בניית לשכות החמקן לחשיפת עכברים לאלכוהול במהלך המקביל של כל שלושת הטרימסטר של התפתחות אדם

סיכום

אנו מדגימים את בניית תאי אדי אלכוהול תוך שימוש בחומרים זמינים שבו זמנית בבית 6 כלובי עכבר. בנוסף, אנו מתארים את השימוש בם במודל של עכברים של חשיפת אלכוהול עוברית שווה ערך לכל 3 הטרימסטר של הריון אנושי. פרדיגמה זו חושפת את בעלי החיים במהלך הריון ולאחר לידה בימים 1-12.

תקציר

חשיפה לאלכוהול במהלך פיתוח יכולה לגרום לקבוצת כוכבים של מומים מורפולוגיים והתנהגותיים שידועים קולקטיבי הפרעות אלכוהול עוברי ספקטרום (FASDs). בסופו החמור ביותר של הספקטרום היא תסמונת אלכוהול עוברית (FAS), המתאפיינת בפיגור בגדילה, dysmorphology craniofacial, וגירעונות neurobehavioral. מחקרים עם מודלים של בעלי חיים, ובם מכרסמים, שהובהרו מנגנונים מולקולריים ותאיים רבים מעורבים בפתופיזיולוגיה של FASDs. ממשל אתנול למכרסמים בהריון כבר בשימוש למודל חשיפה אנושית במהלך הטרימסטר הראשון והשני של הריון. צריכת אתנול השליש שלישית בבני אדם כבר דגם באמצעות מכרסמים ילוד. עם זאת, מחקרים במכרסמים כמה אפיינו את השפעת חשיפת אתנול במהלך שווה הערך לכל שלושת הטרימסטר של הריון אנושי, דפוס של חשיפה שהיא שכיח אצל נשים בהריון. כאן, אנו מראים כיצד לבנות תאי אדים בקלות oחומרי btainable שיכול להכיל כל אחד עד שישה כלובי עכבר סטנדרטיים. אנו מתארים הפרדיגמה חדר אדים שיכולים לשמש מודל חשיפה לאתנול, עם טיפול מינימאלי, במשך כל שלושת הטרימסטר. המחקרים שלנו מראים כי סכרים בהריון פיתחו סובלנות טבולים משמעותית לאתנול. עם זאת, עכברי יילודים לא פתחו סובלנות חילוף חומרים ואת מספר העוברים, משקל עובר, משקל שליה, מספר גורים / המלטה, מספר גורים / המלטה המתה, ומשקל גור לא נפגע באופן משמעותי כתוצאה מחשיפת אתנול. יתרון חשוב של פרדיגמה זו הוא תחולתה ללימודים עם עכברים גנטיים שונה. בנוסף, פרדיגמה זו ממזערת את הטיפול בבעלי חיים, לבלבל מרכזי במחקר אלכוהול עוברי.

מבוא

שתייה במהלך ההריון יכול לפגוע בעובר, וגרם לשינויים מתמשכים באיברים רבים ומערכות שיקטינו את איכות חיים של אנשים מושפעים ובני משפחותיהם באופן משמעותי. הערכה היא כי כ 10-30% מהנשים שותים במהלך ההריון בארצות הברית, עם שתיית 1-8% ^ב1,2 דפוס מוגזמת. מגוון של תופעות המיוצרים על ידי חשיפת אתנול במהלך ההתפתחות העובר הוא ידוע קולקטיבי הפרעות ספקטרום אלכוהול עוברי (FASDs). האומדנים אחרונים עולה כי FASDs הוא בעיה מרכזית בבריאות הציבור עם שכיחות גבוהה ככל 2-5% בארה"ב ^3. הביטוי החמור יותר של FASDs הוא תסמונת אלכוהול עוברית (FAS), המאופיינת בפיגור בגדילה, מומים Craniofacial, וגירעונות neurobehavioral, כוללים ליקויי למידה. השכיחות של FAS כבר מוערכת .2-0.7% בארה"ב ^3. הטיפולים הקיימים כיום לFASDs יעילים רק באופן חלקיופיתוח של טיפולים יעילים יותר מוגבל על ידי עניי ההבנה של היסודות התאיים ומולקולריים של ספקטרום מורכב זה של הפרעות.

