הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

גזירה של תאי לב ותאים מתאי גזע עובריים

8.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/52047

⸱

12 בינואר 2015

 ,  , 
1Cardiac Surgery, University of Michigan, 2Leon H Charney Division of Cardiology, New York University School of Medicine

במאמר זה

הודעת תיקון

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

סיכום

בפרוטוקול זה, יודגם גזירה של תאי אב לבביים מתאי גזע עובריים של עכבר ושל בני אדם. אסטרטגיה עיקרית בפרוטוקול זה היא להעשיר תאי אב לבביים בזרימה ציטומטרית באמצעות מדווחים פלואורסצנטיים שהונדסו לתוך קווי תאי הגזע העובריים.

תקציר

לתאי אב לבביים (CPC) יש את היכולת להתמיין לקרדיומיוציטים, תאי שריר חלק (SMC) ותאי אנדותל והם מבטיחים מאוד בטיפול תאי נגד מחלות לב. בין השיטות השונות לבידוד CPCs, התמיינות של תאי גזע עובריים (ESC) ל-CPCs מושכת תשומת לב רבה בתחום מכיוון ש-ESCs יכולים לספק מקור תאים בלתי מוגבל. כתוצאה מכך, פותחו אסטרטגיות רבות להפקת CPC מ-ESCs. בפרוטוקול זה מתוארת התמיינות וטיהור של CPCs עובריים מ-ESCs עכבריים ואנושיים כאחד. בשל הקושי להשתמש בסמני פני התא כדי לבודד CPCs עובריים, ESCs מהונדסים עם מדווחים פלואורסצנטיים המופעלים על ידי ביטוי cre recombinase ספציפי ל-CPC. לפיכך, ניתן להעשיר CPCs על ידי מיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות (FACS). פרוטוקול זה ממחיש הליכים ליצירת גופים עובריים (EBs) מ-ESCs לצורך אפיון והעשרה של CPC. לאחר מכן ניתן לתרבית את ה-CPCs המבודדים לצורך בידול שושלת לב ובדיקות ביולוגיות אחרות. פרוטוקול זה ממוטב עבור גזירה חזקה ויעילה של CPCs הן מעכברים והן מבני אדם כאחד.

מבוא

מחלת לב נשארת הגורם המוביל בעולם כיום ושיעורי התמותה נותרו כמעט ללא שינוי בשני העשורים האחרונים (American Heart Association). יש צורך קריטי בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות למניעה או להפוך אי ספיקת לב בצורה יעילה. אסטרטגיה מבטיחה אחת היא טיפול המבוסס על תאים בעקבות ההתפתחות המהירה של תאי גזע ביולוגיה 1. בהקשר זה, עלות לכל קליק multipotent יכול להיות מקור מצוין לתא הטיפול בשל היכולת שלהם להתרבות, אך מחויב רק לבידול שושלת לב. לכן, שיטה יעילה וחזקה כדי ליצור ולבודד עלויות לקליק הוא בעלת חשיבות רבה ללימודי טיפול בתאי לב.

פרוטוקול זה מתמקד בעלויות לקליק העוברית זוהו במהלך עובר ואיך הדור שלהם מESCs המוקדמים. עלות לכל קליק שונים היה מבודד מלב עוברי ובוגר, אפילו מעצם קישואים 2. במהלך התפתחות עובר, morphoge העצםחלבונים מגנטיים (BMPs), חברי כנפיים-סוג משפחת אתר האינטגרציה MMTV (Wnts) ואותות קטרים ​​לגרום המחויבות של Mesp1 + mesoderm multipotent 3. Mesp1 + תאים אז להתמיין המחירים לקליק העובריים 4. עלות לכל קליק אלה מסומנים בדרך כלל על ידי HCN4, homeobox NK2 5 (Nkx2-5), homeobox Isl LIM 1 (Isl1), T-תיבה 5 (Tbx5), ו2C הגורם משפר myocyte (Mef2c), יוצרים שדות לב ראשוניים והשני, ו לתרום לחלקים הגדולים של לב במהלך cardiogenesis 5-10. עלות לכל קליק שני Nkx2-5 + וIsl1 + / Mef2c + מסוגל להתמיין cardiomyocytes, תאי שריר חלק (SMCs), ותאי האנדותל 5-8. כך העלויות לקליק אלה יהיו להצמיח כלי דם של הלב, כמו גם רקמות לב והם מקור תא אידיאלי לטיפול מבוסס תאי לב. כתוצאה מכך, יצירת מחירים לקליק במבחנה הייתה מוקד מחקר עיקרי במחקרי לב וכלי דם. מאז יש לי ESCs יכולת הרחבה בלתי מוגבלתnd מייצג את תאי ICM בשלב הבלסטוציסט, בידול של ESCs לעלויות לקליק העוברית הבאים העובר הטבעי נחשב גישה הגיונית ויעילה להשגת המחירים לקליק.

