Method Article

שיטה פשוטה וזולה לקביעה קרה רגישות והסתגלות בעכברים

DOI:

10.3791/52640

⸱

March 17th, 2015

 ,  ,  , 
1MSTP, Neuroscience Program, Washington University in St. Louis, 2Washington University Pain Center, Department of Anesthesiology, Washington University in St. Louis

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בדיקת הכף הקרה (CPA) מודדת היענות לקור בין 30 מעלות צלזיוס ל-5 מעלות צלזיוס, ויכולה גם למדוד הסתגלות לקור. פרוטוקול זה מתאר כיצד להשתמש ב-CPA כדי למדוד רגישות יתר לקור, שיכוך כאבים והסתגלות בעכברים.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

רגישות יתר לקור היא בעיה קלינית חמורה, המשפיעה על תת-קבוצה רחבה של חולים וגורמת לירידה משמעותית באיכות החיים. בדיקת הכף הקרה מאפשרת הערכה אובייקטיבית וזולה של רגישות לקור בעכברים, ויכולה לכמת הן משככי כאבים והן רגישות יתר. עכברים מתאקלמים על צלחת זכוכית, וכדור קרח יבש דחוס מוחזק על משטח הזכוכית מתחת לכף האחורית. ההשהיה לנסיגה מזכוכית הקירור משמשת כמדד לרגישות לקור.

תחושת קור חשובה גם להישרדות באזורים עם שינויי טמפרטורה עונתיים, וכדי לשמור על רגישות בעלי חיים חייבים להיות מסוגלים להתאים את סף התגובה התרמית שלהם כך שיתאימו לטמפרטורת הסביבה. מבחן הכף הקרה (CPA) מאפשר גם לחקור הסתגלות לשינויים בטמפרטורת הסביבה על ידי בדיקת הרגישות לקור של עכברים בטמפרטורות הנעות בין 30 מעלות צלזיוס ל-5 מעלות צלזיוס. עכברים מתאקלמים כמתואר לעיל, אך לוחית הזכוכית מקוררת לטמפרטורת ההתחלה הרצויה באמצעות קופסאות אלומיניום (או חבילות נייר אלומיניום) מלאות במים חמים, קרח רטוב או קרח יבש. טמפרטורת הצלחת נמדדת במרכז באמצעות בדיקת צמד תרמי מסוג T נימה. לאחר שהצלחת הגיעה לטמפרטורת ההתחלה הרצויה, החיות נבדקות כמתואר לעיל.

בדיקה זו מאפשרת בדיקה של עכברים בטמפרטורות הנעות בין תמימות למזיקות. ה-CPA מניב תגובות התנהגותיות חד משמעיות ועקביות בעכברים לא פצועים וניתן להשתמש בו כדי לכמת רגישות יתר ומשככי כאבים. פרוטוקול זה מתאר כיצד להשתמש ב-CPA כדי למדוד רגישות יתר לקור, שיכוך כאבים והסתגלות בעכברים.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מדידת היענות קרה במכרסמים היא חשובה לשיפור הבנתנו את המנגנונים האפשריים של רגישות קרה בבני אדם תחת שני תנאים נורמלים ופתולוגיים. קר Plantar Assay (CPA), שפותח במקור לפני מספר שנות 1, נועדה ליצור תגובות לשחזור, חד-משמעיות עכבריות התנהגות לגירוי קר נשא בRT. יותר שיפורים האחרונים של assay זה אפשרו את המדידה לשחזור של רגישות קרה במגוון רחב של טמפרטורות 2. שני הגרסאות גם נועדו להיות יחסית תפוקה גבוהה, וזול לשימוש.

התקדמות רבה נעשה בהבנת המנגנונים של רגישות קרה באמצעות שיטות התנהגותיות אחרות. שיטה אחת היא מבחן אידוי אצטון, הכולל מספיג או ריסוס אצטון על כפת העכבר ומדידת משך זמן שמבלה העכבר מצליף 3,4 הכפה. לרוע המזל,התגובות לאידוי אצטון הם מבולבלות על ידי התחושה הרטובה והריח של אצטון. כמו כן, הגירוי הקר שחל במבחן אידוי אצטון יכול להשתנות בהתאם לכמות של אצטון מיושם, וקשה לכמת. לבסוף, יש לי עכברים ללא כל פגע תגובות מינימליות לאצטון בתחילת המחקר, מה שהופך את זה אי אפשר למדוד שיכוך כאבים בהיעדר רגישות יתר בשיטה זו.

