עם מחקר זה, אנו מציגים מודל מתח סטנדרטי לרשתית שור superfused המבודדת לבדיקה טיפולית פרה-קלינית בעתיד. ההשפעה או היפוקסיה (N הטהור 2) או מתח גלוטמט (250 גלוטמט מיקרומטר) על תפקוד רשתית מיוצג על ידי a- ואמפליטודות ב-גל הוערכה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
גלוטמט והיפוקסיה כמודל מתח לperfused חוליות הרשתית מבודדת
במאמר זה
סיכום
תקציר
Neuroprotection היה שדה חזק של חקירה במחקר רפואת עיניים בעשורים האחרונים ומשפיע מחלות כגון גלאוקומה, חסימת כלי דם ברשתית, היפרדות רשתית, ורטינופתיה סוכרתית. זה היה מושא מחקר זו כדי להציג מודל מתח סטנדרטי לבדיקה טיפולית פרה-קלינית בעתיד.
רשתיות שור הוכנו וperfused עם פתרון סטנדרטי חמצן רווי, וERG נרשם. לאחר ההקלטה ב-גלים יציבים, היפוקסיה (N הטהור 2) או מתח גלוטמט (250 מיקרומטר גלוטמט) שהופעל במשך 45 דקות. כדי לחקור את ההשפעות על תפקוד קולטי אור לבד, 1 aspartate מ"מ נוסף לקבלת-גלים. ERG-התאוששות הייתה פיקוח על 75 דקות.
להיפוקסיה, ירידה בגל משרעת של 87.0% נרשמה (p <0.01) לאחר זמן אקספוזיציה של 45 דקות (ירידה בשיעור של 36.5% לאחר תום p כישלון = 0.03). בנוסף, decr ראשונילהקל באמפליטודות ב-גל של 87.23% נרשמו, שהגיעה למובהקות סטטיסטיות (p <0.01, ירידה בשיעור של 25.5% בסוף השטיפה, p = 0.03).
עבור 250 מיקרומטר גלוטמט, ירידה של 7.8% ראשוני של אמפליטודות-גל (p> 0.05) ואחריו ירידה של 1.9% (p> 0.05). ירידה של 83.7% מאמפליטודות ב-גל (p <0.01) צוין; לאחר כישלון של 75 דקות הירידה הייתה 2.3% (p = 0.62). במחקר זה, מודל מתח סטנדרטי מוצג שעשוי להיות שימושי כדי לזהות השפעות נוירו אפשריות בעתיד.
מבוא
Neuroprotection היה שדה חזק של חקירה במחקר רפואת עיניים בעשורים האחרונים. הרשתית היא רשת עצבית רגישה מאוד שתלוי באופן משמעותי בחמצון ומושפע במידה רבה על ידי חילוף החומרים של תאים המקיפים אותה. פתולוגיות עיניות עיקריות הקשורות לנזק לתאי עצב הן חסימות כלי דם ברשתית, גלאוקומה, והיפרדות רשתית.
חסימת עורק רשתית, כדוגמא לחסימה של כלי דם ברשתית, מובילה לאובדן פתאומי של ראייה בשל חוסר חמצן של הרשתית הפנימית 1. היא קשורה לעתים קרובות עם פתולוגיות כלליות של כלי דם 2 ומובילים לאובדן ראייה מתמשך 1, עם רק 8% מהחולים מתאוששים חדות ראייה באופ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנת עיני שור
- השג עיני שור ישירות לאחר החיה שנשחטה.
- להעביר את העיניים מוגנות ב" Sickel-פתרון "בינוני מיוחד המכיל 120 mM NaCl, KCl 2 מ"מ, 0.1 מ"מ MgCl 2, 0.15 מ"מ CaCl 2, 1.5 מ"מ לאא 2 גלוקוז מ"מ 4 PO, 13.5 מ"מ Na 2 HPO 4 ו -5 ב RT.
- לבצע את ההכנה של הרשתית בתנאים מותאמים כהים עם אור אדום עמום.
- הסר את החלק הקדמי של העין. בצע ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
אחרי שעה 1 של זלוף של הכנות רשתית עם פתרון רווי חמצן סטנדרטי (איור 1 א 'וב') ERG-אמפליטודות הראתה התייצבות ופחות וריאציה של אמפליטודות בין מדידות בודדות. pH, לחץ האוסמוטי, טמפרטורה, וPO 2 (פרט לבדיקות היפוקסיה) נשמרו קבועים לכל הבדיקות.
כדי לבודד את אות קולטי האור מהאות של הרשתית הפנימית, 1 מ"מ aspartate התווסף לפתרון הסטנדרטי לדכא ב-הגל (איור 1 א). במהלך הבדיקה של ההשפעה של .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
במחקר זה, יש השפעה משמעותית על משרעת ב-הגל לאחר 45 דקות של חוסר חמצן נמצאה. הפחתה זו עדיין הייתה משמעותית לאחר שלב השטיפה. השפעה דומה על פוטנציאל קולטי האור יכולה להיות שנצפתה.
התוצאות נתמכות על ידי נתונים אחרים שפורסמו 16 ולתת לנו את ההזדמנות ללמוד השפעות נוירו אפשריות לאחר היפוקסיה.
אחרי 45 דקות של אקספוזיציה 250 מיקרומטר גלוטמט, אנ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
מאמר זה מוקדש לאשתי האהובה מארן ולקארל הקטן שלנו.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 120 מ"מ NaCl | Merck Pharma, גרמניה | 1,064,041,000 | |
| 2 מ"מ KCl, | Merck Pharma, גרמניה | 1,050,010,250 | |
| 0.1 mM MgCl2, | מרק פארמה, גרמניה | 58,330,250 | |
| 0.15 מ"מ CaCl2 | מרק פארמה, גרמניה | 111 TA106282 | |
| 1.5 מ"מ NaH2PO4/13.5 מ"מ Na2HPO4 | Merck Pharma, גרמניה | 1,065,860,500 | |
| 5 מ"מ גלוקוז | Merck Pharma, גרמניה | 40,741,000 |
מקורות
- Varma, D. D., Cugati, S., Lee, A. W., Chen, C. S. A review of central retinal artery occlusion: clinical presentation and management. Eye (Lond). 27, 688-697 (2013).
- Resch, M., Suveges, I., Nemeth, J. Hypertension-related eye disorders). Orv Hetil. 154, 1773-1780 (20....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