אחד גישה מיושמת באופן נרחב כדי להשיג מחירים לקליק מESCs היא כדי לצבור ESCs ל -11 EBS. כדי לשפר את יעילות הבידול, גורמים כימיים וצמיחה מוגדרות המבוססים על הידע של התפתחות לב היו בשימוש 12-14. עם זאת, אין סמנים מובהקים לקליק, במיוחד לא סמנים על פני קרום תא, המקובלים בתחום. כדי לטפל בבעיה זו, ESCs מתוכננים לציון Isl1 + או Mef2c מחירים לקליק + ונגזרים שלהם עם כתבי ניאון באמצעות מערכת / loxP Cre. Recombinase cre הוא דפק בתחת שליטתו של יזם / משפר Isl1 / Mef2c. RFP השתנה ניאון חלבון או גן YFP מונע על ידי אמרגן מכונן יכול להיות מופעל על ידי כריתה של קודון עצירת flox עם recombinase cre(ISL1: cre; pCAG-flox-STOP-flox-GFP או RFP / Isl1-cre; Rosa26YFP / Mef2c-cre; Rosa26YFP) 5,6. ברגע שESCs נבדל לעלויות לקליק שדה הלב השניה, cre מונע אמרגן / משפר Isl1 / Mef2c יפעיל את כתבי ניאון ויכולים להיות מועשר מחירים לקליק על ידי FACS לטיהור. בקצרה, שיטת צבירת EB משמשת ליצירת בידול ESC. כדי לשפר את יעילות בידול, מטופלים התאים המובחנים עם חומצה אסקורבית (AA) וגורמי גדילה כגון BMP4, Activin וVEGF 13,15. פרוטוקול זה מאפשר בידול חזק ויעיל CPC באמצעות עכבר והן ESCs אדם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. גזירת העכבר עוברי המחירים לקליק מעכבר ESCs