נתונים מהמומים המולדים הלאומיים Prevention Study (NBDPS) מצביעים על כך שנשים בהריון לשתות נפוצות ביותר במהלך שליש 1 ^st, לפני ההריון זוהה, ואחרי התנזרות בשלבים מאוחר יותר של הריון ^2. NBDPS גם מצא כי הדפוס השני בשכיחות של צריכת אתנול במהלך ההריון כרוך בשתייה לאורך כל הטרימסטר של הריון ^2. הסיבות לכך כוללות חוסר המודעות לגבי ההשפעות מזיקות של חשיפה עוברית אתנול (אפילו במינונים נמוכים), גישה מוגבלת לטיפול טרום לידתי, היסטוריה החיובית להפרעות נוירופסיכיאטריות, וניצול לרעה של או תלות באתנול ^4. מעניין לציין, כי NBDPS דיווח כי הדפוס השלישי הנפוץ ביותר של הצריכה מעורבת התנזרות במהלך 1 ^{St ו -2 הטרימסטר nd אחרי הצריכה במהלך השליש 3 rd, כאשר הנחה הוא לעתים קרובות כי השתייה היא בטוחה כי organogenesis כבר בעיקר הושלם. עם זאת, שליש 3 rd הוא תקופת גבוהה רגישות לנזק למערכת עצבים הנגרמים אתנול כי זו תקופה שבה מעגלים עצביים עוברים עידון עמוק 2. NBDPS זיהה גם דפוסים אחרים, פחות תכופים של צריכת אלכוהול המתרחשים במהלך הריון, כוללים הצריכה לאורך רח 1 ו -2 הטרימסטר nd אחרי התנזרות במהלך השליש -3 2.}

בניסיון לבנות מודל הדפוסים השונים של צריכת אתנול שנצפו בנשים בהריון, מספר פרדיגמות חשיפת אתנול התפתחותית הוקמו באמצעות בעלי חיים מגוונים, עם חולדות ועכברים להיות ^5,6 הנפוץ ביותר. משך ההריון בבעלי החיים אלה בדרך כלל לאסts כ 3 שבועות, אשר תואם את ^st 1 ו -2 הטרימסטר ^nd של הריון אנושי. מחקרים במכרסמים רבים העריכו את ההשפעה של מינונים ודפוסי חשיפת אתנול שונים בתקופה זו. דוגמאות לשיטות המשמשות לעתים קרובות לניהול אתנול לעכברים וחולדות בהריון כוללות ניהול באמצעות דיאטות נוזלי ^7,8, תוספת של אתנול לשתיית המים ^9,10, שתייה מרצון של פתרונות ממותקים סכרין ^11, gavage הקיבה ^12, שאיפת אדים ¹³ , ותת עורית או זריקת intraperitoneal ^14. תוצאות של מחקרים אלה סכמו כמה מהגירעונות שנצפו בבני אדם עם FASDs, הוכחת כי החשיפה במהלך הריון בשלבים מוקדמים די בכך כדי לגרום נזק למעגלים עצביים על פני המוח (הנסקרת ב ^6,15).

גם ניסויים במכרסמים הראו כי חשיפה במהלך שווה הערך ל ^-3 טרימסטר של הריון אנושי, שכ מתאים ל1-2 השבועות הראשונים של חיים לאחר לידה בחולדות ועכברים, באופן משמעותי יכול לפגוע בהתפתחות המוח. חשיפה בתקופה זו כבר דגם על ידי מתן אתנול לחולדות או עכברים בילוד. אתנול כבר מנוהל לבעלי חיים אלה באמצעות מגוון של שיטות, לרבות ההאכלה דרך גסטרוסטומיה בבעלי חיים באופן מלאכותי, שגודלו ^16-18, אינטובציה intragastric ^19, הזרקה תת עורית ^20, ומשאיפת אדי ^21,22. מחקרים אלו הראו כי באופן משכנע פרץ גדילת המוח הוא תקופה של פגיעות גבוהות להשפעות התפתחותיות של אתנול ^6.

