מותאם באופן מיטבי Ex-אובו Culturing של Chick עוברים לשלבים מתקדמים של פיתוח

סיכום

צפייה וגישה לעובר התרנגולת במהלך ההתפתחות יכולה להיות מאתגרת. פיתחנו שיטת ex ovo שהיא פשוטה, חסכונית וניתן להשתמש בה בקלות בכיתה או במסגרת מחקר. שיטה זו מספקת גישה לעובר בשלבים מאוחרים של התפתחות עוברית (HH 40).

תקציר

מחקר באנטומיה, אמבריולוגיה וביולוגיה התפתחותית הסתמך במידה רבה על שימוש באורגניזמים מודלים. על מנת לחקור התפתחות בעוברים חיים משתמשים לעתים קרובות באורגניזמים מודלים, כמו התרנגולת. התרנגולת היא אורגניזם מודל מצוין בשל עלותה הנמוכה ותחזוקה מינימלית, אולם הם מציבים אתגרי תצפית מכיוון שהם סגורים בקליפת ביצה אטומה. על מנת לראות כראוי את העובר תוך כדי התפתחותו, יש לחלון או להסיר את הקליפה. הן טכניקות החלונות והן טכניקות ex ovo פותחו כדי לסייע לחוקרים בחקר ההתפתחות העוברית. עם זאת, לכל אחת מהשיטות יש מגבלות ואתגרים. כאן, אנו מציגים טכניקה פשוטה ואופטימלית של תרבית ביצית לעוברי תרנגולות המאפשרת התבוננות בהתפתחות עוברית משלב HH 19 ועד לשלבי התפתחות מאוחרים (HH 40), כאשר איברים רבים התפתחו. קל לאמץ טכניקה זו הן בכיתות לתואר ראשון והן במעבדות מחקר מתקדמות יותר בהן מתבצעות מניפולציות עוברים.

מבוא

תרבית אקס אובו מילאה תפקיד חשוב בחקר התפתחות התרנגולת^{1, 2}. שיטת תרבות זו שימשה לחקר מחלות נוירולוגיות, התפתחות גפיים, התפתחות גולגולת, וכמודל לחקירת מומים הקשורים לסוכרת ^{3, 4, 5}.

ישנן וריאציות רבות לטכניקת ex ovo. הגישה הנפוצה ביותר היא להשתמש בכוס קלקר^6,7,8 או בקערת זכוכית⁵. בשיטות אלה, הכוס או הקערה מרופדת בניילון נצמד כדי לערסל את העובר, מניחים מכסה על הכוס, ולאחר מכן מניחים את העובר באינקובטור עם לחות מתאימה⁶. עם זאת, הגדרה זו יכולה להיות מאתגרת מבחינה טכנית. האתגר הראשון הוא הניילון הנצמד המשמש לעריסת העובר. עטיפה זו קשה לעבודה ולעתים קרובות אינה נדבקת לגביעונית ה....

פרוטוקול

הערה: כל הציוד מפורטים בטבלה 1.

1. אחסון עוברי העופות

1. דגירה ביצי תרנגולת של זן גאלוס גאלוס אופקי על 37 ^מעלות צלסיוס ולחות כ -40% ולהפוך ביצי פעם או פעמיים ביום. הפיכת ביצים היא חשובה כדי למנוע את העובר מהקפדה על קליפת הביצה.
2. לא להפוך את הביצה בשעה 24 לפני הקמת התרבות אחרת העובר יהיה ממוקם הגחון למסת החלמון ויהיה פגום על פתיחת הביצה בשלב 3. בנוסף, לשמור על הביצים ב 4 ^o C מעלות ללא יותר משבוע ....

תוצאות

לשעבר זה אוב השיטה מאפשר התצפית של עוברים משלבים המוקדמים של פיתוח (HH 19/20) לשלבים המאוחרים של התפתחות (HH 40-41) (איור 1 א ו -1 B). הגדרת התרבות בHH 19-20 מגדילה שרידות של העוברים בתרבות. לפני ראש הפיכה (לפני 53 hpf) שרידות נמוכות מאוד בתרבות ובאחרי שלב 21, העובר נוטה להיצמד יותר למעטפת בהסרה כל כך עוברים שלמים פחות מתקבלים. באופן כללי, שרידות של העובר באובו לשעבר התרבות היא גבוהות עד HH 35-36 (90-100%), אך היא עושה ט.......

דיון

Ex אוב culturing וחלונאית לשניהם יש יתרונות ואתגרים. כאן אנו משווים את היתרונות והאתגרים של האקס קלקר כוס אוב השיטה ושיטת חלונאית לשעבר המותאם אוב השיטה שמוצגת כאן. השיטה שלנו מאפשרת מניפולציה והתבוננות קלה של עובר אפרוח בשלבים מאוחרים של התפתחות והחידודים שלנו לשעבר המסורתיים אוב השיטה ^{1, 2, 3} לעשות את זה גם מאוד קל לשימוש בשיעורי מעבדה הוראה לתואר ראשון.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
פניצילין/סטרפטומיצין	סיגמא	P4458	הכינו מנות קטנות כדי למנוע אירועי הקפאה/הפשרה
		פטרי מרובעת	9.5 ס"מ x 9.5 ס"מ
שקילה סירה	פישר 8732113 מדעי		88 x 88 x 23 מ"מ
מיכל זיפלוק		זיפלוק מס'	12 ס"מ x 12 ס"מ x 6 ס"מ

צלחת