נוסף assay הקלאסי לתגובות קרות הוא assay קפיצי זנב, שבו זמן האחזור לנסיגה נמדד לאחר הזנב הוא שקוע ב5,6 מים קרים. בעוד התגובות התנהגותיות בassay זה הן חד משמעיות וassay מודד תגובות לטמפרטורה מסוימת, בעלי החיים חייבים להיות מרוסנים במהלך בדיקה, אשר יכולה לשנות את היענות קרה באמצעות מנגנוני מתח מושרה היטב תיארו משכך כאבים 7.

כלי נוסף נפוץ הוא מבחן הצלחת הקר, המודד את ההתנהגותתגובות של עכברים אחרי שהם מונחים על צלחת מקורר פלטייה 8-10. בעוד כלי זה מספק מידע על תגובות של בעלי חיים בטמפרטורות מסוימות, יש לו גם נעשה שימוש לא עקבי; קבוצות שונות מדדו סוגים שונים של תגובות הכוללים מספר הקפיצות 8,11, חביון התגובה הראשונה 8,11- 13, ומספר הכפה מרים 11,13,14 עם תוצאות שונות מאוד. Assay הצלחת הקר הוא גם תפוקה נמוכה יחסית כמו שרק חיה אחת יכול להיבדק בכל פעם, וזה דורש מכשיר פלטייה יקר ושביר.

מבחן העדפת טמפרטורת 2-הצלחת הוא נגזר נפוץ של מבחן הצלחת הקרה שמודד את הכמות היחסית של זמן שבעלי חיים להוציא על 2 צלחות מחוברות של טמפרטורות שונות 9,15- 17. assay הנפוץ דומה נוסף הוא assay שיפוע התרמית, שבו כמות הזמן שמבלים עכברים באזורי טמפרטורה שוניםהנע בין 5 ° C ו -45 ° C על צלחת מתכת ארוכה נמדד 16. בעוד מבחני אלה מאפשרים השוואה של טמפרטורות, לא ברור אם ההתנהגות מייצגת סלידת טמפרטורה או להעדפת טמפרטורה.

לבסוף, assay הצלחת קרה הדינמי נעשה שימוש כדי למדוד כמה עכברים להגיב לשינויים בטמפרטורות הסביבה 18. שיטה זו כוללת הצבת עכברים במכשיר פלטייה RT וramping אותו עד 1 ° C תוך מדידה כמה העכברים לקפוץ או ללקק את כפותיהם בטמפרטורות צלחת שונות. אמנם זה בוחן כיצד עכברים להסתגל לסביבת קירור, הוא אינו מספק דרך לבדוק כמה עכברים להגיב לגירוי קר בהגדרה של טמפרטורת סביבה קרירה. בנוסף, הוא דורש ציוד יקר לביצוע ואינו מספק דרך להסתגל לעכברי ציוד הבדיקה לפני מדידת הרגישות הקרה שלהם.

כדי להשלים את מבחני האלה, רו"ח בדיקות acclimaתגובות טד לגירוי קור מוגדר היטב במגוון רחב של תחומי טמפרטורה, או בתהליך של הסתגלות לטמפרטורות סביבה קרה. זה יכול לבדוק עד 14 עכברים בכל פעם עם המנגנון הנוכחי שלנו, עם הפוטנציאל להיות scaled עד בזול לבדיקת תפוקה גבוהה.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל פרוטוקולי העכבר היו בהתאם למכונים לאומי לבריאות הנחיות ואושרו על ידי ועדת בעלי החיים הלימודים של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת וושינגטון (סנט לואיס, מיזורי).