כפי שצוין לעיל, שתייה במהלך כל הטרימסטר הריון היא דפוס נפוץ של צריכת אתנול בנשים ^2. עם זאת, מעטים יחסית מחקרים העריכו את ההשפעה של דפוס זה של חשיפה תוך שימוש במודלים של בעלי חיים. חלק מהמחקרים אלה לקחו advantagדואר של בעלי חיים הגדולים שבו השליש השווה ערך 3 ^rd מתרחש ברחם ולא בתקופת הילוד, כמו במקרה של חולדות ועכברים. מודלים של בעלי החיים אלה כוללים פרימטים שאינם בני אדם ^23,24 והכבשים ^25-27. עם זאת, מודלים של בעלי החיים אלה לא היו בשימוש נרחב במחקר FASDs, בין שאר, בגלל עלות גבוהה והצורך במתקנים לטיפול מיוחדים. מכרסמים היו בשימוש נפוץ יותר כדי לאפיין את ההשפעה של חשיפת אתנול כל טרימסטר על התפתחות העובר ^5. גינאה חזירים היו יתרון במיוחד בעניין זה ניתנו פיתוחם הנרחב לנשים בהריון ודמיון בהבשלת מוח לזה של בני האדם ^28,29. עם שרקנים, ניתן היה לאפיין את ההשפעה של חשיפת אתנול ברחם הכולל את תקופת הפיתוח המקבילה של השליש ^השלישי האנושיים 3. העלות הגבוהה יחסית של בעלי חיים אלה, כמו גם את משך ההריון שלהם ארוך יחסית(~ 67 ימים), הגביל את השימוש בם לכמה מעבדות עובדות על מחקר FASDs.

בשל שימוש עלות היעיל ורחב שלהם במחקר ביו, חוקרים השתמשו בחולדות למודל חשיפה לאתנול במהלך כל הטרימסטר של הריון. במחקרים ראשוניים, חולדות שנחשפו במהלך הריון באמצעות תזונה נוזלית ואחריו ממשל של אתנול באמצעות הילודים gastrostomy לגודל באופן מלאכותי (ימים לאחר לידה (P) 1-10) וכתוצאה מכך רמות דם אתנול שיא (BEC) בסכרים של 0.08 גר '/ ד"ל ובגורים 0.16 גר '/ ד"ל. פרדיגמה זו נגרמת על שינויים ארוכי טווח בmyelination עצב ראייה והקטינה את מספר סיבי גליה ברגמן ^ב30-32 המוח הקטן. באופן דומה, מאייר ומשתפי פעולה באמצעות תנאי גידול מלאכותיים מנוהלים אתנול לסכרי חולדה בהריון באופן כמו בולמוס-באמצעות אינטובציה intragastric ואחריו ממשל יילודים בחלק מהתקופה המקביל טרימסטר 3 ^rd (P4-9) ^33,34. PBECs האימהית וגור eak היתה 0.3 גר '/ ד"ל בשני יום הריונית 20 וP6. הפרדיגמה חשיפה כל טרימסטר זה הביאה לפיגור בגדילה שהיה גדול יותר באופן משמעותי מזה שנצפה בגורים החשופים בתקופות נבחרות של הריון ^33. בנוסף, חולדות שנחשפו לאתנול בשווה הערך לכל הטרימסטר הציגו ירידה במספר פורקינג' המוח הקטן ותאי גרגיר שהיה גדול יותר מזה שנצפה בבעלי חיים שנחשפו בתקופות אחרות ^34. ירידה במספר תאים בהיפוקמפוס דווחו גם בפרדיגמה זו, אך תופעות אלה מופיעות להיות בראש ובראשונה כתוצאה מחשיפה במהלך השליש ^השלישי שווה הערך ³⁵ 3. שיטה שיש בה ממשל אתנול באמצעות gavage intragastric לשני חולדות הרות ויילודי עכברים שימשה גם למודל כל חשיפת השליש ^36. שיטה זו, שהניבה BECs של 0.13 גר '/ ד"ל בסכרים (יום הריונית 17) ו0.24 גר' / ד"ל בגורי P6, לון מושרהשינויים מתמשכים-g ברמות הנוירוטרנסמיטר אוקסידאז בהיפוקמפוס וההיפותלמוס, וביטוי מוגבר של methyltransferases DNA והתיל CPG מחייב חלבון 2 ^ב37,38 היפוקמפוס. שימוש בפרדיגמה דומה חשיפה (BEC = 0.14-0.2 גר '/ ד"ל בסכרים ו0.2 גר' / ד"ל בגורים), גיל-Mohapel et al. ³⁹ זוהו עלייה במספרם של נוירונים בוגרים חדשים ברכס משוננת של חולדות מבוגרים ש עשוי לייצג מנגנון פיצוי לנזק הנגרם אתנול עצבי או שינוי בתהליך ההבשלה של תאי עצב בוגרים שנולדו. גם חוקרים ניסו לבנות מודל כל חשיפת אתנול שליש על ידי חשיפת סכרים באמצעות דיאטות נוזליים או שתיית מים במהלך שני הריון וההנקה ^9,40. עם זאת, השירות של חשיפת הגורים דרך חלב של האמא שלהם הוא מוגבל, כי זה בדרך כלל תוצאות בBECs הנמוכה גור (למשל, .002-.05 גר '/ ד"ל; ^41,42).

