כאן אנו מתארים טכניקה מיקרוסקופית פשוטה ונגישה לציבור רחב לרכוש וידאו דיגיטלי באיכות גבוהה של מבוגרים תסיסנית ופנוטיפים מוטציה זחל מנקודת מבט לרוחב.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
רכישת באיכות גבוהה וידאו דיגיטלי של דרוזופילה Behaviors הזחל ומבוגרים מנקודת מבט רוחבי
במאמר זה
סיכום
תקציר
תסיסנית היא מערכת מודל ניסיוני רבת עוצמה ללימוד הפונקציה של מערכת העצבים. מוטציות גנטיות הגורמות לתפקוד לקוי של מערכת העצבים לעתים קרובות לייצר זחלים ומבוגרים שיש להם פנוטיפים פגומים תנועה שקשה לתאר במידה מספקת עם טקסט או מייצג לחלוטין עם דימוי הצילומי יחיד קיימא. מצבים הנוכחיים של הוצאה לאור מדעי, לעומת זאת, תומכים בהגשה של מדיה וידאו דיגיטלית כחומר משלים ללוות כתב יד. כאן אנו מתארים טכניקה מיקרוסקופית פשוטה ונגישה לציבור רחב לרכישת וידאו דיגיטלי באיכות גבוהה של שני פנוטיפים זחל והמבוגרים דרוזופילה מנקודת מבט לרוחב. וידאו של תנועת זחל ומבוגר מצדו להציג הוא יתרון משום שהוא מאפשר התבוננות וניתוח של הבחנות ושינויים קלים בהתנהגות קטר חריגה. אנחנו השתמשנו בהצלחה בטכניקה זו כדי לחזות ולכמת aberrant זחילה התנהגויות בזחלי instar שלישיים, בנוסף לפנוטיפים מבוגרים מוטציה והתנהגויות הכוללים טיפוח.
מבוא
הפירות הנפוצים לטוס melanogaster דרוזופילה הוא מערכת מודל ניסיוני רבת עוצמה ללימוד הפונקציה של מערכת העצבים 1-3. שימור האבולוציוני של מבנה ותפקוד של מערכת עצבים עם בני אדם, כמו גם קלות מניפולציה גנטית ומגוון רחב של כלים גנטיים גורמים דרוזופילה האורגניזם בכורה לדגמן מחלות ניווניות אנושיות 4. מוטציות גנטיות הגורמות לתפקוד לקוי של מערכת העצבים לעתים קרובות לגרום לזחלי מוטציה קיימא ומבוגרי תסיסנית עם תנועה לקויה. פנוטיפים שנצפו במוטציות פגומות מערכת עצבים כוללים ירידה בשיעור של תנועה, תיאום חריג, ותנועות עוויתיות במבוגרים, וכן את גירעונות בהתכווצות נפיחה של קיר שרירי הגוף, ושיתוק חלק....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
.1 מערכת מיקרוסקופ סטריאו
הערה: למרות שפרוטוקול זה הוא בקלות להתאמה לכמעט כל מערכת מיקרוסקופ סטריאו מצמידים את מצלמה דיגיטלית עם היכולת של רכישת וידאו, פרטים מסופקים על המערכת המשמשת במעבדה שלנו (טבלה של חומרים / ציוד).
- לרכוש וידאו דיגיטלי באמצעות מיקרוסקופ סטריאו trinocular מצמידים את מצלמה דיגיטלית מסחרית.
- על מנת זוג המצלמה הדיגיטלית המסחרית לנמל trinocular של מיקרוסקופ סטריאו, להסיר את ½x C-mount של נמל phototube של מי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
אנחנו השתמשנו בהצלחה בטכניקה זו כדי לרכוש ולכמת את הפנוטיפ ההתנהגותי הזחל הקשורים לאובדן התפקוד של גן stathmin (איור 2) 14. גן stathmin מקודד חלבון רגולטורי microtubule שמחיצות הדימרים טובולין מבריכות של טובולין המסיס, ונקשר microtubules ומקדם פירוקם 15,16. פונקצית Stathmin נדרש כדי לשמור על השלמות של microtubules בהאקסונים של עצבים היקפיים 14. שיבוש של פעילות stathmin בתוצאות זחלי instar השלישי דרוזופילה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
כוח דרוזופילה של melanogaster כמערכת מודל לחקר תפקוד מערכת עצבים נובע במידה רבה מהשילוב של כלים גנטיים רבי עוצמה זמינה והמגוון הרחב של מבחני התנהגות חזקים פיתח. כאן אנו מציגים טכניקה מיקרוסקופית פשוטה ונגישה לציבור רחב לרכישת וידאו דיגיטלי באיכות גבוהה של מבוגרים תסיסנית ופנוטיפים קטר זחל מנקודת מבט לרוחב. אנחנו השתמשנו בהצלחה בגישה זו כדי לאפיין ולכמת את החומרה של שיתוק אחורי 'זנב להעיף "פנוטיפים שנצפו במוטציות זחל instar השלישי נוירולוגית ישיר.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים הצהירו שאין אינטרסים מתחרים קיימים.
תודות
המחברים מבקשים להודות אלכסנדרה Opie לקבלת סיוע טכני ולתמיכה, ג'יימס ברטון למתן קריינות וידאו, ורמונה Flatz וJoellen סוויני הלמופיע בוידאו המצורף. עבודה זו נתמכה על ידי קרן הצדקה MJ מרדוק (מענק מס '2,012,205 לJED).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מיקרוסקופ סטריאוזום משולש | תאגיד אולימפוס | SZ6145TR | ו-frac12; תושבת C הוסרה והוחלפה ב-1X C-mount |
| 1X C-mount | Leeds Precision Instruments | LSZ-1XCMT2 | |
| מצמד מצלמה דיגיטלית (חוט 43 מ"מ) | Qioptiq Imaging Solutions | 25-70-10-02 | |
| 58 מ"מ עד 48 מ"מ טבעת מורידה | B& H Video | GBSDR5848 | |
| 48 מ"מ עד 43 מ"מ צלצול ירידה | B& | Video GBSDR4843 | |
| Lensmate עבור Canon G10 | LensMateOnline.com | ||
| מצלמה דיגיטלית Canon PowerShot G10 | Canon ארה"ב, Inc. | ||
| 1.5 מ"ל ספקטרוסקופי פוליסטרן Cuvette | דנוויל סיינטיפיק | U8650-4 |
מקורות
- Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. Drosophila neurobiology: a laboratory manual. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (2010).
- Frank, C. A., et al. New approaches for studying synaptic development, function, and plasticity using Drosophila as a model system. J Neurosci....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
