מאמר שיטה

לטווח ארוך זמן פקיעת הדמיה של Explants שבלול העכבר

DOI:

10.3791/52101

⸱

2 בנובמבר 2014

 , 
1Biological Sciences Platform, Sunnybrook Research Institute, 2Department of Otolaryngology - Head and Neck Surgery, University of Toronto, 3Department of Laboratory Medicine and Pathobiology, University of Toronto

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הדמיה חיה של שבלול האוזן של יונקים העובריים היא מאתגרת, כי התהליכים התפתחותיים ביד פועלים על שיפוע זמני על עשרה ימים. כאן אנו מציגים שיטה culturing ולאחר מכן ההדמיה רקמות explant השבלול עוברית שנלקחו מעכבר כתב ניאון בחמישה ימים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו מציגים שיטה להדמית הזמן לשגות ארוך טווח של explants שבלול עכבר העוברי בשידור חי. תכנית התפתחותית אחראית על בניית מבנה הורה מאוד, מורכב מתמורת השבלול של יונקים לכעשרה ימים. על מנת ללמוד את השינויים בביטוי הגנים על פני תקופה זו ותגובתם לתרופות או מניפולציה גנטית, הדמיה לטווח ארוך יש צורך. בעבר, הדמיה חיה יש בדרך כלל מוגבלת על ידי יכולת הקיום של רקמת explanted בתא humidified על גבי מיקרוסקופ רגיל. קושי בשמירה על תנאים אופטימליים לצמיחת תרבות בכל קשור ללחות וטמפרטורה יש להציב מגבלות על האורך של ניסויי הדמיה. מיקרוסקופ המשולב בתרבית רקמת חממה שונה מספק סביבה מצוינת להדמיה לטווח ארוכה וחי. בשיטה זו אנו מדגימים כיצד להקים explants שבלול עכבר עוברי וכיצד להשתמש במיקרוסקופ חממה לנהל imagi הזמן לשגותng באמצעות שני שדה בהיר ומיקרוסקופ פלואורסצנטי לבחון את התנהגותו של יום עוברי טיפוסי (E) 13 explant שבלול וSox2, סמן של תאי prosensory של השבלול, מעל 5 ימים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השבלול של היונקים הוא איבר מורכב הורה מאוד. בעכבר, בין הופעתה של האוזן הפנימית הפרימיטיבית משלפוחית ​​otic ביום E11 והשלמת התכנית התפתחותית בשלבי לידה מוקדמים, גלים רבים של איתות תא ושינויים מתואמים בביטוי גנים יתקיימו. פועל מבסיס לקודקוד צינור השבלול הוא הצליל זיהוי האפיתל חושית, או איבר של קורטי. פיתוח של האיבר של קורטי נשלט להפליא כך שעד סוף הפיתוח, זה יהיה מורכב משורה אחת של תאי שיער פנימיים, שלוש שורות של תאי שיער חיצוניים וביניהם חמש שורות של תאי תומכים (שתי שורות של תאי עמוד, שלוש שורות של התאים 'Deiters) 1. סטייה מתוצאות סדר המדויקת הזה בירידה בשמיעה, heighlighting חשיבות studye הצטברו בראשית ודפוסים של epithemlium החושי 2.

בתרבית במבחנה של coch העכבר העוברילאה היא כלי חיוני בחקר המנגנונים של התפתחות של האיבר של קורטי. טכניקה זו הוקמה בשנת 1974 ובמשך 40 השנים האחרונות, נעשתה שימוש כדי להבהיר רבים מהמנגנונים שבאמצעותם האפיתל החושית מצוינת והאיבר של הקורט הוקמו 3. השבלול הוא איבר מורכב עם תהליכים התפתחותיים דינמיים; מניפולציה עשויה להימשך עוד כשבעה ימים כדי להגשים 1. לדוגמא, בעת הוספת מעכבי 3β GSK לתרבות explant שבלול בE13, תקופת הדגירה האופטימלית להתבונן השפעה חזקה של המתחם היא שישה ימים 4.

