הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

רומן In vivo טכניקה וין העברה במבחנה לחקר אובדן עצם בפרעות השלד והשרירים

11.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/51810

⸱

8 ביוני 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Rheumatology, Allergy and Clinical Immunology, University of California, Davis, 2Institute for Pediatric Regenerative Medicine, Shriners Hospitals for Children - Northern California, 3Department of Dermatology, University of California, Davis

במאמר זה

סיכום

התמיינות של תאים קודמים לאוסטאוקלסטים מווסתת על ידי ציטוקינים וגורמי גדילה. כאן, מתוארת טכניקה חדשה להעברת גנים להתמיינות של אוסטאוקלסטים in vivo ופרוטוקולי תרבית תאים להתמיינות תאים קודמים לאוסטאוקלסטים במבחנה כשיטה לחקר ההשפעות של ציטוקינים על אוסטאוקלסטוגנזה.

תקציר

התמיינות והפעלה של אוסטאוקלסטים ממלאים תפקיד מפתח בהתפתחות מחלות שרירים ושלד מכיוון שתאים אלה מעורבים בעיקר בספיגת עצם. ניתן ליצור אוסטאוקלסטים במבחנה מתאי מונוציטים/מקרופאגים בנוכחות ציטוקינים מסוימים, המקדמים הישרדות והתמיינות. כאן מודגמות טכניקות in vivo ו-in vitro, המאפשרות למדענים לחקור תרומות ציטוקינים שונות לקראת התמיינות, איתות והפעלה של אוסטאוקלסטים. מערכת העברת הגנים של מעגל ה-DNA מספקת שיטה חלופית להקמת מודל הקשור לאוסטאופורוזיס שימושית במיוחד לחקר היעילות של מעכבים פרמקולוגיים שונים in vivo. באופן דומה, פרוטוקולי תרבית במבחנה לייצור אוסטאוקלסטים מתאי קודמן אנושיים בנוכחות ציטוקינים ספציפיים מאפשרים למדענים לחקור אוסטאוקלסטוגנזה בתאים אנושיים ליישומים תרגומיים. בשילוב, לטכניקות אלה יש פוטנציאל להאיץ את מאמצי גילוי התרופות לטיפולים ממוקדים ספציפיים לאוסטאוקלסטים, שעשויים להועיל למיליוני חולי אוסטאופורוזיס ודלקת פרקים ברחבי העולם.

מבוא

מחלות השלד והשרירים משפיעות על מיליוני אנשים בארצות הברית וההשלכות חמורות בהווה למערכות בריאות מקומיות וארציות 1. הפרעות אלו מתאפיינות באובדן העצם ותפקוד מפרקים הדורשים טיפול מקיף ותקופות של התאוששות ארוכות. בדרך כלל, גידול יחסי במספר ו / או הפעילות של osteoclasts, תאים מתמחים לנספגים שוב עצם, באוסטיאופורוזיס ובדלקת מפרקים שהוא ציין 2. בתנאים פיסיולוגיים במספר ובפעילות של osteoclasts מוסדר על ידי מפעיל הקולטן של הגורם הגרעיני κ-B ליגנד (RANKL), אשר מופק על ידי אוסטאובלסטים. Osteoprotegerin (OPG), קולטן דמה לRANKL מיוצר גם על ידי osteoblasts 3 בvivo מודלים של בעלי חיים הכרוכים בביטוי יתר מערכתי של sRANKL, או מחיקה של OPG יקרים מאוד במחקר באוסטאופורוזיס.; עם זאת, שיטות אלו דורשות הדור של עכברים הטרנסגניים 4,5. כאן, אלטרנטיבה רומןשיטה של ​​overexpressing sRANKL לחקר הפרעות הקשורות לשרירים ושלד מתואר. באופן ספציפי, minicircle (MC) טכנולוגיית ה-DNA ושיטות משלוח הידרודינמית שימשו כדי להשיג העברת גנים של sRANKL in vivo ו overexpress עכבר sRANKL מערכתי 6.