1. הכנת צלחת הבדיקה ומארזים

  1. לנקות את משטח הזכוכית.
  2. Secure תרמי הבדיקה חוט T-הסוג אל פני השטח באמצע צלחת הזכוכית עם קלטת מעבדה.
  3. הנח את המארזים של בעלי החיים על צלחת הזכוכית בשורה אחת יחד אמצע הצלחת.
  4. השחל את תרמי הבדיקה דרך מתחם בעלי החיים המרכז ולחבר אל אוגר נתונים. הפעל אוגר נתונים על תוך כיבוי אוטומטי תכונת הכיבוי, ולצרף את אוגר נתונים למחשב באמצעות הכבל המסופק.
    1. אם הקלטת טמפרטורת הצלחת במהלך הניסוי, לפתוח את התוכנה לוגר נתונים כדי להתחיל בהקלטת טמפרטורות צלחת.
    2. במידת צורך, להתאים את התוכנה מחדשכבל טמפרטורת צלחת אחת לשנייה.
    3. להתחיל בהקלטת טמפרטורות באמצעות התוכנה ארוזה עם אוגר נתונים התרמי.
  5. הפרד את המארז עם מוסיף שחור כדי למנוע אינטראקציה חזותית בין עכברים.
  6. עמדה משקפת מתחת לזכוכית כך שהחלק התחתון של המארזים גלוי ממצב של ישיבה נוח.

2. התחממות / קירור צלחת הזכוכית

  1. מלא תיבות אלומיניום עם מים מחוממים, קרח רטוב, או קרח יבש ולמקם אותם כראוי על צלחת הזכוכית (גם מנות רדיד אלומיניום מלאים בקרח יבש יכולות לשמש כדי לקרר את הזכוכית; איור 1) 2.
    1. לבדיקה ב 30 מעלות צלזיוס, מקם את קופסות האלומיניום כ 0.25 '' ממארזי בעלי החיים (איור 2) 2.
      1. הגדר circulator מים מחומם בכל צד של צלחת הזכוכית. הגדר את circulator ל45-60 מעלות צלזיוס, ואותנודואר זה כדי למלא את תיבות אלומיניום עם זרם קבוע של מים חמים (איור 1 ג) 2.
      2. מקם את circulators כך שהמים החמים מתיבות האלומיניום מנקז ישירות בחזרה למאגר של circulator בכל צד (איור 1 ג) 2.
    2. לבדיקה ב RT, לעזוב את התיבות ריק (איור 2) 2.
    3. לבדיקה בגיל 17 ° C, למקם את התיבות כ 0.25 '' ממארזי בעלי החיים משני הצדדים ולמלא עם קרח רטוב (איור 2) 2.
    4. לבדיקה ב 12 ° C, למקם את התיבות כ -1.25 '' ממארזים מכל צד ולמלא עם קרח יבש (איור 2) 2.
    5. לבדיקה ב5 מעלות צלזיוס, למקם את התיבות כ 0.25 '' ממארזים מכל צד ולמלא עם קרח יבש (איור 2) 2.
      1. כאשר קירור הכוס בקרח יבש, לוודא שיש אוורור מספיק כדי למנוע הצטברות CO 2 בחדר.
  2. חכה לזכוכית להגיע לטווח הטמפרטורה הרצוי.
  3. הוסף את העכברים למארזים על הצלחת.
    הערה: מחולל רעש לבן ניתן להשתמש כדי להקטין מטרדי רעש.
  4. חכה לעכברים להסתגל.
    הערה: במתקן שלנו זה לוקח בערך 2.5 שעות, אך עשויים להשתנות באופן משמעותי המבוסס על דיור בעלי חיים ותנאי טיפול.
  5. לשמור על הזכוכית במגוון הטמפרטורה הרצויה על ידי הבטחה כי התיבות נשמרות מלאה מים התחממו, קרח רטוב, או קרח יבש.
    הערה: עם המנגנון שלנו את התיבות צריכה להיות ומילא עם קרח בערך כל 90 דקות.
    הערה: למצב C ° 17, זה מועיל לרוקן את רוב המים מקופסות האלומיניום דרך חורי הניקוז לפני המילוי אותו עם קרח. זה יתייצב, ויחסי ציבור הטמפרטורה טובים יותרהצפת אירוע
    הערה: כמות הקרח היבש המדויקת משתנות עונתית, אבל באופן כללי שמירה על קופסות יותר מ ¼ מלאים לאורך כל אורכו של התיבה ישמור טמפרטורה קבועה.

