבא לאורך קרקעית העין / קורפוס גבול לכיוון העקמומיות פחותה. Serosa בסיס מד העיבור צריך לא להיות רפוי ולא יתר על המידה נמתח על מנת לקבל את התוצאות הטובות ביותר.
    6. לחזור בזהירות את הבטן למצב האנטומי שלה באמצעות החלת מכותנה הטתה ספוג מי מלח.
    7. במודל חריף, exteriorize מד העיבור מוביל בסוף הזנב של חתך קו האמצע לפני סגירת החתך בבטן. אבטח את החוטים חופשיים לבעלי החיים (כף הרגל למשל., אחורית) על מנת לספק הקלה מתח במניפולציה של בעלי החיים או מחבר חוט מסוף. סגור את שרירי בטני rectus ועור הבטן בנפרד עם 3-0 תפר ניילון. במודל כרוני, לאבטח את המוביל מתחת לעור בצד הגבי של החולדה וexteriorize מעל הגולגולת 18.
    8. לאחר מכשור כירורגי, למקם בעלי חיים במסגרת stereotaxic לתמוך בראש ולרומם את פלג הגוף העליון. הצעד האחרון עוזר להפחית מחדשחפץ spiration במהלך הקלטה. צג טמפרטורה רקטלית ולשמור על 37 ± 1 ° C באמצעות כרית חימום מבוקר משוב.
    9. בסיומו של ניסויי מסוף ניצול ההרדמה thiobutabarbital, בעלי החיים חייבים להיות מורדמים באופן עקבי עם הנחיות אמריקאיות לרפואת וטרינרית האגודה (AVMA) על המתת חסד.
  4. הקלטות תנועתיות קיבה:
    1. להגביר את אות מד העיבור עם כל מגבר גשר DC זמין מסחרי.
    2. רשום את אותות פלט DC במחשב באמצעות פונקצית מקליט תרשים של כל מערכת רכישת נתונים זמינה באופן מסחרי.
      הערה: תדפיס של פלט המגבר יכולה להיות שנוצרה באמצעות מקליט תרשים פוליגרף.

.3 נציג מדידה של התכווצויות קיבה בעקבות גזע המוח גירוי

  1. חשיפה של גזע המוח והחדר הרביעי
    1. לאחר מכשור כירורגי, וplacemאף אוזן גרון של החיה מורדמת-Thiobutabarbital במסגרת stereotaxic, להפוך 1.5 - חתך בעור קו האמצע 2 סנטימטר מהעצם העורף לכיוון בסיס הצוואר.
    2. הפרד את רקמת החיבור שהצטרפה בטן השריר דו צדדית של שרירי צוואר הבסיסיים לאורך קו האמצע (שרירים משטחיים לעמוקים הם חלק גולגולת longus Auris, חלק זנב longus Auris levator, וחלק גולגולת platysma levator).
    3. לנתק את longus Auris levator מהעצם העורף פעם אחת את קו האמצע מוגדר בבירור ונחשף.
    4. לחשוף בזהירות את אזור הזנב של הגולגולת באמצעות נתיחה בוטה לנתק שריר platysma ממאטר הדורה שבבסיס.
    5. שימוש במחט 25 G חדש כדי לנתק את מאטר הדורה לאורך מגנום נקב הארכה בילטרלי לcondyles העורפי בזהירות.
    6. השתמש # 5 מלקחיים דומון להסיר את פיא וקרומי מוח נואיד מעל החדר הרביעי ולחשוף את גזע המוח.
  2. הורמון ניהול thyrotropin החדר הרביעית שחרור או נתרן נתר פרוסיד, תוך ורידי
    1. לשקול ולפזר הורמון thyrotropin שחרור (TRH) בתמיסת מלח סטרילית להגיע ריכוז סופי של 50 מיקרומטר TRH.
    2. לשקול ולפזר נתרן נתר פרוסיד (SNP) בתמיסת מלח סטרילית להגיע ריכוז סופי של 150 SNP מיקרומטר.
    3. באמצעות מזרק 10 μl, לנהל 2 μl של TRH (מינון סופי שווה 100 pmol) אל פני השטח הגב של החדר הרביעי גזע המוח כדי להקל על הקלטה של ​​התכווצויות בקיבה.
    4. באמצעות מזרק סטרילי ו27 מחט G, לנהל 150 μmol / קילוגרם של SNP דרך וריד הזנב כדי להקל על הקלטה של ​​הרפיה קיבה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