שיטה זו היא גם משלימה in vivo מודלים אחרים לאוסטאופורוזיס, כגון אפנון הורמונלי של osteoclasts הבא ovariectomy 7 והתערבות תזונתית על ידי דיאטה דל בסידן 8. מודלים אלה הם מאוד שימושיים כדי ללמוד היבטים שונים של הפרעות הקשורות לשלד ושרירים עם זאת הם דורשים ניתוחים ועשויים להימשך עד מספר חודשים, במחיר משמעותי 9. מודל מכרסם ovariectomized (OVX) הוא מודל חיה ניסיוני שבו הסרת השחלות גורמת למחסור באסטרוגן ובכך מחקה אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר אדם 10. אוסטיאופורוזיס בגיל הבלות אדם, מצב שבו defici אסטרוגןency מוביל לסיכון מוגבר לשברים בעצמות ובריחת סידן משפיעה על כשמונה מיליון נשים בארצות הברית לבדה. למרות שמודל OVX שימושי לאוסטיאופורוזיס בגיל הבלות הוא מציע יתרונות מוגבלים בלימוד אוסטאופורוזיס באופן כללי. אסטרוגן מדכא את איבוד מסת עצם, על ידי גרימת osteoclast ועיכוב אפופטוזיס osteoblast, ולכן בהעדרה פעילות osteoclast המוגבר הוא ציין 10-12. חוסר איזון יחס RANKL-OPG שמעדיף ספיגת עצם הוא ציין גם 13. עם זאת, מחסור באסטרוגן in vivo מלווה גם בירידה ברמות של הפיכת β גורם גדילה (β TGF), גדל אינטרלויקין 7 (IL-7) וTNF, IL-1 ו-IL-6 14,15. כציטוקינים אלה ידועים פונקציות ויסות שיפוץ עצם בלתי תלויות במסלול RANKL, אי אפשר לייחס כל הפעלת osteoclast אך ורק על ציר RANKL-RANK. המודל המתואר במאמר זה מאפשר לחוקרים ללמוד ביוo ציר RANKL-RANK בosteoclastogenesis ואובדן עצם ללא הפרו ציטוקינים דלקתיים בהשוואה למודלים של מכרסמים OVX.

בנוסף, טכניקות osteoclastogenesis במבחנה הן כלים חיוניים ללמוד הפעלת osteoclast לטיפולי פוטנציאל טיפוליים של מחלות השלד והשרירים. גם מחקרים קודמים הראו כי culturing מקרופאגים מח עצם עכבר נגזרים (BMMs) עם גורם מקרופאג העכבר מגרה מושבה (M-CSF) והעכבר sRANKL יכול להוביל לבידול osteoclast 3,16,17. הנה, את הפרוטוקולים כדי לייצר תאים כמו osteoclast-multinucleated ממח העצם של עכבר, כמו גם מהתאים אנושיים היקפיים mononuclear הדם (PBMCs) במבחנה 18 מתוארים. מבחני מבוססי התאים נדרשים להגדיר osteoclast הבדיל סופני ומתפקד באופן מלא בשלה גם מתוארים בקצרה. במבחנה טכניקות אלה משלימים את הרומן בגישת vivo ויחד לשמש pכלי החקירה owerful ללמוד בידול osteoclast והפעלה. שימוש במערכות אלה, מדענים מסוגלים לייצר osteoclasts in vivo ו במבחנה ולהגדיר את הגירויים ואותות הנדרשים להפצה וההפעלה שלהם, כמו גם לבחון את היעילות של מעכבים תרופתיים וביולוגיים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. משלוח הידרודינמית של sRANKL MC-DNA