3. בדיקת העכברים בטמפרטורות קבועות

  1. מחוץ לחדר התנהגותיות, למלא דלי קרח כמחצית מלאה של קרח יבש.
  2. שימוש בפטיש או פטיש, לרסק את הקרח היבש לאבקה דקה.
    הערה: מילוי יתר של הדלי יקשה לרסק את הקרח היבש באופן מלא באבקה.
  3. באמצעות סכין גילוח ישר או מספריים, לחתוך את החלק העליון את מזרק 3 מיליליטר.
  4. באמצעות מחט 21 G, לתקוע 3 חורים בצדדים מנוגדים של המזרק (הכולל של 6 חורים).
    הערה: חורים אלה יקטינו את הלחץ שנוצר על ידי סובלימציה תוך דחיסת הקרח היבש. המזרק החתוך ניתן לעשות שימוש חוזר בניסויים מרובים.
  5. קח את המזרק, אבקת קרח יבשה, ושעון עצר שנערך ביד לחדר התנהגותיות.
  6. למלא את תא מזרק חצי מלא של אבקת קרח יבשה. החזק את הקצוות של המזרק נגד אובייקט שטוח, ובתקיפות לדחוס את האבקה באמצעות הבוכנה. היזהר; בוכנת הפלסטיק עלולה לכופף או לשבור מהלחץ. אם זה יקרה, להחליף את הבוכנה של מזרק חדש.
  7. להאריך את הקצה של גלולה הקרח היבשה הדחוסה עבר הקצה של המזרק.
  8. עכברי מבחן כי הם מלא במנוחה.
    1. על 30 מעלות צלזיוס, 23 ° C ו -17 ° C, עכברי מבחן שכל 4 כפות על הזכוכית ולא זזו, אבל לא ישן 19 באופן מלא.
    2. בגיל 12 מעלות צלזיוס, 5 מעלות צלזיוס, עכברי מבחן, כי הם על 2 כפות או 4 כפות ולא זזו או לקפוץ.
  9. השימוש במראות למיקוד, בעדינות אך בתקיפות לחצו על סומק גלולה השטוח על משטח הזכוכית מתחת לhindpaw העכבר (איור 1 א) 2. התחל היד-טיימר.
  10. לעצור את שעון העצר ולהסיר את הכדור כאשר העכבר מתרחק מהזכוכית מקוררת.
    הערה: תנועת הנסיגה יכולה להיות אנכית או אופקית.
    1. אם העכבר נע לזמן קצר מאוד כפה ולאחר מכן מחזיר אותו אל פני השטח הקירור, תמשיך עיתוי וגירוי עד העכבר עושה צעד קבוע משם.
      הערה: המעבדה שלנו משתמשת בזמן גירוי מקסימאלי של 20 שניות לעכברים ברוב המכריע של המקרים.
  11. חזור על הליך בדיקה זו לפחות עד 3 ערכים על כל כף רגל של כל בעלי חיים שנאספו. ניסויים נפרדים בדיקת כפות הפוכות באותו העכבר על ידי לפחות 7 דקות, ומשפטים רצופים נפרדים על כל כף רגל אחת על ידי לפחות 15 דקות.
  12. במידת הצורך, להשתמש בעוביים שונים של זכוכית כדי ליצור שיעורים שונים של קירור (איור 3) 1.
    הערה: שיעור הקירור קשור ביחס הפוך עם העובי של הזכוכית.

4. בדיקת העכברים במהלך קרה הסתגלות

שימו לב: זה פרוטוקול חלופי המאפשר בדיקה כplat הזכוכיתדואר מתקרר, ולא פעם אחת הצלחת התייצבה והעכברים יש להתאים באופן מלא לסביבה הקרה.

