מאמר שיטה

רזולוציה גבוהה מיקרוסקופית אלקטרונים של הליקובקטר פילורי CAG Pili סוג IV הפרשת המערכת הופק במשתנים תנאים של זמינות הברזל

DOI:

10.3791/52122

⸱

21 בנובמבר 2014

 ,  , 
1Department of Medicine - Division of Infectious Diseases, Vanderbilt University School of Medicine, 2Tennessee Valley Healthcare Systems, U. S. Dept. of Veterans Affairs

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו מתארים שיטה להמחשת אברון החיידקים האונקוגני המכונה מערכת הפרשת Cag Type IV (Cag-T4SS). אנו מוצאים כי ה-Cag-T4SS מיוצר באופן דיפרנציאלי על פני השטח של הליקובקטר פילורי בתגובה לתנאים משתנים של זמינות ברזל.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הליקובקטר פילורי הוא חיידק בצורת סליל, גרם שלילי, המתיישב בגומחת הקיבה האנושית של מחצית מהאוכלוסייה האנושית1,2. הליקובקטר פילורי הוא הגורם העיקרי לסרטן הקיבה, הגורם השני המוביל למקרי מוות הקשורים לסרטן ברחבי העולם3. גורם אלימות אחד שנקשר לסיכון מוגבר למחלות קיבה הוא אי ה-Cag-פתוגניות, אזור של 40 קילו-בייט בתוך הכרומוזום של הליקובקטר פילורי המקודד מערכת הפרשה מסוג IV ומולקולת האפקטור הקוגנטית, CagA4,5. ה-Cag-T4SS אחראי על העברת CagA ופפטידוגליקן לתאי אפיתל מארח5,6. הפעילות של Cag-T4SS מביאה לשינויים רבים בביולוגיה של התא המארח, כולל ויסות מוגבר של ביטוי ציטוקינים, הפעלת מסלולים פרו-דלקתיים, שיפוץ שלד הציטו ואינדוקציה של רשתות איתות תאים אונקוגניות5-8. ה-Cag-T4SS היא מכונה מקרו-מולקולרית המורכבת מרכיבי תת-הרכבה המשתרעים על פני הממברנה הפנימית והחיצונית ומשתרעים החוצה מהתא לחלל החוץ-תאי. החלק החוץ-תאי של ה-Cag-T4SS מכונה "פילוס"5. מחקרים רבים הוכיחו כי ה-Cag-T4SS pili נוצרים בממשק המארח-פתוגן9,10. עם זאת, המאפיינים הסביבתיים המווסתים את הביוגנזה של אברון חשוב זה נותרו מעורפלים במידה רבה. לאחרונה דיווחנו כי תנאים של זמינות ברזל נמוכה הגבירו את פעילות ה-Cag-T4SS ואת הביוגנזה של פילוס. כאן אנו מציגים פרוטוקול אופטימלי לגידול הליקובקטר פילורי בתנאים משתנים של זמינות ברזל לפני תרבית משותפת עם תאי אפיתל קיבה אנושיים. יתר על כן, אנו מציגים את הפרוטוקול המקיף להדמיה של הפנוטיפ ההיפר-פילי המוצג בתנאים מוגבלים בברזל על ידי ניתוחי מיקרוסקופ אלקטרונים סורקים ברזולוציה גבוהה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זיהום הליקובקטר פילורי הוא גורם סיכון משמעותי לסרטן הקיבה1. עם זאת, תוצאות המחלה משתנות ותלויות בגורמים רבים כגון גנטיקה של המארח, המגוון הגנטי של זני הליקובקטר פילורי ואלמנטים סביבתיים כגון תזונת המארח11. דיווחים קודמים קבעו כי קיים מתאם בין זיהום בהליקובקטר פילורי, מחסור בברזל (כפי שנמדד על ידי ירידה בריכוזי פריטין והמוגלובין בדם), וייצור מוגבר של ציטוקינים פרו-דלקתיים, כולל הפרשת IL-8, מה שמוביל בסופו של דבר להתקדמות מוגברת של מחלת קיבה12. זיהום חריף בהליקובקטר פילורי קשור גם להיפוכלורהידריה, הפוגעת ביכולתו של המארח לספוג ברזל מזין, ובסופו של דבר מובילה לשינויים בהומאוסטזיס ברזל13. ממצאים קליניים אלה מצביעים על כך שזמינות ברזל בנישת הקיבה יכולה להיות גורם חשוב בתוצאות המחלה. למעשה, מודלים של בעלי חיים של זיהום בהליקובקטר פילורי הראו שצריכת ברזל נמוכה בתזונה מחמירה את מחלת הקיבה14. רמות הברזל המופחתות בבעלי חיים אלה מחייבות את הליקובקטר פילורי לגרום לתגובת רכישת ברזל על מנת להשיג את הברזל הדרוש לשכפול חיידקים. להליקובקטר פילורי יש את היכולת להפריע לסחר בברזל בתוך תאי המארח כדי להקל על שכפול חיידקים באופן תלוי CagA15. מעניין לציין כי הוכח כי אי הפתוגניות של ה-cag מווסת על ידי גורם השעתוק המגיב לברזל Fur16,17. יתר על כן, זני Cag+ קשורים לדלקת מוגברת ומחלות קיבה כגון סרטן1. ממצאים אלה תומכים במודל לפיו הליקובקטר פילורי משנה את ביטוי Cag-T4SS במאמץ להשיג ברזל מתאי מארח השוכנים בסביבה מדולדלת ברזל וכתוצאה מכך תוצאות מחמירות של המחלה.