  1. משלוח הידרודינמית דרך וריד זנב עכבר
    1. לשקול את העכבר לפני ההזרקה לוריד זנב. לדלל sRANKL או חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) MC בפתרון של רינגר (טרום חם על 37 מעלות צלזיוס) בהיקף כולל של ~ 10% ממשקל גופו של העכבר.
    2. לחמם את העכבר בכלוב עבור 10 דקות לפני ההזרקה כדי מרחיב את כלי דם ולהפוך את הוורידים לרוחב (LVS) נראים לעין. לנטר את העכבר בזהירות כדי למנוע התייבשות והיפרתרמיה.
    3. ברגע שהם LVS מורחבים ונראה לעין, להעביר את העכבר לעוצר ולהכניס את התקע רחוק מספיק לתוך החבית לרסן את התנועה. לפקח על העכבר לפעילות רגילה כגון נשימה. התאם את התקע של עוצר במידת צורך.
    4. לחטא את אזור ההזרקה 3/4 מקצה הזנב עם אלכוהול לנגב. שימוש במחט G 27-30 להזרקה לוריד זנב עכבר. החזק את הזנב בחוזקה ביד אחת ולהכניס את המחט בלוריד הזנב. להפעיל לחץ על המזרק ולהשלים את הזריקה בתוך 5-7 שניות.
    5. הסר את המחט מוריד הזנב ולהפעיל לחץ עם כדור צמר גפן באתר ההזרקה כדי לעצור את הדימום. לפקח על העכבר ל15-30 דקות, ולאחר מכן להעביר את העכבר בחזרה לביבר פעם אחת את קצב הנשימה מצטמצם לשיעור הרגיל שלו.
  2. אישור על ביטוי sRANKL המערכתי מאוס והכימות של העברת עכבר סרום TRACP5b ההודעה ג'ין
    1. לחמם את העכבר בכלוב ל5-10 דק כדי מרחיב את כלי דם ולגרום LVS גלוי. לנטר את העכבר בזהירות כדי למנוע התייבשות והיפרתרמיה.
    2. לעשות חתך קטן עם להב לזנבו של העכבר באתר אחד אחורה מקצה הזנב.
    3. לאסוף כ 100 μl דם בצינורות הפרדה בסרום.
    4. דגירה צינורות הפרדת סרום בטמפרטורת חדר למשך 30 דקות.
    5. צנטריפוגה דגימות 10,000 XG במשך 5 דקות ולאסוף בסרום. Storסרום דואר ב-80 ° C לניתוח נוסף.
    6. בצע sRANKL ELISA וassay TRACP5b סרום עכבר על דגימות סרום באמצעות ערכה זמינה מסחרית.

2. דור Osteoclast במבחנה מBMMs מאוס

  1. בידוד וCulturing של BMMs
    1. בידוד של השוקה ועצמות ירך: להרדים את עכבר התורם עם CO 2, ולחטא את הרגליים עם 70% אתנול. לנתח מעצם הערווה עד עצם calcaneus, כדי להסיר את עצמות ירך ושוקה בשלמותה.
    2. הסר את העור ושרירים בזהירות מבלי לפגוע בעצמות. הנח עצם ירך ועצם שוקה מעובד בצלחת פטרי המכילה בופר פוספט (PBS).
    3. ההסרה של מח עצם: חותכים את הקצה בצד אחד של עצמות הירך ושוקה ולשטוף את מח העצם לתוך צינור 50 מיליליטר באמצעות מזרק 1ml עם מחט 25 G, עמוס α-ממ המכיל 1% פניצילין / סטרפטומיצין (Osteoclast התרבות בינונית / OCM).
    4. מח עצם תהליך: לערבב ולהעביר השעיה מח עצם לצינור מיליליטר 50 חדש על ידי העברתו דרך מסננת תא ניילון 70 מיקרומטר. צנטריפוגה התאים ב XG 300 מחדש להשעות בα-ממ המכיל 1% פניצילין / סטרפטומיצין ו10% FBS (הבינוני Osteoclast תרבות / OCM (+)).
  2. תרבות של המקרופאגים
    1. ספירת תאים באמצעות hemocytometer או דלפק תא אוטומטי.
    2. צלחת 1 x 10 6 תאים לכל גם לצלחת 6 היטב או 3 x 10 5 תאים לcoverslips זכוכית (5 מ"מ) או פרוסות הדנטין להציב צלחת 96 היטב ולדגור על 37 ° C.
    3. לשאוב את כל אמצעי התקשורת המכילה תאים שאינם חסיד ודגירת תאים ב 37 ° C עם OCM הטרי (+) המכילה עכבר 25 ng / ml M-CSF ל48 שעות.
    4. תקשורת לשאוב את כל התקשורת ודגירת תאים ב 37 ° C עם OCM הטרי (+) המכילה M-CSF עכבר 25 ng / ml, ו30 sRANKL עכבר ng / ml ליזום osteoclastogenesis. לחדש את התקשורת בכל 3 ימים, כנדרש.
    5. לגדל תאיםכ 6-8 ימים על מנת לייצר תאים רב גרעיניים ענק מסוגלים resorbing עצם. ברגע שהתאים multinucleated מופיעים, לבצע מלכודת (phosphatase חומצה עמיד tartrate) מכתים באמצעות ערכה זמינה מסחרית, וכאשר התבגרו באופן מלא, לבצע מבחני תפקודיים. דמיינו טבעות ה-F-אקטין על coverslips באמצעות כתם phalloidin ותמונה מצורפים לתאים הדנטין פרוסות ידי מיקרוסקופיית אלקטרונים (SEM) כפי שתואר לעיל 19.