  1. הכן שכבת מזין fibroblasts העוברי (MEFs) עכבר.
    1. מדיום חם MEF (10% FBS בDMEM) עד 37 מעלות צלזיוס.
    2. הכן צלחות מצופים ג'לטין.
      1. הוסף 1 מיליליטר של 0.1% ג'לטין במים לתוך באר של צלחת 6-היטב או 5 מיליליטר לתוך צלחת 10 סנטימטרים.
      2. השאר צלחות או מנות ב 37 מעלות צלזיוס או בטמפרטורת חדר למשך לפחות 30 דקות. לשאוף את הג'לטין לפני השימוש.
    3. הפשרה מוקרן MEFs במהירות באמבט מים 37 מעלות צלזיוס, עם רעד עדין.
    4. להעביר את התאים בעדינות צינור חרוטי 15 מיליליטר או 50 מיליליטר. הוסף 5 מיליליטר של מדיום MEF מחומם מראש. לערבל את התאים לאט וצנטריפוגות ב XG 200 במשך 5 דקות.
    5. Resuspend תאים בינוני MEF ולספור תאי קיימא. השתמש בכרכים הבאים של מדיום MEF: 2 מיליליטר לכל תאים היטב מצלחת 6 היטב ו- 10 מיליליטר לתאים מצלחת 10 סנטימטרים.
    6. תאי צלחת לתוך 6-גם צלחות או 10 מנות סנטימטר ב 1-2x 10 6 לכל צלחת / מנה.
    7. דגירה הצלחות / מנות MEF על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 שעות לפחות 24 לפני שימוש.
      הערה: מחק צלחות / מנות MEF מבוגרות יותר משבוע.
  2. הכן ESCs עכבר
    1. תרבות Isl1-cre; Rosa26YFP / Mef2c-cre; Rosa26YFP עכבר ESCs על MEFs עד מחוברות 90%. מדיום סלולארי השימוש ES מורכב של 410 מיליליטר DMEM, 75 מיליליטר FBS, 0.1 מ"מ MEM NEAA, L-גלוטמין 2 מ"מ, 0.1 מ"מ פירובט, 100 U פן / סטרפטוקוקוס, ו0.1 מ"מ β-mercaptoethanol.
    2. הכן 6-גם צלחות מצופים ג'לטין, כמתואר ב1.1.2.
    3. בינוני לשאוב מצלחות ולשטוף תאים עם DPBS.
      1. לשאוב DPBS ולהוסיף 0.4 מיליליטר 0.25% טריפסין לתוך אחד היטב צלחת 6-היטב. דגירה תאים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 למשך 5 דקות. הוסף 1 מיליליטר בינוני ES מחומם מראש להפסקת תגובת טריפסין.
    4. קציר תאים ותאי צנטריפוגות ב 200 XG בינוני ולשאוב. תאי Resuspend ב 1 מיליליטר מדיום סלולארי ES ולספור את התאים.
    5. ESCs צלחת על צלחות מצופים ג'לטין בצפיפות של 3 x 10 4/2 סנטימטר. לדגור על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 על 2 ימים שבם ESCs להגיע מחוברות כ -90%. לשנות את המדיום היומיומי.
    6. כאשר ESCs הם 90% ומחוברות, חזור על פעולות 1.2.2-1.2.5 להסיר את מתקני האכלת MEF לחלוטין.
  3. לגרום לקליק בידול על ידי היווצרות EB
    1. להכין מדיום בידול אחריו כמו: 36 מיליליטר IMDM, 12 מיליליטר F12 של בשר חזיר, L-גלוטמין 2 מ"מ, 0.34 מיליליטר BSA (7.5%), 0.25 מיליליטר N2, 0.5 B27 מיליליטר, AA / מיליליטר 50 מיקרוגרם, ו0.45 מ"מ 1-thioglycerol.
    2. בינוני לשאוב מהתאים ולשטוף עם DPBS. לשאוב DPBS ולהוסיף 0.4 מיליליטר 0.25% טריפסין לתוך אחד היטב צלחת 6-היטב. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
