לוקליזציה, זיהוי, וכריתה של בסיס מיון Murine שומן

סיכום

בשל קשר דרסטי והשלילי בין השמנת יתר ומחלות רקע אחרים, מחקר על תפקיד השומן משחק במחלה ועל בריאות כללית היא מוצדקת. אנו מציגים פרוטוקול לבידוד והכריתה של מחסני שומן ומאפשרים לחקר השומן באמצעות באתר ובשיטות חוץ גופית.

תקציר

השמנת יתר עלתה באופן דרמטי בעשורים האחרונים ומשפיעה על יותר משליש מהאוכלוסייה הבוגרת בארה"ב. ההשפעה הכלכלית של השמנת יתר בשנת 2005 הגיעה לסכום מדהים של 190.2 מיליארד דולר בעלויות רפואיות ישירות בלבד. השמנת יתר היא גורם סיכון מרכזי לשורה רחבה של מחלות. מבחינה היסטורית, מעט היה ידוע על השומן ותפקידיו העיקריים והחיוניים בגוף. שומן חום ולבן הם שני הסוגים העיקריים של שומן, אך הספרות הנוכחית זיהתה סוג חדש של שומן הנקרא שומן בריט או בז'. מחקרים הראו כי למחסני שומן יש פרופילים מטבוליים ספציפיים ומחסנים מסוימים מאפשרים נטייה להשמנת יתר והפרעות קשורות אחרות. מטרת פרוטוקול זה היא לספק לחוקרים את היכולת לזהות ולכרות מצבורי שומן שיאפשרו ניתוח של השפעות פקטוריאליות שונות על שומן; כמו גם התפקיד המועיל או המזיק של השומן במחלות ובבריאות הכללית. בידוד וכריתת מצבורי שומן מאפשרים לחוקרים להסתכל על שינויים מורפולוגיים גסים כמו גם שינויים היסטולוגיים. השומן המבודד יכול לשמש גם למחקרים מולקולריים להערכת שינוי שעתוק ותרגום או לניסויים במבחנה לגילוי מטרות מעניינות ומנגנוני פעולה. טכניקה זו עדיפה על טכניקות אחרות שפורסמו בשל התכנון המאפשר בידוד של מספר מחסנים בפשטות ובזיהום מינימלי.

מבוא

שומן היה חלש בולטת באור זרקורי התקשורת, כתוצאה מהעלייה הדרמטית של השמנת יתר במהלך העשורים האחרונים של המאה ה -20. השמנה כיום משפיעה על יותר משליש ממבוגרים ו -17% מילדים ובני הנוער בארצות הברית (ארה"ב) ^1. פורש את כל הקבוצות האתניות, מחקר סטטיסטי המקיף את מגיפת ההשמנה הראה שיש לי שחורים שאינו היספנים השיעור מותאם לגיל הגבוה ביותר של השמנת יתר (49.5%) בהשוואה לאמריקאים מקסיקניים (40.4%), כלל ההיספאנים (39.1%), ואי לבנים היספני (34.3%) ^2. ההשפעה הכלכלית של השמנת יתר היא גם דאגה גוברת למערכת הבריאות. בשנת 2012, הוערך כי העלות השנתית של טיפול הרפואית לטיפול בהשמנה בארה"ב בשנת 2005 הייתה $ 190,200,000,000, כמעט 2....

פרוטוקול

הערה: כל הנהלים בבעלי החיים בוצעו באישור הוועדה המוסדי הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) מאוניברסיטת סינסינטי ובהתאם למדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה מהמכון הלאומי לבריאות (NIH פרסום מס . 85-23, מתוקן 1996).

1. להרדים ולעקר את העכבר

1. מניחים את העכבר בdropbox המכיל מינון supratheraputic של isoflurane ולאפשר לשאוף להשפעה. לאחר העכבר הוא מורדמים, להסיר מהתיבה.
2. Cervically לנקוע כאמצעי שני של המתת חסד.

תוצאות

זיהוי, ולוקליזציה של שומן תת-עורי מפשעתי, שומן חום interscapular, שומן קרביים epididymal (איור 1), כמו גם את שומן קשת אב העורקים perivascular, שומן אב העורקים החזי, שומן אב העורקים suprarenal ושומן אב העורקים infrarenal (איור 2) הושג בהצלחה באמצעות השיטה הניתוחית שתוארה. בדיקה היסטולוגית ובידול בין דגימות BAT וWAT הוערכו באופן חיובי באמצעות Hematoxylin ו Eosin (H & E) מכתים (איור 3). ניתוח של רמות RNA של אדיפונקטין, גמא קולט מ.......

דיון

השמנת יתר יכול להוביל למארח גדול של תחלואות וההבנה המלאה של התפקיד שממלא שומן אינו מובן במלואו; מחקר לכן המשיך בתחום השומן הוא הכרחי. מודלים של בעלי חיים, במיוחד מודלים עכבריים הם אידיאליים למחקר ראשוני בהתקדמות של מחלות ובדיקות של טיפולי תרופות פוטנציאליים. בשימוש במודלים אלה, בידוד וכריתה של מחסני שומן מדויקים הוא כלי חשוב וההכרחי ביותר במחקר של פתולוגיה של מחלות שומן מושפעת.

בספרות הקיימת לגבי מחסני שומן, יש כ.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
Isoflurane	Med-Vet International	#RXISO-250
70% אתנול	פישר	07-678-001
DMEF-12	Sigma Aldrich	D-6421	יש לחמם באמבט מים לפני הנחת טישו.
2 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגה	Midsci	MCT-200-C-S
פוספט חוצץ מלח	סיגמא אולדריץ'	P5368-10PAK