הדמיה חיה של שבלול הפיתוח מאפשרת חקירת שינויים במורפולוגיה של האיבר של קורטי, שינויים בביטוי גנים, מעקב נודד, מתרבים או למות תאים, וזה מאפשר התבוננות בזמן אמת של התוצאות של סוכני תרופות ושיבוש האיתות מסלולים. עד עכשיו, לחיות הדמיה של השבלולבעיקר שבוצע באמצעות מיקרוסקופ confocal לאזורים קטנים תמונה של האיבר של קורטי על פני תקופות זמן קצרות 5-8, אבל טכניקה זו יש מגבלות בשל כדאיות explant. בהדמיה של ההשפעות של מניפולציות לטווח ארוך יותר על תהליכים ההתפתחותיים איטיים, סביבת ההדמיה היא קריטית. בדרך כלל מערכת הדמיה חיה confocal משתמשת קופסא פלסטיק humidified שיושב על המיקרוסקופ. חום ולחות יכולים לברוח דרך הפערים בתיבה דוגרות במפגש שולחן מיקרוסקופ, דרך חלונות הגישה, דרך פתחי צירים ודרך הפערים סביב חלקים שונים של microscope- כגון אובייקטיבי או מקור האור. זה לא אופטימלי לשמירת explants הבריא יותר מימים או שלוש.

אנו מגדירים "מיקרוסקופ חממה 'כמיקרוסקופ הפוכה אטומה בתוך CO 2 באינקובטור סטנדרטי, ולא חממה שנבנתה סביב מיקרוסקופ. לשעבר מיקרוסקופ החממהנוטה החיים של הניסוי כזה שלא הדמיה על שניים או שלושה ימים, ניתן הדמיה דגימות לתקופה של עד שבועיים. מיקרוסקופ חממה מספק סביבה מצוינת לצמיחה והתמיינות של תאים, עם הפרעה מינימאלית לexplant תרבויות ותנאים סטנדרטיים מבוקר. במחקרים שיתקיימו במשך ימים רבים זה מקובל לפנות לדגימות הדמיה על בסיס יומי על ידי הוצאתם מהחממה ונשא אותם למיקרוסקופ פלואורסצנטי הפוך. בעוד גישה זו יכולה לעבוד, הסרת המנות מהחממה גורמת ללחץ על רקמת הפיתוח רגישה. שינויים בחומציות של מדיום התרבית ותנודות טמפרטורה בשל ההסרה מן החממה יכולים לגרום להתפתחות תת אופטימלית ורקמות בריאים. הדמיה באותו האזור באותו מישור המוקד ובאותו כיוון בכל נקודת זמן היא מאוד מאתגרת. על ידי שימוש במערכת אוטומטית בתוך חממה, ניתן לשמור על בריאותרקמה, כדי לאסוף תמונות הנמצאות בנקודתי זמן ולהבטיח כי אותו האזור שנתפס בכל מסגרת. בשנים האחרונות כמה חממות רקמת מיקרוסקופ משולבות פותחו, אלה היו שימושיים לא רק בפרקטיקה קלינית 9 אלא גם בתאי גזע וסרטן מחקר 10,11.

כאן אנו מציגים פרוטוקול להדמיה לחיות לטווח הארוך של explants שבלול עכבר העוברי. אנו משתמשים במערכת מיקרוסקופיה אוטומטית בתוך חממת CO 2 סטנדרטית שיש לו את היכולת ללכוד תמונות של דגימות מרובות בנקודות זמן מוגדר. המערכת מורכבת ממיקרוסקופ הפוך להגדיר בתוך חממה. דגימות ממוקמות בבמה מסתובבת המאפשרת הדמיה של דגימות מרובות בכל נקודת זמן. תאורה, לכידת תמונה, והסיבוב של הבמה נשלטות על ידי מערכת אוטומטית המופעלת באמצעות תוכנת Metamorph. על ידי הגדרה שגרתית הדמיה באמצעות תוכנת ההפעלה אנו יכולים להגדיר ניסוי כדי לרוץ עד TWשבועות o עם התערבות אנושית מינימאלית. בדוגמא זו אנו משתמשים הן שדה הקרינה בהירים להציג צמיחה בקנה מידה גדולה וסידור מחדש של השבלול, ובאופן ספציפי, באזור prosensory. בניסוי זה, cochleae יהיה גזור מעכברי כתב Sox2 EGFP ביום עוברי E13. תרבויות במבחנה תוקמנה ולאחר מכן צילם במשך חמישה ימים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