3. דור Osteoclast במבחנה מPBMCs האדם

  1. בידוד של PBMCs האדם
    1. הוסף 10 מיליליטר של Histopaque-1077 מראש חימם לתוך צינור 50 מיליליטר.
    2. מסנן ויקוציטים ריק המתקבל מבנק דם עם PBS סטרילי לתוך צינור 50 מיליליטר (1:1 יחס של דם עם PBS). שכבת הדם המדולל על פתרון Histopaque לאט מאוד, ולוודא כי הדם לא לערבב עם Histopaque.
    3. צנטריפוגה דגימות XG 1000 עבור 20 דקות ב18 ° C. לעקובing צנטריפוגה, לבודד בזהירות את שכבת מעיל באפי הלבנה המכילה את תאי דם הלבנים ולהעביר לצינור מיליליטר 50 חדש.
    4. לדלל תאים עם PBS ו צנטריפוגות שוב ב650 XG במשך 5 דקות כדי לאסוף את התאים.
    5. הסר supernatant ותאי resuspend ב OCM (-) תקשורת ולספור תאים באמצעות דלפק תא.
  2. ציפוי וCulturing PBMCs
    1. תקשורת resuspend תאי OCM (+) וצלחת 8 x 10 6 תאים / מיליליטר לכל טוב בצלחת או 1 6 גם x 10 6 תאים / מיליליטר לכל טוב בצלחת 96 היטב. פלייט תאים על coverslips זכוכית (5 מ"מ), כנדרש להדמית immunofluorescence כמו גם על פרוסות עצם מתאימות עבור מבחני ספיגת עצם כפי שתוארו לעיל 20.
    2. מדיה שינוי תרבות, חידוש התאים עם M-CSF האנושי כל 2-3 ימים או כפי שנדרש. לאחר מכן להמשיך לשלב בידול ביום 5 על ידי הוספת 30 / מיליליטר ng של sRANKL האנושי יחד עם 25 M-CSF ng / ml אדם בOCM (+) תקשורת ליזום osteoclastogenesהוא.
    3. לגדל תאים לכ 14-21 ימים על מנת לייצר תאים רב גרעיניים ענק. ברגע שהתאים multinucleated מופיעים, אז יכולים להיות שכותרתו תאים אלה למלכודת, וכשהתבגרו באופן מלא, ניתן לבצע מבחני תפקודיים. ניתן דמיינו טבעות ה-F-אקטין על coverslips באמצעות כתם phalloidin. המורפולוגיה של התאים ניתן לבדוק בתאים מצורפים הדנטין פרוסות ידי SEM.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כאן, בטכניקת העברת גנים חדשים לבידול של osteoclasts in vivo ופרוטוקולי תרבית תאים להפרדת תאים מבשר לosteoclasts במבחנה, כמו שיטה כדי לחקור את ההשפעות של ציטוקינים על osteoclastogenesis מתוארות. באיור 1, תוצאות הנציג של העברת גנים המוצלחת של ה-GFP ועכבר sRANKL MC בעכברים מוצגות. באיור 2, התמונות מייצגות של מח עצם עכבר או תרבויות אנושיות PBMC התמיינות תאים כמובן זמן של תאים מבשר לosteoclasts על ידי מיקרוסקופ שדה הבהיר מוצגות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

תנאי השלד והשרירים מובילים גורמים לתחלואה ונכות ומורכבים של מעל 150 מחלות ותסמונות; המשפיע על כ -90 מיליון אמריקאים היום. דלקת מפרקים והרס עצם הם תכונות העיקריות של תנאים שרירי שלד, הכוללים דלקת מפרקים ואוסטאופורוזיס. אוסטאופורוזיס היא מחלה שמחלישה את שלמות עצם, לעתים קרובות מוביל לשברים בעצמות. דלקת פרקים הוא מחלה כרונית, מתישה מחלה המאופיינת בדלקת המפרקים שהפכו נפוח, רך ותנועה נורמלית הגבלה-נוקשה ויכולים לגרום לנכות. למרות פתוגנזה של מחלות שרירים ושלד שונה מאוד אחד מהשני, הרס עצ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