עכברים יש גם שימשו extensively לאפיין את ההשפעות של חשיפת אתנול התפתחותית. מניות זה מודל חיה רבות של נקודות החוזק שתואר לעיל למודל החיה החולדה, עם יתרון נוסף שזני עכבר מהונדסים גנטי רבים זמינים ^5. עכברים כבר השתמשו בהצלחה כדי לאפיין את ההשפעות של אתנול במהלך ^st 1, 2 ^nd או 3 הטרימסטר ^שלישי של הריון ^43,44. עם זאת, ההשפעה של כל חשיפת השליש על בעלי חיים אלה לא מאופיין היטב כי זה מבחינה טכנית יותר קשה לחשוף עכברים במהלך שווה הערך לכל הטרימסטר של הריון אנושי. לדוגמא, גידול מלאכותי וgavage קיבה, אשר שימש בהצלחה בחולדות, דורשים נהלים מיוחדים יותר בעכברים ^45. למיטב ידיעתנו, מחקר אחד בלבד עד כה ניסה לחקור את ההשפעה של כל חשיפת אתנול השליש באמצעות עכברים; בעלי החיים אלה נחשפו לפתרון אתנול בשתיית מים דוריהריון והנקה ng ^46. BECs האימהית היתה BECs 0.07 גר '/ ד"ל והגור לא נקבעה, אך צפוי להיות חלק מאותם בסכרים.

כאן, אנו מתארים מודל חדש לחשיפת אתנול כל טרימסטר של עכברים שבו אלכוהול ניתן לשני סכרים וילודים בהריון באמצעות תאי משאיפת אדים. תאי החמקן נבנו על בסיס עיצוב קודם ^47. אנו מספקים הוראות מפורטות כיצד לבנות את תאי שאיפה ולבצע את נהלי החשיפה. כמו כן אנו מספקים מידע על BECs שניתן להשיג, ואת ההשפעה של חשיפה על הישרדות גור וצמיחה.

פרוטוקול

נהלי כל החיה אושרו על ידי האוניברסיטה למדעי הבריאות בניו מקסיקו, מרכז הטיפול בבעלי חיים מוסדי ועדת שימוש.