רקמת העכבר הייתה שנקטפו מן Sox2 EGFP -reporter עכברי 12 נשמרו ומורדמים בבהתאם להחלטת מועצה קנדית על הנחיות טיפול בבעלי חיים לטיפול ולשימוש בחיות מעבדה.

1. Culturing עוברי Cochleae

  1. להשלים הנשר בינוני השתנה Dulbecco (DMEM) על ידי ערבוב 8.89 מיליליטר של DMEM, 1 מיליליטר של סרום שור העובר (FBS), של 100x תוספת N2 100 μl, ו -10 μl של 10 מ"ג / מיליליטר ציפרופלוקסצין. תוספת מלח הפתרון מאוזן של האנק (HBSS) על ידי ערבוב 495 מיליליטר HBSS עם 5 מיליליטר של HEPES 100%.
  2. הכן מנות תרבות תחתית זכוכית:
    1. בזרימה למינרית, resuspend 200 מצע תמצית קרום במרתף μl ב 5 מיליליטר DMEM. הכן מנות תרבות תחתית זכוכית בקוטר 35 מ"מ עם 10 בארות מ"מ. פיפטה מצע / DMEM 150 μl למרכזו של כל כוס תחתית צלחת. ניתן להשתמש בכלים אלה לאחר דגירה 40 דקות, או יכולים לאחסן בCO 2 חממה ב 35 מעלות צלזיוס במשך שבוע לפחות.
      הערה: זכוכית תחתית מנות משמשות מהסיבות הבאות: כדי להבטיח כי הבסיס של המנה הוא שקוף ומתאים להדמיה, כדי ליצור גם במרכז הצלחת, המאפשרת explants להתיישב באזור הממוקם בקלות ובסופו של דבר כך שלאחר ניסוי המדגם יכול להיות מעובד לimmunostaining וניתוח שלאחר מכן.
  3. הכן את תחנת העבודה וכלים:
    1. הפעל את הספסל הנקי הזרימה למינרית, ולרסס למטה עם 70% EtOH ליצור מרחב עבודה נקי. משרים מלקחיים, כפות, וצלחת שחורה 184 אלסטומר סיליקון (תערובת של אלסטומר 184 סיליקון (10 חלקים), סוכן ריפוי (חלק 1) ואבקת פחם (2.5 גר ')) בEtOH 70%.
  4. בתחנת העבודה נקייה, עוברי קציר לצורך הניסוי. איסוף עובר מההריון המתאים בקרח HBSS הקר בתוספת 1% HEPES.
    1. לקבוע איבר חיצוני או גלוי שידגיםפעילות וכתב לבחון את העוברים באמצעות מיקרוסקופ סטריאו ניאון. לאסוף את העוברים שתערוכת פעילות עיתונאית בקרח HBSS הקר בתוספת HEPES 1% כמו אלה הם הנושא של הניסוי.
  5. לאסוף עצמות זמניות:
    1. עבודה במהירות, תוך שימוש במקור אור מגניב ומלקחיים בסדר, לאסוף את ראשי הגורים. דואג לקליפ בחוליות הצוואר ומתחת ללסת כדי למנוע נזק לעצמות הזמניות.