שני גורמים המגבירים את הדלקת והתחלואה הם ביטוי Cag וצריכת ברזל נמוכה בתזונה. עובדות אלה תומכות בהשערה שזמינות ברזל מופחתת מגבירה את הייצור של Cag-T4SS pili בממשק הפתוגן המארח וכתוצאה מכך מחלת קיבה גרועה יותר11-14. מטרת השיטה המסופקת בכתב יד זה היא לבסס את תפקידו של הברזל המיקרו-נוטריינט בוויסות הביוגנזה של Cag-T4SS pilus. בעבודה קודמת, השתמשנו בשתי גישות כדי לצפות בעלייה תלוית ברזל בביטוי Cag-T4SS. ראשית, נותחו זני תפוקה מבעלי חיים שנשמרו על תזונה עשירה ודלה בברזל וגילו כי זני תפוקת דיאטה דלת ברזל ייצרו יותר Cag-T4SS pili מאשר זני תזונה עתירי ברזל14. שנית, גידול זן הליקובקטר פילורי 7.13 במבחנה בתנאים מלאים בברזל הביא להפחתת היווצרות הפילי בעוד שתאים שגדלו בנוכחות כלאטור ברזל ייצרו הרבה יותר פילי.

המשכנו לחקור את הוויסות התלוי בברזל של פנוטיפ פילי Cag-T4SS ומציעים את הפרוטוקול האופטימלי הבא ואת התוצאות המייצגות שבוצעו עם זן הליקובקטר פילורי נוסף, PMSS1. הרציונל מאחורי פיתוח טכניקה זו היה לתאם פעילות מוגברת של Cag-T4SS בתנאים של הגבלת ברזל עם היווצרות מוגברת של Cag-T4SS pilus. ההשלכה הרחבה יותר והשימוש בטכניקה זו יספקו תנאי תרבית אופטימליים המביאים לייצור מוגבר של ה-Cag-T4SS pili. בדיקה זו תהיה שימושית לחוקרים המבקשים לקבוע את ההרכב והארכיטקטורה של ה-Cag-T4SS על ידי העשרה עבור תכונת משטח חיידקית חשובה זו. להכנת הדגימה וההדמיה על ידי מיקרוסקופ אלקטרונים של אקדח פליטת שדה יש יתרונות רבים על פני טכניקות חלופיות כגון שיטות מיקרוסקופ אור להדמיית ה-Cag-T4SS ויתאימו לחוקרים המעוניינים לחקור את הוויסות של אברון10 זה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. ח פילורי צמיחה בתנאים שונים של זמינות ברזל ושיתוף תרבות עם תאים אנושי הקיבה אפיתל