1. החמקן עצרת קאמרית

1. גיליונות פוליקרבונט לחתוך עם מסור או פאזל עגולים לממדים שנקבעו בווידאו לחלק העליון, תחתון, קדמי, אחורי, צדדים, ודלת (איור 1 ולוח 1).
2. עם מסור או פאזל עגול, לחתוך פתיחה 8 סנטימטרים גבוהה על ידי 16 אינץ' רחבה באמצע הפנל הקדמי.
3. למדוד ולסמן את החורים לציר הפסנתר על אינץ 18 ידי 10 גיליון פוליקרבונט אינץ' שיהפוך את הדלת של החדר.
4. בדלת, לקדוח חורי כיור דלפק עם מקדח אינץ 5/16, ועם מקדח אינץ 3/16, לקדוח החור לברגים. הקפד לקדוח חורי כיור דלפק בצד הפנימי של הדלת לראשי הבורג.
5. הכן את גיליונות פוליקרבונט לריתוך.
6. להרכיב לכאן ולכאןNT, לוחות גב, וצד על הלוח התחתון באמצעות ולד על # 16.
7. לאטום כל פערים בין פנלים עם ולד על # 16.
8. צרף את הפנל העליון עם ולד על # 16.
9. השתמש במלחציים בר או ספרי לימוד כבדים להחזיק הכל במקום ואילו הריתוכים לרפא.
10. צרף 1 אינץ על ידי פיסת פוליקרבונט 12 אינץ על אינץ פנל 1 הקדמי מתחת לפתיחת הקובץ המצורף של ציר הדלת.
11. אפשר לפחות 24 שעות לולד על לרפא.
12. חותכים 2 חתיכות של צינורות PEX 12 סנטימטרים וחתיכה של צינורות PEX ארוכים 1 אינץ 1.
13. עם מקדח 5/16, לקדוח חור בכל אחד מצינורות PEX אינץ 12 כ 1 עד 2 סנטימטר מקצה אחד.
14. צרף 2 x 12 צינורות PEX אינץ למחבר T-3/8 אינץ 'עם החורים ממוקמים במרחק של המחבר.
15. מכסה את הקצוות הפתוחים של צינורות PEX עם 3/8 תקעי אינץ.
16. צרף את ציר הפסנתר ללוח הקדמי ואת הדלת באמצעות 4-40 ברגים במכונה ואגוזים.
17. שימוש בדלת כמדריך, מ 'ארון החורים דרושים לציר הפסנתר על spacer 1 אינץ בלוח הקדמי של החדר.
18. עם מקדח אינץ 3/16, לקדוח חורים בפנל הקדמי לציר הפסנתר.
19. צרף את הדלת וציר פסנתר ללוח הקדמי באמצעות 4-40 ברגים במכונה ואגוזים.
20. להרכיב את מהדק לעבור כפי שמוצג בוידאו עם מכונת כביסה ואגוז בכל צד של זרוע הצד.
21. מארק ותרגיל 3/16 חורי אינץ לרכיסת מלחציים בלוח הקדמי ולצרף לעבור מלחציים עם 4-40 ברגים במכונה ואגוזים.
22. הוספת חותמות נורת גומי 3/8 אינץ לחלק הפנימי של הדלת.
23. עם מקדח משעמם 5/8 אינץ', לקדוח חור במרכז הפנל העליון לנמל הכניסה.
24. לקדוח חור 1/2 סנטימטר בתחתית / מרכז של הלוח האחורי לנמל היציאה.
25. להרכיב את נמל היציאה על ידי לחיצה על חלק ההברגה של הסנטימטר 3/8 מתאמים דרך הקיר דרך הקיר האחורי של חדר האדים בחור נמל יציאה. צרף את האגוז מפנימי של החדר כדי להחזיק במקום.
26. הסר את הכיסוי המגן מגיליונות פוליקרבונט.
27. צרף את פיסת צינורות PEX 1 אינץ לT-המחבר ולאלץ את צינורות PEX דרך החור בחלק העליון של החדר מבפנים.
28. צרף מרפק 90 3/8 אינץ לחלק העליון של צינורות PEX 1 אינץ מבחוץ.
    הערה: לקדוח חור 1/2 סנטימטר בדלת ולהכניס septa חותם 1/2 סנטימטר לתוך החור.
29. חזור על השלבים 1-22 לאוויר לשלוט בתא בלבד.

2. Rack ומיזוג משלוח עצרת

1. אם הצבת התאים על העגלה / המדף שהוזכר ברשימת החומרים, להרכיב את העגלה על פי הוראות היצרן.
2. עם ברגים ואומי חילוף, לצרף חתיכה של פוליקרבונט גרוטאות למדף כדי להחזיק את הרגולטורים זרימת האוויר.
3. בכל מקום על פיסת פוליקרבונט, סימן והתרגיל 3/4 חורי אינץ לרגולטורי זרימת אוויר הגרוטאות ולצרף רגולטורים עם האגוזיםסיפק.
4. צרף 3/8 אינץ דרך קיר מתאם ליציאות הכניסה ויציאה של זרימת אוויר הרגולטורים.
5. להרכיב את בקבוק אתנול עם אבן האוורור, # 8 פקק ושחרור מהיר בשורה מחברים.
6. באמצעות 3/8 צינורות Tygon אינץ, לחבר את זרימת הרגולטורים למשאבת האוויר ובקבוק אתנול כפי שמוצג באיור 1.
7. לאוויר החדר בלבד, לצרף את נמל היציאה של רגולטור זרימת האוויר לכניסה 3/8 אינץ מרפק 90 עם צינורות Tygon 3/8 אינץ', כפי שמוצג באיור 1.

