מאמר שיטה

המונוציטים בידוד והזרקה תוך ורידית של Murine מח העצם נגזר

DOI:

10.3791/52347

⸱

27 בדצמבר 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department for Cardiology, Angiology and Pneumology, Otto von Guericke University Magdeburg, 2Herzzentrum Dresden, Universitätsklinikum an der Technischen Universität Dresden, Technische Universität Dresden, 3Department of Public Health and Primary Care, University of Cambridge

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו מציגים פרוטוקול המייצר כמויות גדולות של מונוציטים עכבריים ממח עצם הטרוגני ליישומים תרגומיים. בהשוואה לאחרות, שיטה חדשה זו מסייעת להפחית את מספר בעלי החיים המוקרבים ומורידה עלויות על ידי הימנעות משיטות יקרות כגון הפרדת תאים מגנטיים בשיפוע גבוה (MACS).

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כתת-סוג של לויקוציטים ואבות אבות של מקרופאגים, מונוציטים מעורבים בתהליכים חשובים רבים של אורגניזמים ולעתים קרובות הם נושא לתחומים שונים במדע הביו-רפואי. השיטה המתוארת להלן היא דרך פשוטה ויעילה לבודד מונוציטים של עכברים ממח עצם הטרוגני.

מח עצם מעצם הירך והשוק של עכברי Balb/c נקצר על ידי שטיפה עם מי מלח חוצץ פוספט (PBS). תרחיף התאים מתווסף עם גורם מגרה מושבת מקרופאגים (M-CSF) ומתורבת על משטחי התקשרות נמוכים במיוחד כדי למנוע התמיינות המופעלת על ידי הידבקות של מונוציטים. המאפיינים והבידול של מונוציטים מאופיינים במרווחים שונים. מיון תאים מופעל פלואורסצנטי (FACS), עם סמנים כמו CD11b, CD115 ו-F4/80, משמש לפנוטיפ. בתום הטיפוח, המתלה מורכב מ-45%± 12% מונוציטים. על ידי הסרת מקרופאגים דביקים ניתן להעלות את הטוהר עד 86%± 6%. לאחר הבידוד ניתן להשתמש במונוציטים בדרכים שונות, ואחת השיטות היעילות והנפוצות ביותר למתן in vivo היא הזרקת וריד זנב תוך ורידי.

טכניקה זו של בידוד ויישום חשובה למחקרי מודלים של עכברים, במיוחד בתחומי הדלקת או האימונולוגיה. מונוציטים יכולים לשמש גם לטיפול במודלים של מחלות עכברים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בידוד המונוציטים חשוב וקריטי עבור רבים מחקרי מבחנה ו-in vivo. תאים אלה מהווים מטרות למחלות כגון מחלת עורקים היקפיים, מחלת לב כלילית או מחלות איסכמיות אחרות, מכיוון שצמיחת כלי דם צדדיים מונעת חזק על ידי דלקת מקומית. תגובות דלקתיות כוללות הפעלה אנדותל וגיוס מקומי של לויקוציטים, בעיקר מונוציטים, אשר לאחר מכן מבשילים למקרופאגים ויוצרים סביבה עורקית מאוד על ידי הפרשת גורמי גדילה מרובים כדי לגרום לעיצוב מחדש של עורק לעורק קולטרליפונקציונלי 1-3. מונוציטים מבשילים גם לתאים דנדריטיים, המשמשים לעתים קרובות למחקרים אימונולוגיים4,5 ולחקר סרטן6,7.

בעייתי בגישה לבידוד מונוציטים מדם היקפי8 הוא המספר הגבוה של בעלי חיים תורמים הדרושים לייצור כמות מספקת של מונוציטים לרוב הניתוחים. פרוטוקולים קודמים מתארים שיטות כגון צנטריפוגה של שיפוע צפיפות ודלדול תאים באמצעות MACS9 בעת בידוד מונוציטים; עם זאת, טכניקות אלה יכולות לשנות את המאפיינים והפונקציונליות של מונוציטים מה שעלול להוביל לקשיים בפירוש10,11. יתר על כן, שיטות אלו קשות ועלולות להפחית את יכולת השחזור הניסיונית.

המטרה שלנו בפרוטוקול זה היא לספק שיטה פשוטה וחסכונית ליצירת כמויות גדולות של מונוציטים שמקורם במח העצם. בשל תפוקת התאים הגבוהה של 11 x 106 ± 3 x 106 תאים המתקבלים על ידי פרוטוקול זה, אנו יכולים להפחית באופן משמעותי את מספר העכברים הנדרשים במהלך בידוד מונוציטים שמקורם במח העצם. ניתן להשלים את ההליך תוך פרק זמן מינימלי, וללא שימוש בטכניקות יקרות ומסובכות כפי שהוזכר לעיל. כאן, אנו מפיקים מונוציטים מתרחיף מח עצם מקורי של עכברים תורמים, מטפחים את התרחיף על לוחות חיבור נמוכים במיוחד, ומשלימים את התמיסה ב-20 ננוגרם/מ"ל M-CFS. ביום החמישי של הדגירה, תאים נקצרים ומאופיינים כדי לאשר תכונות תפקודיות ופנוטיפיות.

עבור ניסויים בתחום העורקים, השתלה תוך ורידית של מונוציטים אלה שמקורם במח עצם בעכברים היא שיטה יעילה להעברת תרופות מערכתיות, שניתן לשלב עם קשירת עורקי הירך במודלים נפוצים של מחלות עורקים היקפיות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה בוצע באישורה של המדינה סקסוניה וסקסוניה-אנהלט, Regierungspraesidium דרזדן / האלי, על פי סעיף 8 לחוק הגרמני להגנה על בעלי חיים (24D-9,168.11-1 / 2008-24).

בידוד תא 1

1.1 הכנת עצם הירך לבין השוקה

  1. להרדים את העכבר באמצעות 5% ריכוז isoflurane על ידי אידוי isoflurane לפח סגור. לאחר העכבר הפסיק לזוז במשך 3 שניות, לבצע הנקע בצוואר הרחם.
  2. לחטא את הגפיים האחורי עם אתנול (96%). להסיר את העור ושרירים ולהפריד את העצמות עם אזמל סטרילי.
    1. התחל עם חתך בעור מפשעה, ולהרחיב את החתך לכיוון malleolus המדיאלי ולבצע נתיחה חוזר של העור סביב העגל הנמוך. הסר את העור של הרגליים לחלוטין על ידי לקלף אותה proximally.
    2. לנתק את השריר הארבע ראשי מעצם הירך עם אזמל חד, תסיר את שני peroneus הקדמיוקבוצות השרירים הגסטרוקנמיוס וdisarticulate הרגל במפרק הירך על ידי איתור ולנתח את הרצועות.
    3. התחל anteriorly ולהמשיך סביב המפרק על ידי הסיבוב בזהירות את הרגל וtransecting הרצועות, ובכך disarticulating המשותף.
  3. לשטוף עצם ירך ועצם שוק עם 96% אתנול למשך תקופה מינימאלית של 90 שניות כדי להבטיח הכנת תא ספטית. להמשיך את תהליך השטיפה עם PBS סטרילי כדי לשטוף נותר אתנול.
    הערה: כל הצעדים הבאים חייבים להיות סטרילי כדי למנוע זיהום.

1.2 קצירה של מח העצם

  1. חותך את הקצה הפרוקסימלי והדיסטלי של כל עצם עם זוג מספריים קנס כדי לקבל גישה לפירי הירך ושוקה. תיזהר עם צעד זה, שכן העצמות האלה לשבור בקלות רבה.
  2. לשטוף את העצמות עם מדיום חם (M199 10% בסרום + עגל עוברי (FCS), + 1% פניצילין / סטרפטומיצין). השתמש במחט סטרילית 28-G, מזרק 1 מיליליטר, ובין 10-15 מיליליטר בינונייםעצם לשטיפה.
  3. החזק את העצם עם מלקחיים עדינים ולשטוף אחד אחד עד שהוא הופך שקוף למחצה. זהירות להחיל לחץ בסופו של בוכנת המזרק על מנת למזער מתח תא.
  4. סנן את מח העצם באמצעות אינטרנט ניילון 70 מיקרומטר ולאסוף התסנין. כדי לחלץ את הכמות המרבית של מח עצם, לשטוף שוב ושוב מהקצוות דיסטלי ופרוקסימלי.
  5. יש לשטוף את המסננת עם PBS ולאסוף התסנין. לסלק פסולת בזהירות וקונגלומרטים סלולריים על ידי ערבוב וpipetting עדינים.

1.3 טיפוח

  1. צנטריפוגה ההשעיה התא ב 250 XG במשך 10 דקות ב RT. בטל supernatant ו resuspend התאים עם כ 25 מיליליטר של מדיום. חזור פעם אחת.
  2. Resuspend תאי 6 מיליליטר של מדיום לאחר שלב הכביסה השני. מערבבים 50 μl של פתרון התא עם 50 μl של trypan כחול. ספירת התאים בתא ספירה תחת מיקרוסקופ אור. לחשב את מספר גאמות בפתרון באמצעות נוסחה זו:
    figure-protocol-1
  3. זרעי התאים על צלחות משטח נמוך במיוחד מצורף 6-גם למניעת הדבקה קבועה לתחתית הצלחת. השתמש בריכוז של 10 6 תאים למ"ל עם עד 6 מיליליטר לכל טוב.
  4. להשלים את ההשעיה עם M-CSF מיליליטר / 20 ng לקדם התמיינות תאים.
  5. תרבות התאים במשך 5 ימים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% פחמן דו חמצני ולבחון מדי יום.

1.4 קצירה של תאים

הערה: עליך לבצע פעולות אלה על קרח. המשך עם או 1.4.1 או 1.4.2 בהתאם.

  1. בשלב זה, לקצור את התרבות כולה, כולל מקרופאגים המובחנים שידבקו לתרבות-הצלחות, גם אם הם צלחות משטח נמוך במיוחד קובץ מצורף.
    1. לקצור את כל התרבות על ידי pipetting העדין וניתוק עם פתרון של 4 מעלות צלזיוס PBS, 0.5% אלבומין בסרום שור (BSA) ו- 2 mM EDTA. חזור על פעולה עד הצלחות ברורות של שנותר תאים חסיד - לאשר תחת מיקרוסקופ אם אינך בטוח.
  2. לחלופין, לבטל מקרופאגים חסיד על ידי איסוף supernatant עם התאים בתרחיף, שבעיקר מכילים מונוציטים.
    1. קציר התאים שאינם חסיד עם פתרון של PBS ללא EDTA וBSA 0.5%. אין ליישם בכוח רב מדי על מנת להימנע מפירוק מקרופאגים המעטה חסיד.

1.5 FACS-ניתוח (אופציונאלי)

הערה: ניתן לרוקן את ההשעיה התא של תאי stem- ואב CD117 + על ידי השימוש בMACS. להשתמש בפרוטוקולי יצרן להליך זה.

  1. קציר התאים על פי שני שלבים 1.4.1 או 1.4.2.
  2. צנטריפוגה התאים ב 250 XG במשך 10 דקות ב 4 ° C ולחזור על פעולה זו שוב.
  3. Resuspend לפחות 250,000 תאים ב300 μl של FACS בuffer לבדיקה.
  4. העבר את פתרון תא על 96-היטב צלחת (30 μl לכל היטב).
  5. צנטריפוגה ההשעיה התא ב 250 XG במשך 5 דקות ב 4 מעלות צלזיוס.
  6. הסר את supernatant ולהוסיף 25 μl של נוגדן לכל טוב (דילול יצרן שימוש).
  7. כתם התאים עם נוגדנים (להלן פרוטוקולי יצרן לתא phenotyping לאחר צעדי 1.5.1-1.5.6. סמנים בשימוש נפוץ לזיהוי מונוציטים / מקרופאג כוללים CD11b, F4 / 80 (איור 3), CD115 (איור 2), וGr- 1.
    הערה: לתיאור נוסף של פתרונות סלולריים, השימוש בסמנים כמו CD4, CD8a, CD11c, CD25, CD45, CD45R, CD62L, CD80, CD86, CD145, CD117, MHCⅡ, Ly6C, Ly6G, וCD192 מומלץ. מאפיינים סלולריים תוארו בעבר 12.
  8. דגירה הבדיקות במשך 20 דקות על 4 מעלות צלזיוס.
  9. צנטריפוגה הבדיקות ב 250 XG במשך 5 דקות על 4 מעלות צלזיוס וגלולה עם 200 μl של חיץ FACS. ה חזורהוא צעד פעמיים.
  10. העבר את הבדיקות לתוך צינורות FACS ולבצע ניתוח FACS 12.
  11. ביצוע ניתוח FACS 12 ביום 0, 3 ו -5 לנתח התמיינות תאים.

הזרקה לוריד 2. זנב

2.1 הכנה

  1. לחמם את בעלי החיים על צלחת חימום על 37 מעלות צלזיוס למשך כ -10 דקות. שים לב לבעלי החיים בזמן ההתחממות לזהות סימנים של התחממות יתר.
  2. Resuspend מונוציטים, מבודדים בצעדי 1.1- 1.4, ב -150 μl של NaCl, ולטעון את התאים לתוך מזרק אינסולין 1 מיליליטר עם מחט 30G. קל מערבולת הפתרון לפני טעינת המזרק על מנת להבטיח את כל מונוציטים מוזרקים. תמיד להתמודד עם תאים על קרח, כדי למנוע עיקול בתיווך חום והפעלה של מונוציטים.

2.2 הרחקה

  1. הימנע מלהפריע עכברים אחרים בכלוב בעת בחירת עכבר להזרקה תוך ורידית.
  2. מניחים את העכבר לעוצר. הימנע יותר מדי יחסי ציבורחסימת חצוצרות ולהיות זהירות עם הגפיים האחורי. (איור 4)
    הערה: לחלופין, להשתמש בהרדמה כללית כדי להבטיח טיפול ללא מתח של בעלי החיים.
  3. ודא שיש לו את העכבר מרחב לנשימה לפני סגירת העוצר.

2.3 הזרקה

  1. לחטא את אזור ההזרקה עם סוכן חיטוי. תרסיס על הזנב של העכבר ולתת לעמוד במשך דקות לפחות 1.
  2. לעצור את זרימת דם ורידית של הזנב על ידי הפעלת לחץ עדין לצד זנב לרוחב מעל אתר ההזרקה, ראות טובה יותר של הוורידים.
  3. הפעל את הזנב 90 מעלות, לפני ההזרקה. (איור 5)
  4. להזריק בזווית של 45 מעלות. להזריק לאט ולא יותר מ 5 μl לז, כדי למנוע פגיעה בבעלי חיים.
  5. אם יש שלפוחית, וזה סימן של הזרקה נכשלה, להפסיק מייד ולחזור על ההזרקה יותר proximally.
  6. לעצור את הדימום בצד ההזרקה על ידי יישום p העדיןressure כ 1 דק '.
  7. בסופו של ההליך, לפתוח את מפשק ומניח את העכבר בכלוב שלה.
  8. שים לב לעכבר במשך 20 דקות על מנת להבטיח כי בעל החיים לא נפגעו על ידי ההזרקה ומתוחזק כיבה sternal. הארך את הזמן של התבוננות עד העכבר להכרה מספקת. החזר את העכבר לחברה של בעלי חיים אחרים רק לאחר שהתאושש באופן מלא.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פתרון התא מופק ממוח העצם העכברי מורכב מסוגי תאים שונים. הסוגים העיקריים של התאים לימפוציטים הם, גרנולוציטים ומונוציטים. ניתן להעריך סוגי תאים על ידי גודל וגרעיניות, המוצג באיור 1 עבור שתי השעיות היליד והתאים שנקטפו לאחר 5 ימים של בידול. שים לב להרכב הסלולרי ההסטה במהלך טיפוח. עם זאת, סיווג מדויק של אוכלוסיות חייב לסמוך על ביטוי ייחודי של סמנים תאיים.

הסמן החשוב ביותר המשמש לזיהוי תאים של המערכת-M...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מתארים שיטה פשוטה וחסכונית לבודד את הכמויות גדולות של מונוציטים עכבריים ממח עצם. בהשוואה לפרוטוקולים אחרים באמצעות דם היקפי, הלהשיג תשואות מונוציטים 5 של 1.4 x10 6, אנו מסוגלים להשיג תשואות גבוהות יותר של 11 x 10 6 ± 3 x 10 6 מונוציטים מעכבר תורם יחיד.

כאשר שוקלים אתגרים בשיטה זו, חשוב לדבר על הפוטנציאל לזיהום בעת העבודה בתנאים שאינם סטרילי. אם שטיפה והצעדים הכביסה ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft, קרן המחקר הגרמנית) SFB 854 (Sonderforschungsbereich, מרכז מחקר שיתופי).

תודה להנס-הולגר גרטנר, Audiovisuelles Medienzentrum, אוניברסיטת אוטו-פון-גוריקה מגדבורג, מגדבורג, גרמניה, על התמיכה הטכנית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צלחת הצמדה 6-well-ultra-lowCorning Incorporated, NY, ארה"בצלחת הצמדה 6-well-ultra-low, עם כובע, סטרילי
בן 8-12 שבועות, זכר, עכברי Balb/C צ'ארלס ריבר, זולצפלד, גרמניה
96-well-plateGreiner bio one GmbH, Frickenhausen, גרמניה
כתם תאים מתים כחולLife technologies GmbH, דרמשטדט, גרמניה
סרום בקר אלבומיןGE Healthcare, פרייבורג, גרמניהFraction V, pH 7.0
CanulesB. Braun, Melsungen AG, Melsungen, גרמניה28G, 30G
CD115eBioscience, סן דייגו, ארה"ב12-1152
CD11beBioscience, סן דייגו, ארה"ב53-0112
צלחת תרבית תאיםGreiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, גרמניהעם כובע,
צנטריפוגהBeckman Coulter GmbH, Krefeld, גרמניהAllegra® צנטריפוגה X-15R
קרם אפילציהVeet, מנהיים, גרמניה
חומר חיטויSchü lke& Mayr GmbH, Norderstedt, גרמניהקודאן טינקטור פורטה
אזמל חד פעמי מס' 10 סכין גילוח בטיחות נוצות Co.Ltd, אוסקה, יפן 
EDTASigma Aldrich, המבורג, גרמניה
אתנול 96% Otto Fischar GmbH und Co KG, Saarbrü cken, גרמניה
יחידת מיצוי PipetusHirschmann Laborgerä te GmbH & Co.KG, Eberstadt, גרמניה
F4/80AbD Serotec, Dü sseldorf, גרמניהMCA497APC
FACS buffer מיוצר על ידי הקבוצה שלנו עם רכיביםבודדים PBS, 0.5% BSA, 0.1% NaN3
FACS מכשירBecton, Dickinson and Company, Franklyn Lakes, ניו ג'רזי, ארה"בBD FACS צינורות Canto II
FACS       Becton, Dickinson and Company, Franklyn Lakes, ניו ג'רזי, ארה"ב
Falcon® פיפטהBecton Dickenson Labware, ניו יורק, ארה"ב
סרום עגל עובריSigma Aldrich, המבורג, גרמניה
מלקחיים עדיניםRubis, Stabio, Switzerland
כפפותRö sner-Matby Meditrade GmbH, Kiefersfelden, גרמניה
Gr1eBioscience, סן דייגו, ארה"ב53-5931
פלטת חימום Labotect GmbH, Gö ttingen, גרמניה חממת Hot Plate 062
Ewald Innovationstechnik GmbH, באד ננדורף, גרמניהIncu safe
IsofluranBaxter Deutschland GmbH, Unterschleiß heim, גרמניה
מיקרוסקופ אורCarl Zeiss SMT GmbH, Oberkochen, גרמניהAxiovert 40 ° C
גורם מגרה של מושבת מקרופאגיםסיגמא אולדריץ', המבורג, גרמניהSRP3110 
שייקר מכניIKA, סטאופן, גרמניהms2 minishaker
Medium 199PAA Laboratories GmbH, Pasching, אוסטריהחם ב-37 מעלות; אמבט מים C לפני השימוש
מבחנות מיקרוEppendorf AG, המבורג, גרמניה
ספסל עבודה מיקרוביולוגיThermo Electron, LED GmbH, Langenselbold, גרמניהמאגר כביסה מונוציטים בטוח של Hera
 מיוצר על ידי הקבוצה שלנו עם רכיבים בודדיםPBS, 0.5% BSA, 2 מ"מ מסנן עכבר EDTA
שונים
NaClBerlin Chemie AG, ברלין, גרמניה
NaN3 (נתרן acide)Sigma Aldrich, המבורג, גרמניה
תא ספירת נויבאוארPaul Marienfeld GmbH und Co.KG, Lauda-Kö nigshofen, גרמניה
ניילון cellieveBecton, Dickinson and Company, פרנקלין לייקס, ניו ג'רזי, ארה"במסננת תאים, 70 ומיקרו; m גודל רשת
פניצילין/סטרפטומיציןסיגמא אולדריץ', המבורג, גרמניה
פוספט חוצץ מלחLife technologies GmbH, דרמשטדט, גרמניהpH 7.4, פיפטות סטריליות
Eppendorf AG, המבורג, גרמניה10µ ליטר/100&מיקרו; ליטר / 200 ומיקרו; ליטר/1,000&מיקרו; l
ראשי צנרתEppendorf AG, המבורג, גרמניה
פיפטה סרולוגיתGreiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, גרמניהCellstar 5 מ"ל, 10 מ"ל
יחידת יניקהIntegra bioscience, Fernwald, גרמניהVacusafe comfort
מספריים כירורגייםWord Precision Instruments, Inc., סרסוטה, ארה"ב
מזרקB. Braun, Melsungen AG, Melsungen, גרמניה1 מ"ל Omnifix® מזרק אינסולין -F צינורות עם
מכסהGreiner bio one GmbH, Frickenhausen, גרמניה15 מ"ל/50 מ"ל צינורות Cellstar
אמבט מים חמיםJulabo Labortechnik GmbH, Seelbach, גרמניהJulabo SW22
סטרילית

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Herold, J., et al. Transplantation of monocytes: a novel strategy for in vivo augmentation of collateral vessel growth. Hum Gene Ther. 15 (1), 1-12 (2004).
  2. Herold, J., Tillmanns, H., Xing, Z., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C. Isolation and transduction of monocytes: promising vehicles for therapeutic arteriogenesis. Langenbecks Arch Surg. 391 (2), 72-82 (2006).
  3. Francke, A., Weinert, S., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C., Herold, J. Transplantation of bone marrow derived monocytes: a novel approach for augmentation of arteriogenesis in a murine model of femoral artery ligation. American Journal Of Translational Research. 5 (2), 155-169 (2013).
  4. Leon, B., et al. Dendritic cell differentiation potential of mouse monocytes: monocytes represent immediate precursors of CD8- and CD8+ splenic dendritic cells. Blood. 103 (7), 2668-2676 (2004).
  5. Timmerman, J. M., Levy, R. Dendritic cell vaccines for cancer immunotherapy. Annu Rev Med. 50, 507-529 (1999).
  6. Salem, M. L. The use of dendritic cells for Peptide-based vaccination in cancer immunotherapy. Methods Mol Biol. 1139, 479-503 (2014).
  7. Timmerman, J. M., et al. Idiotype-pulsed dendritic cell vaccination for B-cell lymphoma: clinical and immune responses in 35 patients. Blood. 99 (5), 1517-1526 (2002).
  8. Berthold, F. Isolation of human monocytes by Ficoll density gradient centrifugation. Blut. 43 (6), 367-371 (1981).
  9. Houthuys, E., Movahedi, K., De Baetselier, P., Van Ginderachter, J. A., Brouckaert, P. A method for the isolation and purification of mouse peripheral blood monocytes. Journal Of Immunological Methods. 359 (1-2), 1-10 (2010).
  10. Seeger, F. H., Tonn, T., Krzossok, N., Zeiher, A. M., Dimmeler, S. Cell isolation procedures matter: a comparison of different isolation protocols of bone marrow mononuclear cells used for cell therapy in patients with acute myocardial infarction. European Heart Journal. 28 (6), 766-772 (2007).
  11. Auffray, C., et al. CX3CR1+ CD115+ CD135+ common macrophage/DC precursors and the role of CX3CR1 in their response to inflammation. The Journal Of Experimental Medicine. 206 (3), 595-606 (2009).
  12. Francke, A., Herold, J., Weinert, S., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C. Generation of mature murine monocytes from heterogeneous bone marrow and description of their properties. J. Histochem. Cytochem. 59 (9), 813-825 (2011).
  13. Sneider, E. B., Nowicki, P. T., Messina, L. M. Regenerative medicine in the treatment of peripheral arterial disease. Journal Of Cellular Biochemistry. 108 (4), 753-761 (2009).
  14. Van Royen, N., Piek, J. J., Schaper, W., Fulton, W. F. A critical review of clinical arteriogenesis research. J Am Coll Cardiol. 55 (1), 17-25 (2009).
  15. Lawall, H., Bramlage, P., Amann, B. Treatment of peripheral arterial disease using stem and progenitor cell therapy. J Vasc Surg. 53 (2), 445-453 (2011).
  16. Herold, J., et al. Tetanus toxoid-pulsed monocyte vaccination for augmentation of collateral vessel growth. Journal of the American Heart Association. 3 (2), e000611(2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

M CSFCD11b CD115 F4 80

מאמרים קשורים