    2. לפתוח בזהירות את הגולגולת. הסר את המוח, לקצץ את החלק הקדמי של הראש, ולהעביר את הגולגולת האחורית לHBSS קרח הטרי הקר בתוספת HEPES% 1 בצלחת נקייה. לנתח בזהירות העצמות הזמניות צורת הבוטן מקפידים לשמור על מערכת שיווי המשקל בטקט.
  6. לנתח את השבלול:
    1. העבר את העצמות הזמניות לצלחת מצופה אלסטומר סיליקון השחור בקרח HBSS הקר בתוספת 1% HEPES, להצמיד אזור שיווי המשקל של העצם. הכנס סיכות חרקים בזווית אלכסונית כדי לייצב את העצם הטמפורלית וליצור מקום למלקחיים. נעיצה היא צעד מכריע בתהליך כאילו העצם הטמפורלית מותר לנוע יותר מדי קשה מאוד למסוק שבלול בשלמותה.
    2. מוציא בזהירות את הסחוס המקיף את שבלול האוזן. הכנס שן אחד המלקחיים לתוך הסחוס בקצה החיצוני של הבסיס של השבלול וקליפ חור בסחוס.
    3. קליפ דש בצד, להכניס את שן של המלקחיים ובעדינות להפריד את הגג של הצינור מהסחוס. קליפ אופקי לרוחב החלק העליון ואלכסון, והרימו בזהירות מהחלק הקדמי של הקפסולה. הכנס שיניים של המלקחיים בין הסחוס שנותר ואת הצינור בעדינות קליפ מהחלק האחרון. משטח הפסגה של השבלול נחשף עכשיו.
    4. החל בבסיס, לתפוס את האזור שבו הגג של הצינור עומד באפיתל השבלול ולפתוח את צינור השבלול. לקלף בעדינות מהגג, זמירהבעת צורך, עד להסרה מוחלטת. חתוך את כל חלקים של קרום שנותר בצד המדיאלי של הצינור. נקה את הצינור של רקמת mesenchymal עודפת ולנתק את הצינור ממערכת שיווי המשקל.
  7. תרבות explants:
    1. הנח explant, משטח עד לומינל, במרכז צלחת תרבות תחתית זכוכית מצופה מצע, בזהירות לצייר את כל הנוזלים ולהשאיר למשך שתי דקות. להוסיף 150 μl בתוספת DMEM הירידה מבחינת לexplant, נזהר שלא להפריע לו. צריך explant לצוף חופשי, למקם מחדש עם מלקחיים, אבל דואג שexplant ישקע לתחתית הצלחת, כך שהוא יכול לצרף המצע.
    2. הנח את צלחות זכוכית תחתונה בצלחת פטרי בקוטר 12 סנטימטר עמוקה, עם מנה קטנה של מים סטריליים כדי לשמור על לחות. שים התרבויות לC חממת 35 ° לילה על מנת שexplant לצרף את המצע ולשטח.