נציגי נתונים מעכברוש Thiobutabarbital-הרדים מוצגים באיור 2. העקבות העליונים מייצגת את התכווצויות קורפוס קיבה מהחולדה בתקופת ממשל גזע המוח של הורמון thyrotropin שחרור (TRH, 100 pmol), הפפטיד ידוע לשיפור תנועתיות 3, 19. זה מראה צירים תחילת המחקר לפני העלייה בפעילות השרירים phasic קיבה חלקה. הערה: ניתוח של פסגות אלה בהתכווצויות קיבה בצע את הנוסחה המקורית שהומצאה על ידי אורמסבי והבס 20

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

הנהלים שהוצגו כאן מאפשרים מעבדות בודדות לפברק מדי עיבור זעיר רגיש ליישומים ביולוגיים כוללים, אך לא מוגבל ל, תנועתיות קיבה ומעיים בחיות מעבדה קטנות. מאז הייצור המסחרי של מדי עיבור אלה חדל, מעבדות חוקרים פונקציה במערכת העיכול מוגבלות לטכניקות אחרות אשר לא יכול להרשות למגוון רחב של יישומים ניסיוניים שזמינים. דוח זה מספק תיאור מעודכן ומפורט יותר של טכניקות שתוארו קודם לכן 15. טקסט וידאו נלווה מתייחסים באופן ספציפי פתרונות למכשולים נפוצים שהוכרנו במהלך פיתוח ושליטה בתהליך הי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים. הספקים המפורטים בכתב יד זה ניתנים לעיון בלבד.

תודות

מימון מחקר התקבל באמצעות המכון הלאומי להפרעות ושבץ (NS049177 וNS087834) נוירולוגיות. המחברים מבקשים להודות תרומות האינטלקטואליות של ד"ר פול בס מאוחר ועמיתיו לעיצוב המקורי של מדי העיבור; וקרול Tollefsrud לייצור והשיווק של מדי העיבור עד הפסקת הייצור בשנת 2010 כמו גם להתכתבותה תובנה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אלמנט מד מתחמיקרו-מדידות (קבוצת מוצרי Vishay)EA-06-031-350  דפוס ליניארי, נייר כסף, מד מתח לניתוח מתח (2 נדרשים)
www.vishaypg.com/micro-measurements/
or
http://www.vishaypg.com/docs/11070/031ce.pdf
דבק אפוקסי-פנוליM-bond 610דבק לשימוש כללי להדבקת אלמנטיםשל מד מתחhttp://www.vishaypg.com/docs/11024/wirecable.pdf
3 חוט מבודד מוליך336-FTEמד עדין, חוט גמיש לשימוש כלליhttp://www.vishaypg.com/docs/11024/wirecable.pdf
ערכת ממס שטף ורוזיןערכתAR FAR-2 M-Fluxשטף הלחמה נוזליתhttp://www.vishaypg.com/docs/11023/soldacce.pdf
הלחמה361A-20R-25ממוטב ומומלץ עבור יישומי מד מתחhttp://www.vishaypg.com/docs/11023/soldacce.pdf
GoldE363/0עבור הדום אלקטרודה
http://www.plastics1.com/PCR/Catalog/Item.php?item=407
הדום אלקטרודהMS363פלטפורמה מאובטחת למגעי חוטיםhttp:// כבל www.plastics1.com/PCR/Catalog/Item.php?item=499
>6 חוטים363 תקע עם ויניל SL/6כבל מצופה ויניל טרומי (באורכים מותאמים אישית) עם מתאם תקע כדי להתאים את הדום האלקטרודה וזיזי הלחמה משומרים בקצה
תרכובת יציקת גומי סיליקוןEIS מוצרי חשמלElan Tron E211מדיום עציצים למפרקי הלחמת חוטים
http://www.eis-inc.com
HOTweezersMeisei CorporationModel 4Bמסירי בידוד חוטים
http://www.impexron.us
תחנת הלחמהWeller (Apex Tool Group)WES 51ציוד הלחמה באיכות גבוהה
http://www.apexhandtools.com/weller/index.cfm
זמין דרך http://www.eis-inc.com או http://www.amazon.com
יריעת סיליקוןTrelleborg פתרונות איטום Northborough-Life SciencesPharmelast 20-20עטיפת אלמנטים של מד מתח
10 B Forbes Road Northborough, MA 01532 (800) 634-2000
AmplifierExperimetria LtdAMP-01-SGbr/> http://experimetria.com/Biological_amplifiers.php
מגע שקע PlasticsOne המסוף<