המחקר נתמך בחלקו על ידי מענקי המחקר של ה-NIH R01 AR062173 ו-SHC 250862 ל-IEA. ES היא הזוכה במלגת NIH T32 CTSC קדם דוקטורט.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אלפא-MEMטכנולוגיות חיים 12561-056
M-CSF אנושיMiltenyi Biotec130-096-492
עכבר M-CSFMiltenyi Biotec130-094-643
RANK-Ligand אנושי - מסיסMiltenyi Biotec130-094-631
עכבר RANK-Ligand - מסיסMiltenyi Biotec130-094-076
Tailveiner Restrainer לעכבריםBraintreeTV-150 STD
עכבר טראנס/דרגה L/TNFSF11 ערכת קוונטיקין אליסה מו"פ D systemsMTR00
חומצה פוספטאז, לויקוציטים (TRAP) ערכתSigma387A
MouseTRAP assay מערכות אימונודיאגנוסטיקהSB-TR103

מקורות

  1. Yelin, E. Cost of musculoskeletal diseases: impact of work disability and functional decline. The Journal of rheumatology. Supplement. 68, 8-11 (2003).
  2. Boyce, B. F., Rosenberg, E., de Papp, A. E., Duong le, T. The osteoclast, bone remodelling and treatment of metabolic bone disease. European journal of clinical investigation. 42, 1332-1341 (2012).
  3. Lacey, D. L., et al. Osteoprotegerin ligand is a cytokine that regulates osteoclast differentiation and activation. Cell. 93, 165-176 (1998).
  4. Mizuno, A., et al. Transgenic mice overexpressing soluble osteoclast differentiation factor (sODF) exhibit severe osteoporosis. Journal of bone and mineral metabolism. 20, 337-344 (2002).
  5. Bucay, N., et al. osteoprotegerin-deficient mice develop early onset osteoporosis and arterial calcification. Gene., & development. 12, 1260-1268 (1998).
  6. Suda, T., Liu, D. Hydrodynamic gene delivery: its principles and applications. Molecular therapy: the journal of the American Society of Gene Therapy. 15, 2063-2069 (2007).
  7. Wronski, T. J., Dann, L. M., Scott, K. S., Cintron, M. Long-term effects of ovariectomy and aging on the rat skeleton. Calcified tissue international. 45, 360-366 (1989).
  8. Seto, H., Aoki, K., Kasugai, S., Ohya, K. Trabecular bone turnover, bone marrow cell development, and gene expression of bone matrix proteins after low calcium feeding in rats. Bone. 25, 687-695 (1999).
  9. Lelovas, P. P., Xanthos, T. T., Thoma, S. E., Lyritis, G. P., Dontas, I. A. The laboratory rat as an animal model for osteoporosis research. Comparative medicine. 58, 424-430 (2008).
  10. Sherman, B. M., West, J. H., Korenman, S. G. The menopausal transition: analysis of LH, FSH, estradiol, and progesterone concentrations during menstrual cycles of older women. The Journal of clinical endocrinology and metabolism. 42, 629-636 (1976).
  11. Hughes, D. E., et al. Estrogen promotes apoptosis of murine osteoclasts mediated by TGF-beta. Nature medicine. 2, 1132-1136 (1996).
  12. Kousteni, S., et al. Nongenotropic, sex-nonspecific signaling through the estrogen or androgen receptors: dissociation from transcriptional activity. Cell. 104, 719-730 (2001).
  13. Ominsky, M. S., et al. RANKL inhibition with osteoprotegerin increases bone strength by improving cortical and trabecular bone architecture in ovariectomized rats. Journal of bone and mineral research : the official journal of the American Society for Bone and Mineral Research. 23, 672-682 (2008).
  14. Kitazawa, R., Kimble, R. B., Vannice, J. L., Kung, V. T., Pacifici, R. Interleukin-1 receptor antagonist and tumor necrosis factor binding protein decrease osteoclast formation and bone resorption in ovariectomized mice. The Journal of clinical investigation. 94, 2397-2406 (1994).
  15. Weitzmann, M. N., Pacifici, R. Estrogen deficiency and bone loss: an inflammatory tale. The Journal of clinical investigation. 116, 1186-1194 (2006).
  16. Suda, T., Nakamura, I., Jimi, E., Takahashi, N. Regulation of osteoclast function. J Bone Miner Res. 12, 869-879 (1997).