    3. הוסף 1 מיליליטר בינוני בידול להפסיק את התגובה ופיפטה ומטה כדי לפזר אשכולות תאים לתאים בודדים.
    4. צנטריפוגה ESCs ב XG 200 במשך 5 דקות וזורקים את המדיום.
      1. Resuspend 1 x 10 6 </ Sup> ESCs במדיום בידול 1 מיליליטר. ספירת התאים, ותרבות התאים בצלחת פטרי ניתוק הנמוך בריכוז של 1 x 10 5 תאים / מיליליטר במדיום בידול על 37 מעלות צלזיוס במשך צבירת EB ראשונה.
    5. יומיים לאחר היווצרות EB, להעביר EBS ממנות ל -50 מיליליטר צינורות. ספין ב XG 200 דקות 1. הסר בינוני ולשטוף EBS עם 10 מיליליטר DPBS בלי Ca 2 + ו Mg 2 +.
    6. לשאוב DPBS ולהוסיף 1 מיליליטר 0.25% טריפסין. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. להוסיף 4.5 מיליליטר בינוני בידול כדי לעצור את התגובה. Pipet למעלה ולמטה כדי לנתק EBS לתוך תאים בודדים.
    7. צנטריפוגה התאים ב XG 200 במשך 5 דקות. תאים בינוניים וresuspend לשאוב במדיום בידול 1 מיליליטר.
    8. ספירת התאים, ולדלל 2 x 10 6 תאים ל -1 x 10 5 תאים / מיליליטר במדיום בידול. להוסיף VEGF, BMP4 וActivin למדיום בריכוז סופי של 5 ng / ml / מיליליטר, 0.8 ng, ו5 ng / ml, בהתאמה. Cultuמחדש את התאים בצלחת פטרי להיווצרות EB שנייה על 37 מעלות צלזיוס.
    9. 40 שעות לאחר היווצרות EB שנייה, להעביר EBS 50 מיליליטר צינורות. לשטוף עם DPBS פעם, לנתק את EBS עם 1 מיליליטר של 0.25% טריפסין על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. Pipet למעלה ולמטה כדי לנתק EBS לתוך תאים בודדים.
    10. Resuspend תאי Stempro-34 בינוניים עם 5 ng / ml VEGF, 10 ng / ml bFGF ו -12.5 FGF10 ng / ml. צלחת התאים ב2 x 10 5/2 סנטימטר בצלחות מצופה ג'לטין. תרבות בחממת 37 ° C במשך כ 32 שעות לפני הבידוד לקליק.
  4. לבודד mCPCs
    1. לשאוב בינוני ולשטוף עם DPBS. הוסף 0.5 מיליליטר 0.25% טריפסין לצלחות תרבות על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. להוסיף 4.5 מיליליטר בינוני בידול כדי לעצור את התגובה. Pipet למעלה ולמטה כדי לנתק EBS לתוך תאים בודדים. לאסוף את התאים על ידי תאי צנטריפוגה וגלולים ב2% FBS / PBS לFACS-טיהור.
    2. הפעל ESCs מובחן על סדרן כביקורת השלילית. מתח שינוי כדי להתאים גללים קדימהter (FSC) והצד פיזור (SSC) כדי לבחור אוכלוסייה רצויה. השתמש קדימה לפזר לעומת פיזור צד וגובה פיזור קדימה לעומת רוחב להוציא פסולת וכפיל. בתת-האוכלוסייה שנבחרה, על פי ההתפלגות של בקרות ESC, לצייר שער של YFP חיובי על היסטוגרמה לחסל autofluorescence תא. לאסוף YFP + עלות לכל קליק מYFP + gating.
    3. פלייט המחירים לקליק המטוהר (תאי YFP +) ב6-גם צלחות עם מדיום בידול (1.3.1). תרבות 3-5 ימים נוספים על 37 מעלות צלזיוס במשך בידול של העלויות לקליק לשריר לב וSMCs.