  1. בצע את ההוראות המופיעות בסעיף 1 להקמת המנגנון.
  2. בצע את ההוראות המופיעות בסעיף 3 לקחת מידות בסיס בRT (איור 7 א) 2.
  3. טרום לקרר את תיבות אלומיניום עם קרח יבש.
  4. ברגע ששיהוי נסיגת בסיס נמדד, למקם את תיבות precooled על הצלחת כ -1.25 '' מהמארזים משני הצדדים (איור 7 א, חץ שכותרתו "קרח יבש הוסיף") 2.
  5. בצע את ההוראות המופיעות בסעיף 3 כדי לבצע מדידות כצלחת הזכוכית מתקררת, במדידות לעתים קרובות ככל האפשר.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התגובות התנהגותיות שהושרו מעכברים מתחילים ב 30 מעלות צלזיוס, 23 ° C, 17 ° C, ו- 12 ° C הן (איור 4 א) 20 לשחזור מאוד. על מנת למדוד את הגירוי הקר המופק תחת hindpaw, עכברים מורדמים עם קטמין / xylazine / קוקטייל acepromazine וכפותיהם הובטחו על הזכוכית על גבי תרמי נימה T-הסוג (איור 4) 20. הזכוכית מקוררת או מחומם למגוון בדיקות הרצוי. למרות הצלחת מקוררת באופן אחיד לאורכו של הצלחת (איור 5 א ') 2, יש לציין ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניתן להשתמש ב-CPA כדי להעריך רגישות לקור והסתגלות לקור בעכברים. הוא מספק דרך יעילה ומשתלמת למדוד תגובות קור בבעלי חיים לא מרוסנים ומתאקלמים במגוון רחב של טווחי טמפרטורות. הוא גם מספק תגובה התנהגותית חד משמעית עם משתנה פלט שניתן לכמת ולנתח בקלות. הוא כבר שימש להערכת שינויים ברגישות לקור הנגרמת על ידי דלקת1, פגיעה נוירופתית1, משככי כאבים1, נוקאאוט גנטי20 ומחקרי אבלציה גנטית של נוירונים26. ניתן לשנות אותו כדי למדוד תגובות למגוון קצבי קירור באמצעות עוביים שונים של ז...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מבקשים להודות לתרומות מכל מעבדת Gereau לעריכת כתבי היד. עבודה זו נתמכת על ידי קרנות NINDS 1F31NS078852 ל-DSB וקרן NINDS NS42595 ל-RWG.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
בדיקת צמד תרמי מסוג TPhysitempIT-24pמשמש למדידת טמפרטורת פני השטח של הזכוכית (http://www.physitemp.com/products/probesandwire/)
צלחת זכוכיתחברת זכוכית מקומית (בסנט לואיס, Stemmerich Inc)אנו משתמשים בזכוכית פיירקס (צף בורוסיליקט). המעבדה שלנו משתמשת בדרך כלל ב-1/4 אינץ', אך 3/16 אינץ' ו-1/8 אינץ' שימושיים גם
נתונים תרמייםExtechEA15Thermologger כדי לעקוב אחר טמפרטורת הזכוכית (http://www.extech.com/instruments/product.asp?catid=64&prodid=408)
3 מ"ל מזרקBD309657החלק העליון מנותק, וקרח יבש נדחס במזרק כדי ליצור מחשב
בדיקה קרהאם משתמשים בלוגר Extech, כל קופסאות
אוניברסיטת וושינגטון בסנט לואיסהן באורך 3 אינץ', רוחב 4.5 אינץ' וגובה 3 אינץ' עם מכסה אטום.  יש חור בגודל 1/2 אינץ' שנקדח בצד אחד קצר של כל קופסה, ליד התחתית. חורים אלה מתמלאים במעצורים מגומי כאשר הקופסאות מלאות בקרח רטוב או במים חמים.
סירקולטור מים מחומםVWRכל דגם סירקולטור מים עם משאבה יעבוד
21 גרם מחטBD305165גודל המחט המדויק אינו חשוב
טיימרכל טיימר יד יעבוד
מראהכל מראה שטוחה תעבוד
לוגר אלומיניום של יד