  1. בחר ה ' PMSS1 פילורי מתח למחקרים אלה כי יש לו אי פתוגניות CAG שלם ומבטא את מערכת הפרשה מסוג IV תפקוד. גם לנצל מוטציה כלוב isogenic (PMSSI Δ קייג ') כביקורת שלילית. לגדול חיידקים על צלחות TSA בתוספת 5% דם כבשים (צלחות אגר דם) למשך 24 שעות על 37 מעלות צלזיוס בנוכחות של 5% CO 2.
    הערה: הכן חומרים כימיים ולהרכיב חומרים כפי שמתואר בטבלת חומרים וציוד. ריכוזים סופיים לכל מגיב רשום בסוגריים.
  2. לגרד חיידקים מהצלחת באמצעות המוליך כותנה שקצה סטרילי ולחסן לתוך מרק ברוצלה שונה שהוכן ממרכיבים (ראה חומרים וציוד בלוח) והשלים עם כולסטרול. דגירה תרבויות הלילה בשעה 37° C באוויר חדר בתוספת 5% CO 2 עם רועד ב200 סיבובים לדקה (סל"ד).
    הערה: כולסטרול משמש במקום של סרום שור עוברי בשל העובדה שהסרום הוא מורכב; המכיל מספר רב של מקורות ברזל תזונתי כגון heme הגורם לשונות בתוצאות.
  3. ביום culturing חיידקים, זרע תאי האפיתל של הקיבה אנושי AGS (ATCC CRL-1739) על coverslips טופל poly-D- ליזין ב12 גם צלחות (כ 1 x 10 5 תאים לכל טוב).
  4. למחרת, לדלל תרבויות חיידקים לOD600 של 0.3 במרק ברוצלה שונה לבד או בתוספת 100 מיקרומטר FeCl 3, dipyridyl 200 מיקרומטר (chelator ברזל סינטטי), או 200 dipyridyl מיקרומטר בתוספת 250 מיקרומטר FeCl 3. דגירה תרבויות אלה במשך 4 שעות על 37 מעלות צלזיוס באוויר חדר בתוספת 5% CO 2 עם הרועד בסל"ד 200.
  5. חיידקי צנטריפוגה XG ב 1000 לאיסוף תאים ולהסיר supernatants לפני resuspending אניn נפח שווה של מרק ברוצלה שונה טרי בתוספת כולסטרול. מדד OD600 של התרבות (OD600 = 1.0 = 5.5 x 10 8 תאים / מיליליטר) ולהוסיף חיידקים לתאי האפיתל בריבוי של זיהום (משרד הפנים) של 20: 1. לבצע דילולים סידוריים ותאי חיידקיים צלחת על גבי צלחות אגר דם כדי להעריך את כדאיות תא חיידק.
  6. דגירה H. שיתוף תרבויות תאי האפיתל של הקיבה אנושי פילורי וAGS במשך 4 שעות על 37 מעלות צלזיוס בנוכחות של 5% CO 2 בתנאים סטטיים לפני הביצוע במיקרוסקופ אלקטרונים סורק הכנת מדגם (SEM).

2. SEM לדוגמא הכנה לדמיין H. פילורי CAG-T4SS פילי

  1. הסר H. פילורי ושיתוף תרבויות AGS מsupernatant תרבות חממה ולמזוג (למעט IL-8 ELISA). לשטוף בעדינות שלוש פעמים עם 0.05 חיץ M נתרן cacodylate (pH 7.4). תקן את הדגימות ל2-4 שעות בטמפרטורת חדר בתמיסה של paraformaldehyde 2.0%, 2.5gluteraldehyde%, וחיץ cacodylate 0.05 M נתרן. לאחר קיבוע ראשוני, לשטוף דגימות שלוש פעמים עם חיץ cacodylate 0.05 M נתרן.
  2. בצע קיבעון המשני באמצעות 0.1% tetroxide אוסמיום ב0.05 חיץ cacodylate M נתרן בשני 10 ברצף צעדי קיבעון דקות. לאחר קיבוע המשני, לשטוף דגימות שלוש פעמים עם חיץ cacodylate 0.05 M נתרן.
  3. לאחר קיבוע ראשוני והמשני, ליבש דגימות על ידי שטיפה רציפה עם ריכוזים גוברים של אתנול לפי טבלת 1.
  4. לאחר התייבשות אתנול, לבצע שלושה שוטף רציף של נוזל פחמן דו חמצני. דגימות ואז יבשות בנקודה קריטית באמצעות מכונה מייבש נקודה קריטית בטמפרטורה של 31.1 ºC ולחץ של 1073 PSI.
  5. הר coverslips על ספחי מדגם האלומיניום SEM ולצייר עם קו דק של מי כסף בקצה המדגם כדי להשיג הארקה מתאימה ולהימנע מלחייב במהלך ההדמיה SEM.
  6. דגימות מעיל עם 5 ננומטר שלזהב-פלדיום באמצעות מכונה מעיל גמגום להגדיל מדגם אותות משני אלקטרונים ואפקט קצה.