2. גזירה של האדם עוברי מחירים לקליק מESCs האדם

  1. הכן האכלה
    1. הכן שכבת מזין fibroblasts העוברי (MEFs) עכבר כפי שתואר לעיל בצפיפות של 2 x 10 4/2 סנטימטר.
  2. לשמור על ESCs אדם
    1. לשמור ISL1 האנושי: cre; pCAG-flox-STOP-flox-GFP או RFP ESCs באופן שגרתי על MEF באמצעות מדיום hESC רגיל (Knockout DMEM / F-12 385 מיליליטר, 100 מיליליטר SR Knockout, L-גלוטמין 2 מ"מ, 0.1 מ"מ NEAA, 0.1 מ"מ β-mercaptoethanol, 10 ng / FGF הבסיסי מיליליטר). לפני בידול לב, להעביר ESCs אדם במצב חופשי מזין לפחות 2 קטעים.
  3. הכן ESCs אדם במצב חופשי מזין
    1. הכן צלחות מצופים לתרבות ESCs אדם.
      1. להפשיר matrigel על 4 מעלות צלזיוס למשך לילה. שים שפופרת 50 מיליליטר על קרח ולהוסיף 30 מיליליטר בינוני / F12 DMEM קר לתוך הצינור.
      2. להוסיף matrigel 1 מיליליטר לתוך המדיום הקר ומערבבים היטב. הוסף 1 מיליליטר matrigel-DMEM הקר / 12 בינוני לתוך באר של צלחת 6-היטב או 5 מיליליטר לתוך צלחת 10 סנטימטרים.
      3. השאר צלחות / טמפרטורת מנות ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה או בחדר לשעה 2. בינוני לשאוב לפני השימוש.
    2. פיצול ESCs אדם לצלחות: תקשורת לשאוב מצלחת MEF ולשטוף ESCs אדם עם DPBS. לאחר מכן להוסיף dispase 1 מיליליטר (1 מ"ג / מיליליטר) לבאר של צלחת 6-היטב. דגירה תאים ב -37 ° Cחממה עד קצוות של מושבות להתחיל לנתק.
    3. הסר פתרון dispase. לשטוף עם DPBS פעמיים, ולאחר מכן להוסיף 2.5 מיליליטר / לכל מדיום גם mTeSR או בינוני מזגן MEF לצלחת.
    4. לגרד תאים באמצעות מגרד תא ובזהירות pipet למעלה ולמטה כדי לשבור מושבות ESC אנושיות לגושים קטנים.
    5. העבר את גושי ESC ולדלל 1: 3 לצלחות מצופים.
    6. הוסף 2 מיליליטר / גם בינוני mTeSR או בינוני מזגן MEF ולשנות בינוני יומי.
    7. ESCs אדם תרבות במדיום mTeSR או בינוני מזגן MEF על צלחות מצופים לפחות 2 קטעים.
  4. להשרות התמיינות CPC מESCs האדם
    1. כאשר תאים ומחוברות ~ 90%, לשאוב את המדיום ולשטוף עם DPBS. אז דגירה hESCs ב 0.5 מ"ג / מיליליטר Dispase על 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.
    2. יש לשטוף את hESCs עם DPBS פעמיים, להסיר תאים מצלחות עם מרים תא, אז resuspend מהדק תא במדיום בידול (DMEM / F12 המכיל 18% FBS, 0.1 מ"מ NEAA, 2 מ"מL-גלוטמין, 0.1 מ"מ β-mercaptoethanol ו -50 מיקרוגרם / מיליליטר אסקורבית חומצה).
    3. העבר את התאים לתוך צלחות מצורפים נמוכות במיוחד 6-גם להיווצרות EB.
    4. שנה בינונית בידול למחרת.
    5. החלף בינוני כל 3 ימים ולשמור על EBS בתרבות השעיה.
  5. לבודד HCPCS
    1. לאסוף EBS לא יאוחר מהיום 9 של בידול לבידוד CPC אנושי.
    2. לשאוב בינוני ולשטוף EBS עם DPBS פעמיים. הוסף 0.5 מיליליטר 0.25% טריפסין היטב בכל תרבות צלחות 6-גם על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
    3. הוספת נפח שווה של מדיום בידול כדי לעצור את התגובה. Pipet למעלה ולמטה כדי לנתק EBS לתוך תאים בודדים. לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה XG 200 במשך 5 דקות ותאי resuspend ב 2% FBS / DPBS. תאי סינון עם מסננת 40 מיקרומטר תא וטהר-FACS RFP + תאי CPC, כמתואר ב1.4.3.
    4. צלחת מסודרים HCPCS על צלחות מצופים geltin. HCPCS תרבות במדיום בידול ל7ימים -9 להתמיין לתאי שריר החלק וcardiomyocyte. 7 ימים לאחר הציפוי, תרבות מובחנת תאים עם 5% SR Knockout במדיום / F12 DMEM.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הפרוטוקול מראה גזירה של המחירים לקליק מכמה שורות תאי גזע עובריים. ESCs יקובץ ליצירת EBS להתמיין לעלויות לקליק. ESCs נשמרים באופן שגרתי על מתקני האכלת MEF (איור 1 א, ו) ומזינים להסיר לפני ההתמיינות. על הצבירה של ESCs לEBS במדיום בידול (איור 1 ב, ז), מטופלים EBS יצר השני עם BMP4 וActivin כדי לשפר את בידול המזודרם בשורות תאי עכבר (איור 1 ג). ESCs נבדל לשושלת לב כפי שזוהה על ידי חלבון ניאון YFP / RFP (1D איור). העלויו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה משלב שיטה המשתמשת בגורמי גדילה כדי להנחות התמיינות mESCs והתמיינות ספונטנית של ESCs אנושיים ל-CPC. שושלת CPC המסומנת במדווח פלואורסצנטי משמשת לזיהוי ובידוד יעיל של CPCs על ידי FACS. ה-CPCs המטוהרים על ידי FACS שומרים על היכולת להתמיין לקרדיומיוציטים, שריר חלק ותאי אנדותל ויש להם פרופיל ביטוי דומה לתאי in vivo. לפיכך, CPCs אלה יכולים לשמש כמשאב נהדר לטיפול לב מבוסס תאים בגלל יכולתם ליצור גם שריר לב וגם מבני כלי דם.

שלב קריטי אחד בפרוטוקול זה הוא זיהוי התזמון הנכון הקשור לטוהר וכמות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

אנו מודים לד"ר ליאוניד גנטובסקי על קריאתו המדוקדקת והביקורתית של המאמר. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי מענקים מהמכונים הלאומיים לבריאות (HL109054) ומרכז הלב וכלי הדם ע"ש סמואל וג'ין פרנקל, אוניברסיטת מישיגן (קרן הפתיחה) ל-WZ ומהמחלקה לקרדיולוגיה ע"ש ליאון צ'רני, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ניו יורק ל-BL.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
FBSתרמו ניחוחSH30070.03E
נוקאאוט טכנולוגיית SRLife10828028
טכנולוגיית Knockout DMEMLife10829018
DMEMLife11965118
NEAALife11140050
GlutaMAXLife35050061
N2Life17502048
טכנולוגיית B27Life12587010
Ham' טכנולוגיית s F12Life11765062
טכנולוגיית IMDMLife12440061
טכנולוגיית Pen/StrepLife15140122
PyruvateLife11360070
DispaseLife17105041
Stempro-34Life10639011
DMEM/ F12Life Technology11330032
BSA טכנולוגיית חיים15260037
טריפסין טכנולוגיית חיים25200056
חומצה אסקופית SigmaA5960
1-ThioglycerolSigmaM1753
2-MercaptoethanolSigmaM3148
VEGFR& D293-VE
Bmp4R& D314-BP
ActivinAR& D338-AC
bFgfR& D233-FB
Fgf10R& D345-FG
mTeSRטכנולוגיות תאי גזע5850
MatrigelBD Biosciences354277
טכנולוגייתטכנולוגייתטכנולוגייתטכנולוגיית טכנולוגייתטכנולוגייתטכנולוגיית