מקורות

  1. Szarka, L. A., Camilleri, M. Methods for measurement of gastric motility. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296 (3), G461-G475 (2009).
  2. Pascaud XB, F. A. U., Genton, M. J., Bass, P. A miniature transducer for recording intestinal motility in unrestrained chronic rats. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. Gastrointest. Physiol. 4 (5), 532-538 (1978).
  3. Gourcerol, G., Adelson, D. W., Million, M., Wang, L., Tache, Y. Modulation of gastric motility by brain-gut peptides using a novel non-invasive miniaturized pressure transducer method in anesthetized rodents. Peptides. 32 (4), 737-746 (2011).
  4. Américo, M. F., et al. Validation of ACB in vitro and in vivo as a biomagnetic method for measuring stomach contraction. Neurogastroenterol. Motil. 22 (12), 1340-1374 (2010).
  5. Fujitsuka, N., Asakawa, A., Amitani, H., Fujimiya, M., Inui, A. Chapter Eighteen - Ghrelin and Gastrointestinal Movement. Ghrelin and Gastrointestinal Movement. , Academic Press. 289-301 (2012).
  6. Monroe, M. J., Hornby, P. J., Partosoedarso, E. R. Central vagal stimulation evokes gastric volume changes in mice: a novel technique using a miniaturized barostat. Neurogastroenterol. Motil. 16 (1), 5-11 (2004).
  7. Herman, M. A., et al. Characterization of noradrenergic transmission at the dorsal motor nucleus of the vagus involved in reflex control of fundus tone. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 294 (3), 720-729 (2008).
  8. Gondim, F. A., et al. Complete cervical or thoracic spinal cord transections delay gastric emptying and gastrointestinal transit of liquid in awake rats. Spinal Cord. 37 (11), 793-799 (1999).
  9. Van Bree, S. H. W., et al. Systemic inflammation with enhanced brain activation contributes to more severe delay in postoperative ileus. Neurogastroenterol. Motil. 25 (8), 540-549 (2013).
  10. Qualls-Creekmore, E., Tong, M., Holmes, G. M. Gastric emptying of enterally administered liquid meal in conscious rats and during sustained anaesthesia. Neurogastroenterol. Motil. 22 (2), 181-185 (2010).
  11. Qualls-Creekmore, E., Tong, M., Holmes, G. M. Time-course of recovery of gastric emptying and motility in rats with experimental spinal cord injury. Neurogastroenterol. Motil. 22 (1), 62(2010).
  12. Choi, K. M., et al. Determination of gastric emptying in nonobese diabetic mice. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 293 (5), G1039-G1045 (2007).
  13. Adelson, D. W., Million, M., Kanamoto, K., Palanca, T., Tache, Y. Coordinated gastric and sphincter motility evoked by intravenous CCK-8 as monitored by ultrasonomicrometry in rats. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 286 (2), G321-G332 (2004).
  14. Xue, L., et al. Effect of modulation of serotonergic, cholinergic, and nitrergic pathways on murine fundic size and compliance measured by ultrasonomicrometry. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 290 (1), G74-G82 (2005).
  15. Bass, P., Wiley, J. N. Contractile force transducer for recording muscle activity in unanesthetized animals. J. Appl. Physiol. 32 (4), 567-570 (1972).
  16. Holmes, G. M., Browning, K. N., Tong, M., Qualls-Creekmore, E., Travagli, R. A. Vagally mediated effects of glucagon-like peptide 1: in vitro and in vivo gastric actions. J. Physiol. 587 (19), 4749-4759 (2009).
  17. Tong, M., Qualls-Creekmore, E., Browning, K. N., Travagli, R. A., Holmes, G. M. Experimental spinal cord injury in rats diminishes vagally-mediated gastric responses to cholecystokinin-8s. Neurogastroenterol. Motil. 23 (2), e69-e79 (2011).
  18. Miyano, Y., et al. The role of the vagus nerve in the migrating motor complex and ghrelin- and motilin-induced gastric contraction in suncus. PLoS ONE. 8 (5), e64777(2013).
  19. Holmes, G. M., Rogers, R. C., Bresnahan, J. C., Beattie, M. S. Thyrotropin-releasing hormone (TRH) and CNS regulation of anorectal motility in the rat. J Auton. Nerv. Syst. 56, 8-14 (1995).
  20. Ormsbee, H. S., Bass, P. Gastroduodenal motor gradients in the dog after pyloroplasty. Am. J. Physiol. 230, 389-397 (1976).
  21. Fukuda, H., et al. Impaired gastric motor activity after abdominal surgery in rats. Neurogastroenterol. Motil. 17 (2), 245-250 (2005).
  22. Browning, K. N., Babic, T., Holmes, G. M., Swartz, E., Travagli, R. A. A critical re-evaluation of the specificity of action of perivagal capsaicin. J. Physiol. 591 (6), 1563-1580 (2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מדד מאמץ בעל שני אלמנטיםמערכת העיכול של מכרסמיםהליך ייצורכמיסות סיליקוןהשתלה באמצעות תפריםהקלטה In Vivoמוטיליות קיבההרכבת מד מאמץהלחמה של חוטים