3. פרמטרי הדמיה לניתוחים ברזולוציה הגבוה SEM

  1. צפה בדוגמאות עם אקדח מיקרוסקופ סורק אלקטרוני פליטת שדה (FEG-SEM).
  2. תמונה במצב ואקום גבוה במרחק עבודה של 5-10 מ"מ.
  3. הגדר את המתח המאיץ עד 5 קילו וולט.
  4. הגדר את גודל מקום ל2-2.5.
  5. הטה את המדגם בין 15-25 מעלות כדי להשיג ראייה טובה יותר של ממשק המאכסן לפתוגן.
  6. לתעדף הדמיה חיידקים חסיד לקצוות של תאי האפיתל לצפייה הגדלה גבוהה, כתחומים של אינטראקציה המאכסן לפתוגן אלה מועשרים לחיידקים יוצרי פילים.

4. ניתוח סטטיסטי כדי להעריך את הפילים Quantifications

  1. לנתח H. פילי CAG-T4SS פילורי באמצעות תוכנת ImageJ לכמת מספר פילים / תא, כמו גם אחוז של תאים המציגים piliated Phenotype בהתאם להנחיות למטה.
  2. קבצי מיקרוסקופ פתוחים בתוכנת ImageJ. לזהות פילים כמבנים שנוצרו בין תא החיידק והתא מארח, עם רוחב אחיד (10-13 ננומטר) ואורך (60-150 ננומטר).
    הערה: מבנה pilus קיים בזני חיידקי WT, אבל נעדרו בזני isogenic כגון זנים מוטנטים כלוב Δ, שנמל איון בגן המקודד את ATPase המרכזי שהרכבת pilus הפרשת IV סוג סמכויות.
  3. כייל את כלי המדידה על ידי ציור קו עם כלי הקו הישר ולאחר מכן לחיצה על הכרטיסייה "נתח". בחר "סולם הגדר" מהתפריט הנפתח והזן את הערך בר הגדלה לתוך התיבה "מרחק ידוע" שכותרתו ולהגדיר את יחידת האורך להגדרה המתאימה (ננומטר). לחץ על "אישור".
  4. למדוד פילי CAG-T4SS שימוש באפשרות הקו הישר לצייר על האורך או הרוחב של pilus ולאחר מכן לחץ על "Ctrl-M" למדוד כל pilus. שים לב תיבה דו-שיח עם הערכים שנמדדו. רשום את הערכים הללו או להעתיק ולהדביק לתוך תכנית גיליון אלקטרוני.
  5. השתמש באורך ורוחב פרמטרים שנקבעו בעבר 24 תכונות התעלמות, שאינו מתאימות לפרופיל של CAG-T4SS. ואז לכמת את מספר הפילים המבוססים על ערכים הנמצאים בהפסקות 10-13 ננומטר רוחב ו60-150 ננומטר אורך.
  6. נתח את הכימות של פילים סטטיסטיים על ידי מבחן t של סטודנט שני זנב באמצעות תוכנת GraphPad פריזמה.