מקורות

  1. Garbern, J. C., Lee, R. T. Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration. Cell Stem Cell. 12 (6), 689-698 (2013).
  2. Passier, R., van Laake, L. W., Mummery, C. L. Stem-cell-based therapy and lessons from the heart. Nature. 453 (7193), 322-329 (2008).
  3. Bondue, A., Blanpain, C. Mesp1: a key regulator of cardiovascular lineage commitment. Circulation Research. 107 (12), 1414-1427 (2010).
  4. Bondue, A., et al. Mesp1 acts as a master regulator of multipotent cardiovascular progenitor specification. Cell Stem Cell. 3 (1), 69-84 (2008).
  5. Bu, L., et al. Human ISL1 heart progenitors generate diverse multipotent cardiovascular cell lineages. Nature. 460 (7251), 113-117 (2009).
  6. Lei, I., Gao, X., Sham, M. H., Wang, Z. SWI/SNF protein component BAF250a regulates cardiac progenitor cell differentiation by modulating chromatin accessibility during second heart field development. The Journal of Biological Chemistry. 287 (29), 24255-24262 (2012).
  7. Lei, I., Liu, L., Sham, M. H., Wang, Z. SWI/SNF in cardiac progenitor cell differentiation. Journal of Cellular Biochemistry. 114 (11), 2437-2445 (2013).
  8. Wu, S. M., et al. Developmental origin of a bipotential myocardial and smooth muscle cell precursor in the mammalian heart. Cell. 127 (6), 1137-1150 (2006).
  9. Spater, D., et al. A HCN4+ cardiomyogenic progenitor derived from the first heart field and human pluripotent stem cells. Nature Cell Biology. 15 (9), 1098-1106 (2013).
  10. Verzi, M. P., McCulley, D. J., De Val, S., Dodou, E., Black, B. L. The right ventricle, outflow tract, and ventricular septum comprise a restricted expression domain within the secondary/anterior heart field. Developmental Biology. 287 (1), 134-145 (2005).
  11. Boheler, K. R., et al. Differentiation of pluripotent embryonic stem cells into cardiomyocytes. Circulation Research. 91 (3), 189-201 (2002).
  12. Wada, R., et al. Induction of human cardiomyocyte-like cells from fibroblasts by defined factors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (31), 12667-12672 (2013).
  13. Kattman, S. J., et al. Stage-specific optimization of activin/nodal and BMP signaling promotes cardiac differentiation of mouse and human pluripotent stem cell lines. Cell Stem Cell. 8 (2), 228-240 (2011).
  14. Takahashi, T., et al. Ascorbic acid enhances differentiation of embryonic stem cells into cardiac myocytes. Circulation. 107 (14), 1912-1916 (2003).
  15. Wamstad, J. A., et al. Dynamic and coordinated epigenetic regulation of developmental transitions in the cardiac lineage. Cell. 151 (1), 206-220 (2012).
  16. Cong, L., et al. Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems. Science. 339 (6121), 819-823 (2013).
  17. Ding, Q., et al. Enhanced efficiency of human pluripotent stem cell genome editing through replacing TALENs with CRISPRs. Cell Stem Cell. 12 (4), 393-394 (2013).
  18. Gaj, T., Gersbach, C. S. 3rd, Barbas, T. A. L. E. N. ZFN, TALEN, CRISPR/Cas-based methods for genome engineering. Trends in Biotechnology. 31 (7), 397-405 (2013).
  19. Joung, J. K., Sander, J. D. TALENs: a widely applicable technology for targeted genome editing. Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 14 (1), 49-55 (2013).
  20. Yang, H., et al. One-step generation of mice carrying reporter and conditional alleles by CRISPR/Cas-mediated genome engineering. Cell. 154 (6), 1370-1379 (2013).
  21. Mali, P., et al. RNA-guided human genome engineering via Cas9. Science. 339 (6121), 823-826 (2013).
  22. Laflamme, M. A., et al. Cardiomyocytes derived from human embryonic stem cells in pro-survival factors enhance function of infarcted rat hearts. Nature. biotechnology. 25 (9), 1015-1024 (2007).
  23. Burridge, P. W., et al. A universal system for highly efficient cardiac differentiation of human induced pluripotent stem cells that eliminates interline variability. PloS One. 6 (4), e18293(2011).
  24. Kouskoff, V., Lacaud, G., Schwantz, S., Fehling, H. J., Keller, G. Sequential development of hematopoietic and cardiac mesoderm during embryonic stem cell differentiation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (37), 13170-13175 (2005).
  25. Xu, X. Q., et al. Chemically defined medium supporting cardiomyocyte differentiation of human embryonic stem cells. Differentiation: Research in Biological Diversity. 76 (9), 958-970 (2008).
  26. Lian, X., et al. Robust cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells via temporal modulation of canonical Wnt signaling. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (27), E1848-1857 (2012).
  27. Bizy, A., et al. Myosin light chain 2-based selection of human iPSC-derived early ventricular cardiac myocytes. Stem Cell Research. 11 (3), 1335-1347 (2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תיקון


Formal Correction: Erratum: Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells
Posted by JoVE Editors on 8/10/2016. Citeable Link.

A correction to the author list was made to: Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells.

The following author is now listed as a co-corresponding author:

Lei Bu

גלה מאמרים נוספים

מיון תאים מופעל פלואורסצנציהיצירת גופי עוברהתמיינות תאיםציטומטריית זרימהפלטות מצופות ג'לטיןטיפול בגורמי גדילהניתוח שושלת תאיםביטוי של רפורטר פלואורסצנטי
גזירה של תאי לב ותאים מתאי גזע עובריים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.