איור 1. ייצוג סכמטי של התצורה של תאי האדים. T-מחבר מחובר למשאבת אוויר הרעש הנמוך. צד אחד של T-המחבר מחובר ישירות לרגולטור זרימת אוויר לאוויר רק חדר האדים. ים האחרIDE הוא לפצל שוב וצורף ל2 רגולטורים זרימת אוויר שונים, אחד לאוויר ואחד לאתנול. תא האוויר מחובר ישירות לרגולטור כפי שמוצג. לחדר אדי אתנול, רגולטור זרימת אוויר אחד מחובר לאבן aerator השקוע באתנול נוזלי בבקבוק המסנן. נמל זרוע הצד של בקבוק המסנן מחובר עם התפוקה של רגולטור האוויר כפי שצוין. אדי אתנול התמזגו והאוויר מחוברים אז לכניסה של חדר אדי אתנול. הצינורות לשקע (לא מוצגים) מחוברים לשקע אוורור בחדר.

3. צ'יימברס החמקן המבחן ולהתאים את רמות אתנול

1. הוספת 600 מיליליטר של אתנול 190 הוכחה לבקבוק של המסנן, הכנס את אבן האוורור, ולהתחבר למפרצון צינור לזרועו השנייה של הבקבוק.
2. דלתות לסגור קאמריות ותור במשאבת אוויר.
3. התאם רגולטורים זרימת אוויר, כך שקרוב למחצית מכמות אוויר זורם דרך האלכוהול הנוזלי כמו האוויר הוא מעורבב עם. Adjust האוויר רק זרימת אוויר לזרימה המשולבת של האלכוהול והאוויר של חדר אתנול.
4. אפשר לתאים כדי לאזן לפחות 30 דקות לפני מדידת ריכוז אוויר אתנול.
5. למדוד את ריכוז אוויר אתנול על ידי מיצוי 5 מיליליטר של אוויר עם מחט 18G ומזרק 60 מיליליטר דרך המחיצה. לדלל מדגם זה עם אוויר חדר על ידי הציור את הבוכנה חזרה ל60 מיליליטר (1:12 דילול). למדוד את רמת אוויר אתנול באמצעות נשימה בהתאם להוראות יצרן. יש צורך בדילול של אוויר החדר כדי להשיג רמות אדי אלכוהול בטווח זיהוי של נשימה.
   הערה: אם משתמש ברמות של חשיפה לאלכוהול שונות הדילול ייתכן שיצטרך להיות מותאם.
6. כנקודת מוצא, להתאים את הרגולטורים זרימת האוויר כדרושים להשגת ריכוז אלכוהול באוויר של כ 4.5-5 גר '/ ד"ל (גרם של אלכוהול מתאדה לד"ל של אוויר).

4. גידול בעלי חיים

1. נקבות בית הקבוצה C578BL / 6 עכברים (ישנים 2-3 חודשים) במשך שבוע לפחות 1 כדי לסנכרן את מחזורי השחלות.
2. בנפרד לשכן זכר עכברי C57BL / 6 (ישנים 2-5 חודשים) לפחות 2 שבועות.
3. לאחר סינכרון, לשים נקבה אחת עם זכר אחד במשך 5 ימים כדי לאפשר להזדווגות.
4. בעקבות הזדווגות, להסיר זכרים ונקבות בנפרד בית ולהכניס אותם לתוך תאים.

5. חשיפת אתנול החמקן לפני ואחרי לידה

1. לחשוף את הסכרים בהריון לאדי אתנול למשך 4 שעות בכל יום החל מהשעה 10:00 במהלך מחזור האור (אורות מ06:00-6:00) חוץ מיום לידה, כדי למנוע מות גור.
2. שוקל סכרים ביום הריונית (G) 5, G13-G14, G18 ו- G20 למעקב הריון; מצעים שונה בימים שנקבות נשקלו כדי למזער את הטיפול.
3. כל יום להחליף את המזון לקבוצות אתנול חשוף, כדי למנוע הצריכה של כדורים עם כל אתנול ספג לתוכם.
4. ביוםלידה אל תחשוף את בעלי חיים. לאחר הלידה לחשוף את הסכרים וגורים במשך 4 שעות בכל יום החל מהשעה 10:00 מP1-P12.
5. שוקל גורים על P2, P8, P12, P25 ו; ולשנות את המצעים בP8 P12 וכדי למזער את טיפול נוסף.
6. מייד לאחר החשיפה האחרונה (P12), להעביר את הכלובים לחדר דיור בעלי חיים סטנדרטי.