5. אופציונלית: הערכה של IL-8 ההפרשה במיתאם עם Pilus הפקה

  1. באמצעות supernatants משלב 2.1, לבצע ELISA IL-8 לפי הוראות יצרן עם הערכה (ראה חומרים וציוד בלוח).
  2. נתח את IL-8 מופרש על ידי תאי מארח ולחשב את האינדוקציה IL-8 אחוזים ביחס לWT PMSS1 גדלו במדיום לבד. ביצוע ניתוחים סטטיסטיים באמצעות מבחן t של סטודנט שני זנב באמצעות GraphPad פריזמה כךftware.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בדוח זה, אנחנו הוכחנו כי יש להם תנאים משתנים זמינות ברזל היכולת לווסת את ה biogenesis pilus פילורי CAG-T4SS בממשק שהפתוגן המארח. כאשר בתרבית בינונית בלבד, ח ' פילורי מהווה ממוצע של 3 פילים / תא. כאשר ה ' פילורי הוא גדל בברזל לרוקן את תנאים (באמצעות dipyridyl chelator הסינתטי), כי הם תת-מעכבים להתפתחות חיידקים (איור 1), החיידקים לייצר CAG-T4SS רב פילים (~ 7 פילים / תא) כאשר שיתוף תרבותי עם תאי קיבה אנושיים (איור 2).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ברזל הוא יסודות קורט חיוני עבור רוב צורות חיים, כוללים חיידקים פתוגנים. במאמץ להגביל את יכולת הקיום של פלישת מיקרואורגניזמים, מארחי חוליות לעקל ברזל מזין בתהליך המכונה "חסינות תזונתית" 18. בתגובה לכך, חיידקים פתוגנים התפתחו להשתמש בברזל כמולקולת איתות גלובלית לחוש את סביבתם ולהסדיר את הפיתוח של תכונות ארסיות כגון מערכות רכישת ברזל, רעלים, ומכונות הפרשת רעלן 19,20.

הליקובקטר פיל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך על ידי פרס פיתוח הקריירה של המחלקה לענייני חיילים משוחררים 1IK2BX001701 ופרס CTSA UL1TR000445 מהמרכז הלאומי לקידום מדעי התרגום. תוכנו הוא באחריות המחברים בלבד ואינו מייצג בהכרח את העמדות הרשמיות של המרכז הלאומי לקידום מדעי התרגום או המכונים הלאומיים לבריאות. ניסויי מיקרוסקופ אלקטרונים סורק בוצעו בחלקם באמצעות המשאב המשותף להדמיית תאים VUMC, הנתמך על ידי מענקי NIH CA68485, DK20593, DK58404, DK59637 ו-EY08126.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ברוצלה מעובד
פפטון מקזאין (10 גרם/ליטר)סיגמא70172
עיכול פפטי של רקמות בעלי חיים (10 גרם/ליטר)סיגמא70174
(2 גרם/ליטר)סיגמא92144
דקסטרוז (1 גרם/ליטר)סיגמאD9434
נתרן כלורי (5 גרם/ליטר)תרמו פישרS271-10
כולסטרול (250X) (4 מ"ל/ליטר)Life Technologies12531018
ברזל כלוריד (100 או 250 uM)סיגמא157740-100G
דיפירידיל (200 uM)סיגמאD216305-100G
RPMI
RPMI+HEPES (1X)Life Technologies22400-121
סרום בקר עוברי ( 100 מ"ל/ליטר)Life Technologies10438-026
הכנת
פרפורמלדהיד (2.0% מימי)מדעי מיקרוסקופיית אלקטרונים15713
גלוטרלדהיד (2.5% מימי)מדעי מיקרוסקופיית אלקטרונים16220
נתרן קקודילאט (0.05 מ')מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית12300
אוסמיום טטרוקסיד (0.1% מימי)מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית19150
אתנול (אבסולוטי)SigmaE7023
צבע כסף קולואידימדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית12630
SEM דגימת דגימהמדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית75220
CoverslipsThermo Fisher08-774-383
IL-8 הערכת
קוונטיקין IL-8 ELISA ערכתמו"פ D מערכותD8000C
ציר תמצית שמרים שונהמיקרוסקופ אלקטרוניםהפרשה