2. לגור מתאר לעצמיing

  1. בחר דגימות explant. השתמש במיקרוסקופ סטריאו ניאון כדי להעריך את מצבו של כל שבלול explanted. לבחור רק explants בי הצינור שלם ומחובר לכוס מבסיס לקודקוד.
  2. הגדר את החממה ב 35 ° C עם 5% CO 2 לרקמת שבלול התרבות. שים תרבויות למיקרוסקופ החממה:
    1. לשאוב בעדינות את DMEM בתוספת ולהחליף עם לפחות 500 μl תקשורת טרי. עבור הדמיה עד 6 ימים, 1-1.5 מיליליטר הוא טוב יותר. במקרים בהם explants הם מחוברים באופן רופף, פיפטה טבעת של תקשורת סביב הקצה של המנה. נוזל נוסף זה יגרום "תא humidified 'זעיר מבלי להפריע explant בזמן שהוא ממשיך לצרף למטריצה.
      1. לחלופין, שימוש צירים צלחת מכסה כדי לפתוח את המכסים ואילו במנה נשאר בשלה ראוי במיקרוסקופ אם ריאגנטים צריכים להיות מוחלפים בהפסקות בין אוספי תמונות. כיסויי צלחת צירים לאפשר המכסים להיותנפתח מבלי להפריע דוגמאות או הסרת המנות מההגדרות שלהם. זה שומר את המיקום המדויק שלהם ללוכדים תמונה שלאחר מכן.
    2. הכנס את הכלים מזכוכית תחתונה המכילים דגימות מתאימות לבעל צלחת מדגם. מיקרוסקופ בדוגמא זו יש פלטפורמה מסתובבת שמחזיקה שמונה מנות מדגם 35 מ"מ.
    3. תחת מכסה המנוע הזרימה למינרית להחליף את מכסי פלסטיק עם מכסי זכוכית והכנס את המנות לבעל צלחת מדגם. הנח את בעל צלחת מדגם בתוך מטפל חממה שלא לעקור את explants מהחלק התחתון של המנה או להפריע לתקשורת.
  3. הגדר את שגרת ההדמיה:
    1. לעבור על המיקרוסקופ, מנורת UV ומצלמה ופתח את תוכנת ההדמיה.
    2. אתר את הדגימות, לאסוף אזור הדמיה, מטוס של מוקד ולהתאים זמני חשיפה לכל מנה ברצף. בחר המטוס של מוקד תלוי לא רק במבט של explant בעת ההתחלה, אבל אלכך בהתחשב באופן שבו הרקמה תעבור וכמה זמן כמובן הזמן ירוץ.
    3. להגדיר ערימת Z שבמרכזו מישור המוקד הנבחר בערוץ הקרינה. הגדר את התדירות ואורך הדגימה לצורך הניסוי. תדירות הדגימה תהיה מוגבלת על ידי הזמן שנדרש כדי לאסוף תמונות, כך זה צריך להיקבע לאחר בחירת שדות מבט והגדרת ערימת Z. במקרה זה דגימה מתקיימת בכל 30 דקות על פני חמישה ימים. משך הניסוי יכול להיות עד 14 יום.
  4. צור סרט:
    1. בתום תקופת הזמן לשגות לפתוח את קבצי תמונה. במקרה זה תוכנת Metamorph שנפתחה נקודות איסוף רציפות משמשת. פריים אחר פריים לבחור את מישור המוקד הטוב ביותר להצגת אוכלוסיית התא של עניין.
    2. המרת תמונות אלה לקובץ .avi, או לייצא אותם כמונטאז 'כדי ליצור סט של תמונות שניתן לפתוח ונותחו בתוכנת עיבוד תמונה או להמרה לפורמה מרובהTS באמצעות תוכנת עיבוד וידאו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו מראים מונטאז '(איור 1) וסרט (איור 2) המדגים כיצד explant שבלול organotypic טיפוסי יגדל אם מצופה על E13.5. עכבר כתב Sox2 שימש כדי להמחיש את אזור prosensory. הסרט ממחיש כי השבלול עובר צמיחה והתכנסות וסיומת, לא נראים התאים באזור הלטרלי של תחום Sox2 הירוק לחלק כמו הרקמה המקיפה אותה מתרחב. זהו מאפיין של האיבר של קורטי; על E13 האפיתל החושית הפוטנציאלי יוצאת מחזור התא, והוא ידוע בהמשך כאזור של אי-הפצה 13. ניסוי הזמן ל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ישנן מספר נקודות טכניות לשקול בעת תרבויות הוקמו ובהקמת מיקרוסקופ הזמן לשגות במטרה להדמיה לטווח ארוך.