תוצאות

איור 2 א עולה כי שני עכברים בהריון וצאצאי ילוד נחשפו לריכוזי אדי אתנול יציבים יחסית בתאים. נעו אלה בין 4-6 גר '/ ד"ל. איור 2 מראה את BECs הושגה בעכברים בהריון כפונקציה של זמן. BECs נמדדה באמצעות דהידרוגנז אלכוהול סטנדרטי מבוסס assay ^48. בG5, BECs עלתה במהירות ל ~ 60 מ"מ שעה 2 לאחר תחילת החשיפה והגיעה לשיאו בסוף תקופת חשיפת 4 שעות. BECs ירד בהדרגה ל ~ 12 מ"מ אחרי 4 שעות נוספות לאחר תום החשיפה. על ידי G13-14, חלה ירידה דרמטית בBECs כ 60% ...

דיון

כאן, אנו מתארים בפירוט את השיטות לבניית תאי משאיפת אדים. החומרים והכלים הנדרשים כדי לבנות התאים זמינים ממספר הספקים המסחריים והצעדים לבניית התאים הם פשוטים יחסית. המערכת שאנו מתארים כאן אינה מכילה כל שסתומי סימון בקו כדי למנוע חזרה זרימה וערבוב. לא הצליחו למדוד כל אתנול לזיהוי באוויר רק תאים המצביעים על כך אין לנו כל ערבוב או זרימה לאחור של אתנול באוויר רק תאים. האוויר רק תאים צריכים להיבדק לאדי אתנול מעת לעת (יש לציין שתא האוויר תמיד צריך להיבדק לפני קאמרי אתנול כדי למנוע זיהוי ש...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
פוליקרבונט 1/4 אינץ' שקוף 48 אינץ' x 24 אינץ'	מקמאסטר-קאר	8574K23	10
אטם נורת גומי מוקצף 3/8 אינץ' רוחב x 7/32 אינץ' h	מקמאסטר-קאר	93085K67	10 רגל
ריתוך #16	מקמאסטר-קאר	7515A11	3
ציר פסנתר 12 אינץ' ארוך	מקמאסטר-קאר	1658A11	2 x 1 רגל
מהדקי החלפה סטנדרטיים	McMaster-Carr	5126A26	8
צינורות PEX 1/2 אינץ'	McMaster-Carr	51275K88	10 רגל
התאמת צינור טי דוקרני (שחור) Pkg 10	McMaster-Carr	5463K608	1
התאמת תקע דוקרני (שחור) Pkg 10	McMaster-Carr	5462K79	1
התאמת צינור מרפק דוקרני (שחור) Pkg 10	McMaster-Carr	5463K596	1
מתאמי קיר דרך 3/8 אינץ', צינור לצינור הברגה	McMaster-Carr	5463K851	1
בורג מכונת פיליפס 4-40	McMaster-Carr	91772A112	1
אגוז משושה בורג מכונה 4-40	McMaster-Carr	90480A005	1
מד זרימה להרכבה על פאנל 2-20	McMaster-Carr	41945K76	3
בקבוק, מסנן 1,000 מ"ל 6/חבילה	VWR	89001-800	2
חותם דיוק Septa	VWR	89084-490	1
פקק גומי שחור VWR #8 1 חור	VWR	59581-367	1
צינור TYGON R3603 3/8X9/16 50'VWR		89068-556	1
צינור TYGON R3603 1/4X11/16 50'VWR		89068-502	1
אבן אוורור P2120	VWR	32573-007	1
3/8 אינץ' מחברי T Pk של 20	VWR	46600-060	1
VWR מנתקים מחודדים Pk של 10	VWR	46600-110	1
3/8 צינור דוקר שסתום בשורה צימוד	מוצרים קרים החברה	HFCD17612	1
משאבת אוויר קיבולת בינונית	LMI יצרנים	DB60L	1
Nexelate מדפי תיל 36 "W X 24" D X 63 "H	T9A990135	תעשייתי גלובלי	1
סט גלגלי גזע של (4) גלגל פוליאוריטן 5 אינץ'	T9A500591	תעשייתי גלובלי	1