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. A Novel Behavioral Assay for Measuring Cold Sensation in Mice. Plos ONE. 7 (6), 8(2012).
  2. Brenner, D. S., Vogt, S. K., Gereau, R. W. A technique to measure cold adaptation in freely behaving mice. Journal of Neuroscience Methods. , (2014).
  3. Choi, Y., Yoon, T. W., Na, H. S., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral signs of ongoing pain and cold allodynia in a rat model of neuropathic pain. Pain. 59 (3), 369-376 (1994).
  4. Gauchan, P., Andoh, T., Kato, A., Kuraishi, Y. Involvement of increased expression of transient receptor potential melastatin 8 in oxaliplatin-induced cold allodynia in mice. Neuroscience letters. 458 (2), 93-95 (2009).
  5. Carlton, S. M., Lekan, H. A., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate. Pain. 56 (2), 155-166 (1994).
  6. Pizziketti, R. J., Pressman, N. S., Geller, E. B., Cowan, A., Adler, M. W. Rat cold water tail-flick: A novel analgesic test that distinguishes opioid agonists from mixed agonist-antagonists. European Journal of Pharmacology. 119 (1-2), 23-29 (1985).
  7. Pinto-Ribeiro, F., Almeida, A., Pego, J. M., Cerqueira, J., Sousa, N. Chronic unpredictable stress inhibits nociception in male rats. Neuroscience letters. 359 (1-2), 73-76 (2004).
  8. Karashima, Y., et al. TRPA1 acts as a cold sensor in vitro and in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (4), 1273-1278 (2009).
  9. Knowlton, W. M., Bifolck-Fisher, A., Bautista, D. M., McKemy, D. D. TRPM8, but not TRPA1, is required for neural and behavioral responses to acute noxious cold temperatures and cold-mimetics in vivo. Pain. 150 (2), 340-350 (2010).
  10. Allchorne, A. J., Broom, D. C., Woolf, C. J. Detection of cold pain, cold allodynia and cold hyperalgesia in freely behaving rats. Molecular pain. 1, 36(2005).
  11. Colburn, R. W., et al. Attenuated cold sensitivity in TRPM8 null mice. Neuron. 54 (3), 379-386 (2007).
  12. Dhaka, A., Murray, A. N., Mathur, J., Earley, T. J., Petrus, M. J., Patapoutian, A. TRPM8 is required for cold sensation in mice. Neuron. 54 (3), 371-378 (2007).
  13. Bautista, D. M., et al. The menthol receptor TRPM8 is the principal detector of environmental cold. Nature. 448 (7150), 204-208 (2007).
  14. Obata, K., et al. TrpA1 induced in sensory neurons contributes to cold hyperalgesia after inflammation and nerve injury. The Journal of Clinical Investigation. 115 (9), 2393-2401 (2005).
  15. Tang, Z., et al. Pirt functions as an endogenous regulator of TRPM8. Nature communications. 4, 2179(2013).
  16. Lee, H., Iida, T., Mizuno, A., Suzuki, M., Caterina, M. J. Altered thermal selection behavior in mice lacking transient receptor potential vanilloid 4. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 25 (5), 1304-1310 (2005).
  17. Pogorzala, L. A., Mishra, S. K., Hoon, M. A. The cellular code for Mammalian thermosensation. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 33 (13), 5533-5541 (2013).
  18. Yalcin, I., Charlet, A., Freund-Mercier, M. -J., Barrot, M., Poisbeau, P. Differentiating thermal allodynia and hyperalgesia using dynamic hot and cold plate in rodents. The journal of pain official journal of the American Pain Society. 10 (7), 767-773 (2009).
  19. Callahan, B. L., Gil, A. S., Levesque, A., Mogil, J. S. Modulation of mechanical and thermal nociceptive sensitivity in the laboratory mouse by behavioral state. The journal of pain: official journal of the American Pain Society. 9 (2), 174-184 (2008).
  20. Brenner, D. S., Golden, J. P., Vogt, S. K., Dhaka, A., Story, G. M., Gereau, R. W. A dynamic set point for thermal adaptation requires phospholipase C-mediated regulation of TRPM8 in vivo. Pain. , (2014).
  21. Patwardhan, A. M., Scotland, P. E., Akopian, A. N., Hargreaves, K. M. Activation of TRPV1 in the spinal cord by oxidized linoleic acid metabolites contributes to inflammatory hyperalgesia. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (44), 18820-18824 (2009).
  22. Fujita, F., Uchida, K., Takaishi, M., Sokabe, T., Tominaga, M. Ambient Temperature Affects the Temperature Threshold for TRPM8 Activation through Interaction of Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate. Journal of Neuroscience. 33 (14), 6154-6159 (2013).
  23. Rohacs, T., Lopes, C. M., Michailidis, I., Logothetis, D. E. PI(4,5)P2 regulates the activation and desensitization of TRPM8 channels through the TRP domain. Nature neuroscience. 8 (5), 626-634 (2005).
  24. Daniels, R. L., Takashima, Y., McKemy, D. D. Activity of the neuronal cold sensor TRPM8 is regulated by phospholipase C via the phospholipid phosphoinositol 4,5-bisphosphate. The Journal of biological chemistry. 284 (3), 1570-1582 (2009).
  25. Zhang, H., et al. Neurokinin-1 receptor enhances TRPV1 activity in primary sensory neurons via PKCepsilon: a novel pathway for heat hyperalgesia. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 27 (44), 12067-12077 (2007).
  26. Wang, H., Zylka, M. J. Mrgprd-expressing polymodal nociceptive neurons innervate most known classes of substantia gelatinosa neurons. The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (42), 13202-13209 (2009).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cold Plantar AssayCold SensitivityMouse AdaptationDry Ice PelletGlass PlateThermocouple ProbeWithdrawal LatencyAnalgesia MeasurementHypersensitivity TestTemperature Acclimation

Related Articles