  17. Asagiri, M., Takayanagi, H. The molecular understanding of osteoclast differentiation. Bone. 40, 251-264 (2007).
  18. Matsuzaki, K., et al. Osteoclast differentiation factor (ODF) induces osteoclast-like cell formation in human peripheral blood mononuclear cell cultures. Biochemical and biophysical research communications. 246, 199-204 (1998).
  19. Adamopoulos, I. E., et al. Synovial fluid macrophages are capable of osteoclast formation and resorption. The Journal of pathology. 208, 35-43 (2006).
  20. Adamopoulos, I. E., et al. Interleukin-17A upregulates receptor activator of NF-kappaB on osteoclast precursors. Arthritis researc., & therapy. 12, (2010).
  21. Jones, D., Glimcher, L. H., Aliprantis, A. O. Osteoimmunology at the nexus of arthritis, osteoporosis, cancer, and infection. J Clin Invest. 121, 2534-2542 (2011).
  22. Sato, K., Takayanagi, H. Osteoclasts, rheumatoid arthritis, and osteoimmunology. Curr Opin Rheumatol. 18, 419-426 (2006).
  23. Das, S., Crockett, J. C. Osteoporosis - a current view of pharmacological prevention and treatment. Drug design, development and therapy. 7, 435-448 (2013).
  24. Chen, Z. Y., He, C. Y., Ehrhardt, A., Kay, M. A. Minicircle DNA vectors devoid of bacterial DNA result in persistent and high-level transgene expression in vivo. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy. 8, 495-500 (2003).
  25. Kay, M. A., He, C. Y., Chen, Z. Y. A robust system for production of minicircle DNA vectors. Nature biotechnology. 28, 1287-1289 (2010).
  26. Chen, Z. Y., He, C. Y., Kay, M. A. Improved production and purification of minicircle DNA vector free of plasmid bacterial sequences and capable of persistent transgene expression in vivo. Human gene therapy. 16, 126-131 (2005).
  27. Halleen, J. M., et al. Tartrate-resistant acid phosphatase 5b: a novel serum marker of bone resorption. Journal of bone and mineral research : the official journal of the American Society for Bone and Mineral Research. 15, 1337-1345 (2000).
  28. Adamopoulos, I. E., et al. IL-23 is critical for induction of arthritis, osteoclast formation, and maintenance of bone mass. J Immunol. 187, 951-959 (2011).
  29. Suda, T., Takahashi, N., Martin, T. J. Modulation of osteoclast differentiation. Endocrine reviews. 13, 66-80 (1992).
  30. Takahashi, N., et al. Osteoblastic cells are involved in osteoclast formation. Endocrinology. 123, 2600-2602 (1988).
  31. Bradley, E. W., Oursler, M. J. Osteoclast culture and resorption assays. Methods Mol Biol. 455, 19-35 (2008).
  32. Arai, F., et al. Commitment and differentiation of osteoclast precursor cells by the sequential expression of c-Fms and receptor activator of nuclear factor kappaB (RANK) receptors. The Journal of experimental medicine. 190, 1741-1754 (1999).
  33. Fuller, K., et al. Macrophage colony-stimulating factor stimulates survival and chemotactic behavior in isolated osteoclasts. The Journal of experimental medicin. 178, 1733-1744 (1993).
  34. Edwards, J. R., Mundy, G. R. Advances in osteoclast biology: old findings and new insights from mouse models. Nature reviews. Rheumatology. 7, 235-243 (2011).
  35. Weinstein, R. S., et al. Promotion of osteoclast survival and antagonism of bisphosphonate-induced osteoclast apoptosis by glucocorticoids. The Journal of clinical investigation. 109, 1041-1048 (2002).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

דיפרנציאציה של אוסטאוקלסטיםהעברה הידרודינמית של גניםמודל אוסטאוקלסטים In Vivoיצירת אוסטאוקלסטים In Vitroמקרופגים של מוח העצםאוסטאוקלסטים מתאי PBMC אנושייםמיני-סירקל של RANK Ligandתוספת MCSFתאים חיוביים ל-TRAPהיווצרות טבעת F-actin
רומן In vivo טכניקה וין העברה במבחנה לחקר אובדן עצם בפרעות השלד והשרירים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.