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cover, T. L., Blaser, M. J. Helicobacter pylori in health and disease. Gastroenterology. (6), 1863-1873 (2009).
  2. Sycuro, L. K., et al. Peptidoglycan crosslinking relaxation promotes Helicobacter pylori's helical shape and stomach colonization. Cell. 141 (5), 822-833 (2010).
  3. Kodaman, N., et al. Human and Helicobacter pylori coevolution shapes the risk of gastric disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (4), 1455-1460 (2014).
  4. Tegtmeyer, N., Wessler, S., Backert, S. Role of the cag-pathogenicity island encoded type IV secretion system in Helicobacter pylori pathogenesis. FEBS J. 278 (8), 1190-1202 (2011).
  5. Fischer, W. Assembly and molecular mode of action of the Helicobacter pylori Cag type IV secretion apparatus. FEBS J. 278 (8), 1203-1212 (2011).
  6. Odenbreit, S., Puls, J., Sedlmaier, B., Gerland, E., Fischer, W., Haas, R. Translocation of Helicobacter pylori CagA into gastric epithelial cells by type IV secretion. Science. 287 (5457), 1497-1500 (2000).
  7. Bourzac, K., Guillemin, K. Helicobacter pylori-host cell interactions mediated by type IV secretion. Cell Microbiol. 7 (7), 911-919 (2005).
  8. Bronte-Tinkew, D. M., et al. Helicobacter pylori cytoxin-associated gene A activates the signal transducer and activator of transcription 3 pathway in vitro and in vivo. Cancer Res. 69 (2), 632-639 (2009).
  9. Johnson, E. M., Gaddy, J. A., Cover, T. L. Alterations in Helicobacter pylori triggered by contact with gastric epithelial cells. Front. Cell. Infect. Microbiol. (2), 17(2012).
  10. Rohde, M., Puls, J., Buhrdorf, R., Fischer, W., Haas, R. A novel sheathed surface organelle of the Helicobacter pylori cag type IV secretion system. Mol. Microbiol. 49 (1), 219-234 (2003).
  11. Cover, T. L., Peek, R. M. Jr Diet, microbial virulence and Helicobacter pylori induced gastric cancer. Gut Microbes. 4 (6), 482-493 (2013).
  12. Queiroz, D. M., et al. Increased gastric IL-1β concentration and iron deficiency parameters in Helicobacter pylori infected children. PLoS One. 8 (2), 57420(2013).
  13. Harris, P. R., et al. Helicobacter pylori-associated hypochlorhydria and development of iron deficiency. J. Clin. Pathol. 66 (4), 343-347 (2013).
  14. Noto, J. M., et al. Iron deficiency accelerates Helicobacter pylori-induced carcinogenesis in rodents and humans. J. Clin. Invest. 123 (1), 479-492 (2013).
  15. Tan, S., Noto, J. M., Romero-Gallo, J., Peek, R. M. Jr, Amieva, M. R. Helicobacter pylori perturbs iron trafficking in the epithelium to grow on the cell surface. PLoS Pathog. 7 (5), (2011).
  16. Danielli, A., Roncarati, D., Delany, I., Chiarini, V., Rappouli, R., Scarlato, V. In vivo dissection of the Helicobacter pylori Fur regulatory circuit by genome-wide location analysis. J. Bacteriol. 188 (13), 4654-4662 (2006).
  17. Pich, O. Q., Carpenter, B. M., Gilbreath, J. J., Merrell, D. S. Detailed analysis of Helicobacter pylori Fur-regulated promoters reveals a Fur box core sequence and novel Fur-regulated genes. Mol. Microbiol. 84 (5), 921-941 (2012).
  18. Cassat, J. E., Skaar, E. P. Iron in infection and immunity. Cell Host Microbe. 13 (5), 509-519 (2013).
  19. Nielubowicz, G. R., Mobley, H. L. Host-pathogen interactions in urinary tract infection. Nat. Rev. Urol. 7 (8), 430-441 (2010).
  20. Brickman, T. J., Cummings, C. A., Liew, S. Y., Relman, D. A., Armstrong, S. K. Transcriptional profiling of the iron starvation response in Bordatella pertussis provides new insights into siderophore utilization and virulence gene expression. J. Bacteriol. 193 (18), 4798-4812 (2011).
  21. Mobley, H. L. Helicobacter pylori factors associated with disease development. Gastroenterology. 113 (6), 21-28 (1997).
  22. Testerman, T. L., Conn, P. B., Mobley, H. L., McGee, D. L. Nutritional requirements and antibiotic resistance patterns of Helicobacter species in chemically defined. J. Clin. Microbiol. 44 (5), 1650-1658 (2006).
  23. Senkovich, O., Ceaser, S., McGee, D. J., Testerman, T. L. Unique host iron utilization mechanisms of Helicobacter pylori revealed with iron-deficient chemically defined media. Infect. Immun. 78 (5), 1841-1849 (2010).
  24. Shaffer, C. L., et al. Helicobacter pylori exploits a unique repertoire of type IV secretion system components for pilus assembly at the bacteria-host cell interface. PLoS Pathog. 7 (9), (2011).
  25. Barrozo, R. M., et al. Functional plasticity in the type IV secretion system of Helicobacter pylori. PLoS Pathog. 9 (2), (2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים