הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מעבדה מבדק-האכלת דגים לבחינת פעילות Antipredatory של משני מטבוליטים מהרקמות של אורגניזמים ימיים

8.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/52429

⸱

11 בינואר 2015

 , 
1Department of Biology and Marine Biology and Center for Marine Science, University of North Carolina Wilmington

במאמר זה

סיכום

המבדק זה מעסיק דגים טורפים מודל כדי להעריך את הנוכחות של מטבוליטים האכלה-הרתעה מתמציות אורגניות של הרקמות של יצורים ימיים בריכוזים טבעיים באמצעות מטריצת מזון דומה מבחינה תזונתית.

תקציר

אקולוגיה כימית ימית היא דיסציפלינה צעירה, שצמחה משיתוף פעולה של כימאים ואקולוגים ימיים בשנות ה-80 במטרה לבחון את הפונקציות האקולוגיות של מטבוליטים משניים מרקמות של אורגניזמים ימיים. התוצאה הייתה התקדמות של פרוטוקולים ששיפרו יותר ויותר את הרלוונטיות האקולוגית של הגישה הניסיונית. כאן אנו מציגים את הגרסה העדכנית ביותר של בדיקה ביולוגית במעבדה להאכלת דגים המאפשרת לחוקרים להעריך את הפעילות האנטי-טורפת של מטבוליטים משניים מרקמות של אורגניזמים ימיים. מטבוליטים אורגניים מכל הקטבים מופקים באופן ממצה מרקמת אורגניזם המטרה ומשוחזרים בריכוזים טבעיים במטריצת מזון מתאימה מבחינה תזונתית. כדורי מזון ניסיוניים מוצגים לטורף כללי במבחני הזנה במעבדה כדי להעריך את הפעילות האנטי-טורפת של התמצית. ההליך המתואר כאן משתמש בכחול הראש, Thalassoma bifasciatum, כדי לבדוק את הטעם של חסרי חוליות ימיים קריביים; עם זאת, ניתן להתאים את העיצוב בקלות למערכות אחרות. התוצאות המתקבלות באמצעות בדיקת מעבדה זו הן הקדמה חשובה לניסויי שדה המסתמכים על תגובות ההזנה של מערך שלם של טורפים פוטנציאליים. בנוסף, ניתן להשתמש בבדיקה ביולוגית זו כדי לכוון את הבידוד של מטבוליטים מרתיעי הזנה באמצעות פיצול מונחה ביו-מבחן. מבחן ביולוגי האכלה זה קידם את הבנתנו את הגורמים השולטים בתפוצה ובשפע של חסרי חוליות ימיים בשוניות אלמוגים קריביים ועשוי להוות בסיס לחקירות בתחומי מחקר מגוונים, כולל פרמקולוגיה, ביוטכנולוגיה ואקולוגיה אבולוציונית.

מבוא

אקולוגיה כימית שפותחה באמצעות שיתוף הפעולה של כימאים ואקולוגים. בעוד subdiscipline אקולוגיה כימית יבשתית בסביבה כבר זמן מה, זה של אקולוגיה כימית הימית הוא רק בן כמה עשרות שנים, אך סיפק תובנות חשובות מבנה האקולוגיה והקהילה האבולוציונית של יצורים ימיים 1-8. מנצל את הטכנולוגיות המתהוות של צלילה וספקטרוסקופיה NMR, כימאים אורגניים במהירות שנוצרו מספר רב של פרסומים המתארים רומן מטבוליטים מחוליות ימיות של קרקעית ים ואצות בשנתי ה -1970 ו -1980 9. בהנחה שמטבוליטים משניים צריכים לשרת כמה מטרות, שרבים מהפרסומים אלה מיוחסים מבחינה אקולוגית תכונות חשובות לתרכובות חדשות ללא ראיות אמפיריות. בערך באותו הזמן, אקולוגים היו גם מנצלים את כניסתו של צלילה ומתארים את ההפצות ושכיחותם של בעלי חיים וצמחים של קרקעית ים הידוע בעבר הלוך ושובמ 'שיטות דגימה יחסית לא יעילות כמו חפירה. ההנחה של חוקרים אלה הייתה שכל דבר הנייח ורך-גוף חייב להיות מוגן כימי כדי למנוע הצריכה על ידי טורפים 10. במאמץ להציג את האמפיריציזם למה שהייתה עבודה אחרת תיאורים על שכיחות מינים, כמה אקולוגים החלו אקסטרפולציה הגנות כימיות ממבחני רעילות 11. רוב מבחני הרעילות מעורבים החשיפה של דג שלם או אורגניזמים אחרים להשעיות מימיות של תמציות אורגניות גולמיים של רקמות חסרי חוליות, בנחישות הבאה של ריכוזי מסה היבש של תמציות אחראים להריגת מחצית אורגניזמים assay. עם זאת, מבחני רעילות לא לחקות את האופן שבו תופסים את טרף טורפים פוטנציאליים בתנאים טבעיים, ומחקרים עוקבים לא מצאו קשר בין רעילות ואת הטעם 12-13. אין זה מפתיע כי פרסומים בכתבי עת יוקרתיות השתמשו בטכניקות שיש ecologica קטן או לארלוונטי l 14-15 והיום שמחקרים אלה עדיין מצוטטים בהרחבה. זה אפילו יותר מדאיג לציין כי מחקרים המבוססים על נתונים רעילות יוסיפו להתפרסם 16-18. שיטת המבדק המתוארת כאן פותחה בשלהי 1980 על מנת לספק גישה רלוונטית מבחינה אקולוגית לאקולוגים כימיים ימיים להעריך הגנות כימיות antipredatory. השיטה דורשת טורף מודל לדגום תמצית אורגנית גולמי מאורגניזם היעד בריכוז טבעי במטריצת מזון דומה מבחינה תזונתית, המספקת נתונים את הטעם, כי הם יותר מבחינה אקולוגית משמעותית מנתוני רעילות.

הגישה הכללית להערכת פעילות antipredatory של הרקמות של יצורים ימיים כוללת ארבעה קריטריונים חשובים: (1) טורף generalist מתאים יש להשתמש במבחני האכלה, (2) מטבוליטים אורגניים של כל הקטבים חייבים להיות מופקים באופן ממצה מהרקמות של יעד האורגניזם, (3) מטבוליטים חייבים bהדואר מעורב לתוך מזון ניסוי מתאים מבחינה תזונתית באותו הריכוז הנפח כפי שנמצא באורגניזם שממנו הם מופקים, ו- (4) עיצוב הניסיון והגישה סטטיסטית חייבים לספק משמעותי מטרי כדי לציין distastefulness היחסי.

ההליך המתואר להלן תוכנן במיוחד כדי להעריך את ההגנות כימיות antipredatory בחסר חוליות ימיות באיים הקריביים. אנו מעסיקים wrasse bluehead, bifasciatum Thalassoma, כדגים טורפים מודל כי מין זה הוא נפוץ על שוניות אלמוגי האיים הקאריביים, והוא ידוע לדגום מגוון רחב של חסרי חוליות של קרקעית ים 19. רקמה מאורגניזם היעד מופק ראשונה, ולאחר מכן בשילוב עם תערובת מזון, ולבסוף הציעה לקבוצות של ט ' bifasciatum להתבונן אם הם דוחים את המזונות שטופל בתמצית. נתוני assay שימוש בשיטה זו סיפקו תובנות חשובות הכימיה ההגנתית של יצורים ימיים 12,20-21, lהיסטורית ife פשרות 22-24, ואקולוגיה קהילת 25-26.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הערה: שלב 3 של פרוטוקול זה כרוך נושאי בעלי חיים בעלי חוליות. ההליך תוכנן כך שבעלים חיים מקבלים הטיפול ההומני ביותר אפשריות ואושר על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) באוניברסיטת צפון קרוליינה ווילמינגטון.

1) הפקת רקמות

  1. השתמש ברקמות שנמצאות במצב הטבעי של לחות ולא לחץ, מיובש או מדי רטובה כמו זה יהיה לשנות את ריכוז הנפח של מטבוליטים משתיים. לחתוך או לקצוץ רקמה לחתיכות או פרוסות שיכולות להיות מוכנסת לתוך צינור צנטריפוגות 50 מיליליטר. הערה: רקמה טרי ניתן להשתמש בחלק ממקרים, אבל זה לעתים קרובות יותר כדי לחתוך או לקצוץ רקמה קפוא, שאינה כפוף לסחיטה כאשר חתך.
  2. להוסיף חתיכות רקמה 30 מיליליטר של 1: 1 תערובת של dichloromethane (DCM) ומתנול (MeOH) בצינור צנטריפוגות סיים עד נפח סופי של 40 מיליליטר הוא הגיע. הקפד לבצע את כל השלבים כרוכים בהעברהממס במנדף עם אוורור מתאים.
  3. שווי הצינור ולהפוך אותו כמה פעמים, ואז להתסיס שוב ושוב במהלך תקופת חילוץ 4 שעות. הערה: בתקופה זו, מים משלבים עם MeOH וMeOH וכתוצאה מכך: שלב מים מפריד בין שלב DCM. הרקמה חשופה לסירוגין לDCM וMeOH: מים כתחליב כצינורות נסערים.
  4. העבר את תמצית DCM לבקבוק מסביב לתחתית ולהתאדות עד יובש על מאייד סיבובי באמצעות חום נמוך (<40 ° C). שימוש בממס מינימאלי, להעביר את התמצית יבשה לבקבוקון נצנץ 20 מיליליטר. התאם את הבקבוקון עם מתאם מאייד סיבובי ושוב להתאדות ליובש במאייד סיבובי באמצעות חום נמוך (<40 ° C).
    הערה: השלב הבא מחייב שימוש במכשיר דחיסת תוצרת בית שעשוי להיות מורכב על ידי הברגה את הפריטים הבאים לפי סדר על סוף המוט מושחל: (1) אגוז, (2) ומכונת כביסה, ו- (3) אגוז בלוט. או מכונת הכביסה חייבת להיות או מחוררתמצויד כך שזה פחות מהקוטר הפנימי של צינור צנטריפוגות 50 מיליליטר.
  5. חוזר לצינור צנטריפוגות סיים המכיל רקמות וMeOH: תמצית המים, לסחוט את מדיום החילוץ מתוך הרקמה באמצעות דחיסה. העבר את MeOH: תמצית מים לאותו בקבוק עגול התחתון ולאחסן מצונן (<10 ° C).
  6. להוסיף MeOH לצינור צנטריפוגות סיים עד הרקמה עכשיו מיובשת היא שקועה לחילוץ שני של 2-6 משך שעה, ולאחר מכן להעביר MeOH החדשה לחלץ לבקבוק מסביב לתחתית המצונן המכיל MeOH: תמצית המים. אם יש חשש שהרקמה לא חולצו באופן מלא, לחזור על 2-6 שעות חילוץ MeOH.
  7. להתנגב MeOH על מאייד סיבובי באמצעות חום נמוך (<40 ° C). העבר את התמצית המימית שנותרה מהבקבוק העגול תחתונה לבקבוקון הנצנץ המכיל את התמצית הפולרית המיובש, באמצעות נפח מינימאלי של MeOH לשטוף את הבקבוק העגול התחתון.
  8. Evaporate התמצית המימית ליובש באמצעות חום נמוך (<40 ° C) על רכז ואקום. בקבוקון הנצנץ עכשיו מכיל תמצית הכוללת היבשה אורגנית הגולמי של 10 מיליליטר של רקמה. לפנות את שטח הראש של הבקבוקון עם N 2 גז כדי למנוע חמצון, לאטום היטב, וחנות קפוא (-20 ° C).

2) הכנת מזון

  1. הכן אבקת מעטפת דיונון המיובש בהקפאה.
    הערה: מעטפת קלמארי מספקת מקור של תזונה שהוא דומה לזה של חסרי חוליות אחרות של קרקעית ים, וישמש כמרכיב בsubsteps של 2.2.
    1. טבעות קפוא הפשרה של מעטפת דיונון במים ללא יונים חמים (DI), ואז רסק אותם בבלנדר במהירות גבוהה.
    2. שפכו שכבה דקה של מעטפת דיונון מחיה על נייר אפייה רדודה והקפאה (-20 ° C), ואז לשבור את גיליון של פירה דיונון הקפוא לחתיכות קטנות כדי להיות lyophilized.
    3. Lyophilize פירה מעטפת דיונון הקפוא הבאים נהלי ההפעלה של freeze-יבש.
    4. לכתוש את חתיכות lyophilized של פירה מעטפת דיונון בבלנדר במהירות גבוהה כדי ליצור אבקה.
    5. , במנדף לשפוך מעטפת דיונון האבקה לתוך נפת קמח סיבובית ולנפות להפריד נתחים גדולים של רקמה מהאבקה דקה.
    6. העבר את מעטפת דיונון אבקת הקנס למכל סגר. לפנות את שטח ראש המכל עם N 2 גז כדי למנוע חמצון ולאחסן קפוא (-20 ° C).
  2. מכין את תערובת מזון.
    הערה: בעת הפעלת מבחני רצופים מרובים, זה מעשי להכין ~ של תערובת מזון 100 מיליליטר, אולם המתכון הזה יכול להיות מדורגים לכמויות קטנות יותר במידת צורך.
    1. לשלב תערובת של חומצת alginic 3 g ואבקת 5 גרם מיובשת הקפאת דיונון מעטפת עם המים DI 100 מיליליטר בכוס 150 מיליליטר. מערבבים נמרצות עם microspatula במשך כמה דקות עד שהאבקה היא התייבשות באופן מלא וקבלת התערובת הומוגנית.
      הערה: אם תרצה, צבעי מאכל ניתן להוסיף בst זהep: קל יותר להוסיף צבע לתערובת המזון שתפיק שני תערובות השליטה טופלו ו( מיסוך פיגמנט הטבעי של התמצית בתערובת שטופלה תמצית) ולא מנסה להתאים את הצבע של התערובת שטופלה על ידי הוספת התמצית לצבוע לתערובת השליטה. צבע מזון ירקרק או חום הוא לעתים קרובות רצוי כדי להסוות כל פיגמנטים בתמצית הגולמי.
    2. לטעון מיליליטר בדיוק 10 של תערובת מזון למזרק סיים. תשמור על עצמך, כדי למנוע את הכללתו של בועות אוויר בתהליך זה.
    3. הסר את בקבוקון נצנץ 20 מיליליטר עם תמצית אורגנית גולמי יבשה מהמקפיא. הוסף טיפה או שתיים של MeOH, מוסיף התמצית לתוך תערובת הומוגנית עם microspatula.
    4. הוצא את מזרק 10 מיליליטר הטעון של מטריצת מזון לבקבוקון נצנץ 20 מיליליטר ומערבבים עם microspatula לhomogenize תערובת מזון שטופל תמצית.
      הערה: זה עשוי לעזור כדי להוציא את המזרק במרווחים קטנים יותר (כלומר, להוציא 2 מיליליטר וhomogenize, אז r.EPEAT עד שכל 10 מיליליטר כבר הומוגני).
  3. הכן את כדורי assay.
    1. לטעון נפח קטן מאוד של תערובת התמצית (~ 1 מיליליטר) לתוך מזרק, ולהטביע את קצה המזרק בתמיסה של 0.25 M CaCl 2. הוצא את תכולת המזרק כדי ליצור גדיל ארוך, כמו ספגטי.
    2. אחרי כמה דקות, להסיר את הגדיל הקשוח, לקצוץ אותו לכדורים ארוכים 4 מ"מ בחיתוך זכוכית לוח עם סכין גילוח, ולאחר מכן לשטוף במי ים.
    3. חזור על שלבים 2.3.1 ו2.3.2 ללא כולל תמצית רקמה לעשות כדורי שליטה. הקפד לטפל כדורי שליטה עם נפח שווה של ממס (ראה תוספת של MeOH לתערובת טופלה בשלב 2.2.3) כדי לשלוט על בנוסף ממס. אם ביקורת שלילית היא רצויה כדי לאשר שדגי assay יכולים להירתע מהאכלה, להוסיף בנזואט denatonium בריכוז של 2 מ"ג מיליליטר -1 לתערובת המזון הגולמית 27.

3) את הטעםBioassays

  1. לבצע מבחני האכלה עם wrasse הניצוד צהוב-שלב bluehead, bifasciatum Thalassoma, המשיך בקבוצות של שלושה בתאים אטומים-צדדיים של אקווריום מעבדה.
  2. לספק כדורי מזון מכוס של מי ים בעזרת פיפטה זכוכית עם הנורה גומי. הערה: זה עלול לקחת כמה ימים כדי להכשיר דגים לקבל מזון בצורה זו. גירוי אוויר (למשל כמה דפיקות של פיפטה על זכוכית האקווריום) שמקדים את המסירה של מזון עשוי להיות מועיל להכשיר את הדג לצפות תוספת של כדורי מזון.
  3. ניקוד כדורים. לשקול גלולה מקובלת אם נצרך בקלות על ידי הדגים. לשקול גלולה דחתה אם לא אכל לאחר מינימום של שלושה ניסיונות של דג אחד או יותר כדי לקחת אותו לחלל הפה שלהם, או אם גלולה הוא התקרב והתעלמה אחרי ניסיון אחד כזה.
  4. דגימות ניקוד. הערה: הליך assay מתואר כתרשים זרימה באיור 1 קבוצות של דגים שמסרבים לאכול.כדורי שליטה בשלב כלשהו בפרוטוקול אינם נחשבים נוסף. ישנן שתי תוצאות אפשריות של ריצה אחת של assay: המדגם או האם לאשר או לדחות.
    1. תתחיל עם גלולה שליטה כדי לוודא שהקבוצה של דגים היא שיתופית. להציע גלולה שטופלה. אם הדגים קיבלו את הכדור טופל, להבקיע המדגם כמקובל. אם הדגים לדחות את גלולה טופלה, להציע גלולה שליטה שלאחר מכן כדי לקבוע אם הדגים הפסיקו האכלה. אם הדגים קיבלו את כדור שליטה שלאחר מכן, להבקיע המדגם נדחה.
  5. שכפול. חזור על הליך assay עם עשר קבוצות עצמאיות של דגים לכל תמצית.

4) משמעות הערכה

  1. להעריך את החשיבות של הבדלים בצריכה של שליטה לעומת כדורים שטופלו בגרסה שונה של המבחן המדויק של פישר 26. שנה את הבדיקה כדי שהסיכומים השוליים לשליטה וכדורים טופלו קבועים, טיפול בשניהם דגימות אקראיות. הערה: זה מספק p = 0.057, כאשר 7 כדורים נאכלים; לכן, כל תמצית נחשבת הרתעה אם 6 או פחות כדורים נאכלים, וטעים אם 7 או יותר כדורים נאכלים.
  2. כדי להשוות את הטעם היחסי בקרב קבוצות של תמציות, לחשב מספר ממוצע של כדורים אכלו בתוך כל קבוצה. שמור את הסף בשעה 6 כדורים כל כך קבוצה של תמציות לשכפל נחשבות הרתעה אם המספר הממוצע של כדורים אכל + שגיאה סטנדרטית (SE) ≤6. הערה: תמציות בתוצאות הנציג, משימת הקבוצה היא מינים, כך לשכפל מגיעות מאנשים שונים ואת הטעם ביחס ניתן להשוות בין מינים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כאן אנו מדווחים תוצאות המבדק זה במשך שישה מינים של ספוגים הקריביים נפוצים (איור 2). נתונים אלה בתחילה פורסמו בשנת 1995 על ידי Pawlik et al. 12 ולהפגין את כוחה של גישה זו לסקור את ההבדלים באסטרטגיות הגנה כימיות בין מיני שיתוף המתרחש. תוצאות דווחו כמספר ממוצע של כדורי מזון נאכלו + שגיאה סטנדרטית (SE) עבור כל מין. כמעט ולא כדורים נאכלו במבחנים עם תמציות אורגניות גולמיים מclathrodes Agelas, Amphimedon compressa, וcauliformis Aplysina. בניג...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

ההליך המתואר במסמך זה מספק פרוטוקול פשוט יחסית, רלוונטי מבחינה אקולוגית מעבדה להערכת הגנות כימיות antipredatory ביצורים ימיים. כאן אנו סוקרים את הקריטריונים החשובים שמרוצים מקבוצה זו של שיטות:

(1) הטורף מתאים. Assay זה ההאכלה מעסיק wrasse bluehead, bifasciatum Thalassoma, אחד מהדגים הנפוצים ביותר על שוניות אלמוגים ברחבי האיים הקאריביים. Bluehead הוא טורף generalist הידוע לדגום מגוון רחב של חסרי ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

אנו מודים לג'יימס מאדה ואהרון קוק על הסיוע בצילום ובעריכה של סרטון זה. המימון ניתן על ידי הקרן הלאומית למדע (OCE-0550468, 1029515).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
דיכלורומתאןפישר סיינטיפיקD37-20
מתנולפישר סיינטיפיקA41220
סידן כלוריד נטול מיםפישר סיינטיפיקC614-500
נוזל העברת חום קריוקולפישר סיינטיפיק20-548-146לרכז ואקום
חומצה אלגינית מלח נתרן צמיגות גבוההMP ביו-רפואי
154723 טבעות מעטפת דיונוןN/AN/Aניתן לרכוש במכולת
דנטוניום בנזואטAldrichD5765
50 מ"ל צינור צנטריפוגה מדורגפישר סיינטיפיק14-432-22
בקבוקון נצנוץ 20 מ"לפישר סיינטיפיק03-337-7
צנרת פסטר חד פעמיתפישר סיינטיפיק13-678-20D
נורות גומי לפילדות פסטרפישר סיינטיפיק03-448-24
נורות אדומות למשלוח גלולותפישר סיינטיפיק03-448-27
250 מ"ל בקבוק תחתון עגולפישר סיינטיפיק10-067E
מתאם בקבוקון נצנוץ לרוטבאפפישר סיינטיפיקK747130-1324
סירות משקולותפישר סיינטיפיק02-202B
מיקרומריתפישר סיינטיפיק21-401-10
5 מ"ל מזרק בוגרפישר סיינטיפיק14-817-53
10 מ"ל מזרק מדורגפישר סיינטיפיק14-817-54
סכין גילוחפישר סיינטיפיקS17302

מקורות

  1. Paul, V. J., ed, Ecological roles of marine natural products. , Comstock Publishing. Associates: Ithaca, N.Y. (1992).
  2. Pawlik, J. R. Marine invertebrate chemical defenses. Chemical Reviews. 93 (5), 1911(1993).
  3. Hay, M. E. Marine chemical ecology: what's known and what's next. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 44 (5), 476-476 (1996).
  4. McClintock, J. B., Baker, B. J. Marine Chemical Ecology. , CRC Press. Boca Raton, Fla. (2001).
  5. Amsler, C. D. Algal Chemical Ecology. , Springer. New York. (2008).
  6. Hay, M. E. Marine chemical ecology: Chemical signals and cues structure marine populations, communities, and ecosystems. Annual Review of Marine Science. 1, 193-212 (2009).
  7. Pawlik, J. R. The chemical ecology of sponges on Caribbean reefs: Natural products shape natural systems. BioScience. 61 (11), 888(2011).
  8. Pawlik, J. R. Antipredatory Defensive Roles of Natural Products from Marine Invertebrates. Handbook of Marine Natural Products. , 677-710 (2012).
  9. Pawlik, J. R., Amsler, C. D., Ritson-Williams, R., McClintock, J. B., Baker, B. J., Paul, V. J. Marine Chemical Ecology: A Science Born of Scuba. Research and Discoveries: The Revolution of Science through Scuba. 39, 53-69 (2013).
  10. Randall, J. E., Hartman, W. D. Sponge-feeding fishes of the West Indies. Marine Biology. 1, 216-225 (1968).
  11. Bakus, G. J., Green, G. Toxicity in sponges and holothurians — geographic pattern. Science. 185, 951-953 (1974).
  12. Pawlik, J. R., Chanas, B., Toonen, R. J., Fenical, W. Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish. 1. Chemical deterrency. Marine Ecology Progress Series. 127, 183-194 (1995).
  13. Schulte, B. A., Bakus, G. J. Predation deterrence in marine sponges — laboratory versus field studies. Bulletin of Marine Science. 50, 205-211 (1992).
  14. Jackson, J. B. C., Buss, L. Allelopathy and spatial competition among coral reef invertebrates. Proceedings of the National Academy of Sciences. 72, 5160-5163 (1975).
  15. Bakus, G. J. Chemical defense mechanisms on the great barrier reef. Australia. Science. 211, 497-499 (1981).
  16. Gemballa, S., Schermutzki, F. Cytotoxic haplosclerid sponges preferred: a field study on the diet of the dotted sea slug Peltodoris atromaculata (doridoidea: nudibranchia). Marine Biology. 144, 1213-1222 (2004).
  17. Voogd, N. J., Cleary, D. F. R. Relating species traits to environmental variables in Indonesian coral reef sponge assemblages. Marine and Freshwater Research. 58, 240-249 (2007).
  18. Mollo, E., et al. Factors promoting marine invasions: a chemolecological approach. Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 4582-4586 (2008).
  19. Randall, J. E. Food habits of reef fishes of the West Indies. Studies in Tropical Oceanography. 5, 665-847 (1967).
  20. O'Neal, W., Pawlik, J. R. A reappraisal of the chemical and physical defenses of Caribbean gorgonian corals against predatory fishes. Marine Ecology Progress Series. 240, 117-126 (2002).
  21. Hines, D. E., Pawlik, J. R. Assessing the antipredatory defensive strategies of Caribbean non-scleractinian zoantharians (Cnidaria): is the sting the only thing. Marine Biology. 159 (2), 389-398 (2012).
  22. Walters, K. D., Pawlik, J. R. Is there a trade-off between wound-healing and chemical defenses among Caribbean reef sponges. Integrative and Comparative Biology. 45 (2), 352-358 (2005).
  23. Leong, W., Pawlik, J. R. Evidence of a resource trade-off between growth and chemical defenses among Caribbean coral reef sponges. Marine Ecology Progress Series. 406, 71-78 (2010).
  24. Leong, W., Pawlik, J. R. Comparison of reproductive patterns among 7 Caribbean sponge species does not reveal a resource trade-off with chemical defenses. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 401 (1-2), 80-84 (2011).
  25. Pawlik, J. R., Loh, T. -L., McMurray, S. E., Finelli, C. M. Sponge Communities on Caribbean Coral Reefs Are Structured by Factors That Are Top-Down, Not Bottom-Up. PLoS ONE. 8 (5), e62573(2013).
  26. Loh, T. -L., Pawlik, J. R. Chemical defenses and resource trade-offs structure sponge communities on Caribbean coral reefs. Proceedings of the National Academy of Science. 111, 4151-4156 (2014).
  27. Miller, A. M., Pawlik, J. R. Do coral reef fish learn to avoid unpalatable prey using visual cues. Animal Behaviour. 85, 339-347 (2013).
  28. Pawlik, J. R., Fenical, W. A re-evaluation of the ichthyodeterrent role of prostaglandins in the Caribbean gorgonian coral, Plexaura homomalla. Marine Ecology Progress Series. 52, 95-98 (1989).
  29. Fenical, W., Pawlik, J. R. Defensive properties of secondary metabolites from the Caribbean gorgonian coral Erythropodium caribaeorum. Marine Ecology Progress Series. 75, 1-8 (1991).
  30. Pawlik, J. R., Fenical, W. Chemical defense of Pterogorgia anceps, a Caribbean gorgonian coral. Marine Ecology Progress Series. 87, 183-188 (1992).
  31. Chanas, B., Pawlik, J. R. Does the skeleton of a sponge provide a defense against predatory reef fish. Oecologia. 107 (2), 225-231 (1996).
  32. Chanas, B., Pawlik, J. R., Lindel, T., Fenical, W. Chemical defense of the Caribbean sponge Agelas clathrodes (Schmidt). Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 208 (1-2), 185-196 (1997).
  33. Wilson, D. M., Puyana, M., Fenical, W., Pawlik, J. R. Chemical defense of the Caribbean reef sponge Axinella corrugata against predatory fishes. Journal of Chemical Ecology. 25 (12), 2811-2823 (1999).
  34. Chanas, B., Pawlik, J. R. Defenses of Caribbean sponges against predatory reef fish II. Spicules, tissue toughness, and nutritional quality. Marine Ecology Progress Series. 127 (1), 195-211 (1995).
  35. Albrizio, S., Ciminiello, P., Fattorusso, E., Magno, S., Pawlik, J. R. Amphitoxin, a new high molecular weight antifeedant pyridinium salt from the Caribbean sponge Amphimedon compressa. Journal of Natural Products. 58 (5), 647-652 (1995).
  36. Assmann, M., Lichte, E., Pawlik, J. R., Köck, M. Chemical defenses of the Caribbean sponges Agelas wiedenmayeri and Agelas conifera. Marine Ecology Progress Series. 207, 255-262 (2000).
  37. Kubanek, J., Fenical, W., Pawlik, J. R. New antifeedant triterpene glycosides from the Caribbean sponge Erylus Formosus. Natural Product Letters. 15 (4), 275-285 (2001).
  38. Pawlik, J. R., McFall, G., Zea, S. Does the odor from sponges of the genus Ircinia protect them from fish predators. Journal of Chemical Ecology. 28 (6), 1103-1115 (2002).
  39. Waddell, B., Pawlik, J. R. Defenses of Caribbean sponges against invertebrate predators. I. Assays with hermit crabs. Marine Ecology Progress Series. 195, 125-132 (2000).
  40. Waddell, B., Pawlik, J. R. Defense of Caribbean sponges against invertebrate predators. II. Assays with sea stars. Marine Ecology Progress Series. 195, 133-144 (2000).
  41. Burns, E., Ifrach, I., Carmeli, S., Pawlik, J. R., Ilan, M. Comparison of anti-predatory defenses of Red Sea and Caribbean sponges. I. Chemical defense. Marine Ecology Progress Series. 252, 105-114 (2003).
  42. Jones, A. C., Blum, J. E., Pawlik, J. R. Testing for defensive synergy in Caribbean sponges: Bad taste or glass spicules. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 322 (1), 67(2005).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

אקולוגיה כימית ימיתבדיקה ביולוגית של הזנת דגיםמיצוי רקמותהכנת מטריצת מזוןBluehead Thalassomaיצירת כופתיותהערכת הגנה כימיתהפרדה מודרכת בבדיקה ביולוגית
מעבדה מבדק-האכלת דגים לבחינת פעילות Antipredatory של משני מטבוליטים מהרקמות של אורגניזמים ימיים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.