אנו משתמשים במטריצת קרום במרתף כמצע לculturing explants שבלול, אבל המצע צריך להיות מותאם לסוג התא. לדוגמא, לתרבויות עצביות תמונה, זה יכול להיות טוב יותר כדי לספק ציפוי פיברונקטין. צריכה להיות גם נבחרו טמפרטורת דגירה ובהרכב גז בהתאם לסוג רקמה. בחירת גיל explant חשובה. אנחנו מתחילים בE13 בבית המוקדם, כי על E12 כיוון...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יש לי המחברים אין לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תודה לך וילי שמש לקבלת סיוע טכני וד"ר קריס Gellynck על הערות מועילות ושלושה מבקרים האנונימיים על העצה הבונה. עבודה זו מומנה על ידי יוזמת התחדשות השמיעה Sunnybrook

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מדיה נשר שונה של DulbeccoGibco12430מותגים מרובים מייצרים
תמצית קרום מרתף זו קורנינג354230מטריגל. מוצרים דומים חלופיים זמינים מספקים אחרים.
http://catalog2.corning.com/Lifesciences/en-US/Shopping/Product.aspx?categoryname=Cell+Culture+and+Bioprocess%28Lifesciences%29|חוץ-תאי+מטריקה+חלבונים+ECMs+ו+התקשרות+גורמים%28מדעי החיים%29|מטריג'ל + מרתף + ממברנה + מטריקס + %28מדעי החיים %29
סרום בקר עובריGibco16000044מספר מותגים מייצרים את זה
http://www.lifetechnologies.com/search/global/searchAction.action?query=fbs&resultPage=1&results PerPage = 15& השלמה אוטומטית=
HEPESGibco5630080מותגים מרובים מייצרים את זה
http://www.lifetechnologies.com/search/global/searchAction.action?query=hepes&resultPage=1&results PerPage=15& השלמה אוטומטית =
100 x N2 תוספתGibco17502-048מותגים מרובים מייצרים את זה
http://www.lifetechnologies.com/search/global/searchAction.action?query=n2&resultPage=1&results PerPage = 15& autocomplete=
CiprofloxacinSigma Aldrich17850-5G-Fמותגים מרובים מייצרים את תמיסת > http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/fluka/17850?lang=en®ion=CA<המלח
המאוזנת של האנקGibco14170161מספר מותגים מייצרים זאת. יש לחדש לפני השימוש.
http://www.lifetechnologies.com/us/en/home/life-science/cell-culture/mammalian-cell-culture/reagents/balanced-salt-solutions/hbss-hanks-balanced-salt-solution.html?s_kwcid=AL!3652!3!26107410508!e!!g!!hbss&ef_id=xoFOglw2s UMAAMU8:20140228185720:s
מלקחיים עדיניםכלי מדע עדין11254-20מספר גודל 5
http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=350&CategoryId=29
Curette כלים מדעיים עדינים10080-05גודל 1 מ"מ 
http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=91&CategoryId=118
סיכות חרקיםכלי מדע עדינים26001-35חייבים להיות נירוסטה
http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=124
50 מ"מ כלי פלסטיקקורנינג / פלקון351006מותגים מרובים מייצרים
פחםזה סיגמא אולדריץ'05105-250Gמספר מותגים מייצרים פריטים דומים
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/fluka/05105?lang=en®ion=CA
184 אלסטומר סיליקוןDow/Corning SYLGARD® ערכת אלסטומר סיליקון 184המנות מתוצרת בית מספר שבועות מראש.  אלסטומר סיליקון יכול להיות מכל ספק.http://www.dowcorning.com/applications/search/products/Details.aspx?prod=01064291
תחתית מזכוכיתMatTekP35G-0-10-Cמידות המנה נקבעות על פי המפרט של מערכת ההדמיה.  קוטר 35 מ"מ, 10 מ"מ היטב, כיסוי מספר 0 מתאים לאולימפוס Vivaview FL.
http://glass-bottom-dishes.com/catalog/index.php?main_page=product_info&cPath= 1_4_15& products_id=2
סטריאומיקרוסקופZeiss 495101-9804-000  דגם סטמי 2000. מותגים מרובים מייצרים פריטים דומים
http://microscopy.zeiss.com/microscopy/en_de/products/stereo-zoom-microscopes/stemi-2000.html
מקור אור קרZeiss000000-1063-182מותגים מרובים מייצרים פריטים דומים
http://microscopy.zeiss.com/microscopy/en_de/products/microscope-components/lightsources.html
סטריאומיקרוסקופ פלואורסצנטי מיקרו-מערכות Leicaצור קשר עם Leica microsystems LeicaM165-FC. מותגים רבים מייצרים פריטים דומים
http://www.leica-microsystems.com/products/stereo-microscopes-macroscopes/fluorescence/details/product/leica-m165-fc/
Incubator מיקרוסקופ + תוכנת הדמיהאולימפוסצור קשר עם אולימפוסמיקרוקופה הפוכה אטומה בתוך חממת CO2. מיקרוסקופ חממה Vivaview FL עם תוכנת הדמיה Metamorpoh.
http://olympuscanada.com/seg_section/product.asp?product=1055&c=0
ספסל נקיThermo Scientific51029701מותגים מרובים מייצרים פריטים דומים
http://www.thermoscientific.com/en/product/heraguard-eco-clean-bench.html
חממת CO2Thermo Scientific3310מותגים מרובים מייצרים פריטים דומים
http://www.thermoscientific.com/en/products/co2-incubators.html
קולט אדים Laminar FlowThermo Scientific51026651מותגים מרובים מייצרים פריטים דומים
http://www.thermoscientific.com/en/products/biological-safety-cabinets-clean-benches.html
כלי

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wu, D. K., Kelley, M. W. Molecular mechanisms of inner ear development. Cold Spring Harbor perspectives in biology. 4, (2012).
  2. Shim, K. The auditory sensory epithelium: the instrument of sound perception. The international journal of biochemistry & cell biology. 38, 1827-1833 (2006).
  3. Van de Water, T., Ruben, R. J. Growth of the inner ear in organ culture. The Annals of otology, rhinology, and laryngology. 83, 1-16 (1974).
  4. Jacques, B. E., et al. A dual function for canonical Wnt/beta-catenin signaling in the developing mammalian cochlea. Development. 139, 4395-4404 (2012).
  5. Castellano-Munoz, M., Peng, A. W., Salles, F. T., Ricci, A. J. Swept field laser confocal microscopy for enhanced spatial and temporal resolution in live-cell imaging. Microscopy and microanalysis : the official journal of Microscopy. Society of America, Microbeam Analysis Society, Microscopical Society of Canada. 18, 753-760 (2012).
  6. Szarama, K. B., Gavara, N., Petralia, R. S., Chadwick, R. S., Kelley, M. W. Thyroid hormone increases fibroblast growth factor receptor expression and disrupts cell mechanics in the developing organ of corti. BMC developmental biology. 13, 6(2013).
  7. Appler, J. M., et al. Gata3 is a critical regulator of cochlear wiring. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 33, 3679-3691 (2013).
  8. Wibowo, I., Pinto-Teixeira, F., Satou, C., Higashijima, S., Lopez-Schier, H. Compartmentalized Notch signaling sustains epithelial mirror symmetry. Development. 138, 1143-1152 (2011).
  9. Hashimoto, S., Kato, N., Saeki, K., Morimoto, Y. Selection of high-potential embryos by culture in poly(dimethylsiloxane) microwells and time-lapse imaging. Fertility and sterility. 97, 332-337 (2012).
  10. Matsuoka, F., et al. Morphology-based prediction of osteogenic differentiation potential of human mesenchymal stem cells. PloS one. 8, (2013).
  11. Ma, G. F., et al. et al.Transforming growth factor-beta1 and -beta2 in gastric precancer and cancer and roles in tumor-cell interactions with peripheral blood mononuclear cells in vitro. PloS one. 8, (2013).
  12. Taranova, O. V., et al. SOX2 is a dose-dependent regulator of retinal neural progenitor competence. Genes & development. 20, 1187-1202 (2006).
  13. Chen, P., Segil, N. p27(Kip1) links cell proliferation to morphogenesis in the developing organ of Corti. Development. , 1581-1590 (1999).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Cochlear Explant13Sox2

מאמרים קשורים