האלקטרורטינוגרמה (ERG) היא פוטנציאל חשמלי שנוצר על ידי הרשתית בתגובה לאור. מאמר זה מתאר כיצד להשתמש ב-ERG כדי להעריך את תפקוד הרשתית, בחולדות מותאמות לחושך, וכיצד ניתן להשתמש בו כדי להעריך התערבות נוירו-פרוטקטיבית, במקרה הנוכחי התניה איסכמית מרחוק.
מאמר שיטה
האלקטרורטינוגרמה (ERG) היא פוטנציאל חשמלי שנוצר על ידי הרשתית בתגובה לאור. מאמר זה מתאר כיצד להשתמש ב-ERG כדי להעריך את תפקוד הרשתית, בחולדות מותאמות לחושך, וכיצד ניתן להשתמש בו כדי להעריך התערבות נוירו-פרוטקטיבית, במקרה הנוכחי התניה איסכמית מרחוק.
ה-ERG הוא הסכום של כל פעילות הרשתית. ה-ERG מוקלט בדרך כלל מהקרנית, המשמשת כאנטנה שאוספת ומסכמת אותות מהרשתית. ה-ERG הוא מדד רגיש לשינויים בתפקוד הרשתית שהם פאן-רשתית, אך פחות יעיל לאיתור נזק המוגבל לאזור קטן של הרשתית. בעבודה הנוכחית אנו מתארים כיצד להקליט את ה-ERG 'הבזק', שהוא הפוטנציאל שנוצר כאשר הרשתית נחשפת להבזק אור קצר. אנו מתארים שיטות של הרדמה, מידריאזיס וניהול הקרנית במהלך ההקלטה; כיצד לשמור על הרשתית חשוכה מותאמת; חומרי אלקטרודה ומיקום; הטווח והכיול של אנרגיית הגירוי; רישום פרמטרים וחילוץ נתונים. אנו מתארים גם שיטה להשראת איסכמיה בגפה אחת, וכיצד להשתמש ב-ERG כדי להעריך את ההשפעות של איסכמיה מרוחקת זו מהרשתית על תפקוד הרשתית לאחר נזק לאור. מתואר פרוטוקול שני הבזקים המאפשר בידוד של הרכיב מונע החרוט של ה-ERG המותאם לחושך, ובכך את ההפרדה של רכיבי המוט והחרוט. מכיוון שניתן לתעד אותו בטכניקות זעיר פולשניות, נעשה שימוש נרחב ב-ERG במחקרים על הפיזיולוגיה, הפרמקולוגיה והטוקסיקולוגיה של הרשתית. אנו מתארים דוגמה אחת לתועלת זו, שבה נעשה שימוש ב-ERG כדי להעריך את תפקוד הרשתית שנפגעה מאור, עם ובלי התערבות נוירו-פרוטקטיבית; התניה מוקדמת על ידי איסכמיה מרחוק.
ERG הוא פוטנציאל חשמלי שנוצר על ידי הרשתית בתגובה לאור, ונרשם מפני הקרנית של העין. כאשר תנאים של הקלטה מנוהלים בקפידה, ERG ניתן להשתמש במגוון דרכים כדי להעריך את תפקוד רשתית. כאן אנו תיארנו כיצד להקליט את 'הבזק ERG', את הפוטנציאל שנוצר כאשר הרשתית חשופה לבזק קצר, בהיר מוצג ברקע Ganzfeld. Ganzfeld מפזר את אור homogenously והבזק של אור מגיע לכל הרשתית כ אחיד. אם הרשתית כהה מותאמת לפני ההקלטה, וכהה ההסתגלות נשמר כחיה מוכנה להקלטה, ERG הושג מופק על ידי שני קולטני האור המוט וחרוט.
יש פלאש ERG הכהה מותאמת גל אופייני, שכבר נותח בשתי דרכים. ראשון, מוקדם ומאוחרת רכיבים של צורת גל ERG כבר להבחין, וקשורים לרצף של נוירוןהפעלת אל ברשתית. הרכיב הראשון הוא קצר חביון פוטנציאל הולך שלילי, הגל (איור 1). זה ואחריו פוטנציאל הולך חיובי, נקרא ב-הגל. שלב העלייה של ב-גל תערוכות תנודות, שנחשבים רכיב נפרד (פוטנציאלי oscillatory או Ops). הגל נחשב שיופקו על ידי קולטני אור, ב-הגל על ידי תאים של שכבת הגרעין הפנימית, וOps על ידי תאי amacrine 1.
בהתבסס על כוח הגירוי, תגובות להבזקים מאוד עמומים כינו את תגובת סף scotopic אפשרית. תגובת סף scotopic הוא הבין שיופקו מתאי הגנגליון ברשתית 2-4. שנית, ניתן להפריד פלאש ERG על ידי הסתגלות אור, או על ידי פרוטוקול שני פלאש מתואר להלן, למרכיבי rod- ומונע קונוס. בתנאי photopic, הגל הוא לא להבחין בחולדות, כי אוכלוסיית קונוס היא נמוכה, אבל Ops וב-גל הואברור 5. בפרימטים, רשתיות שיש אוכלוסיות חרוט גבוהות, שני rod- ומסלולי cone- ליצור גל לזיהוי 6.
שני מדדים שימושיים לעתים קרובות מופקים פלאש ERG הם אמפליטודות של a- וB-גלים, נמדדה כמו באיור 1, עם תגובות אופייניות הבזק מוצגות באיור 2. כאשר אוכלוסיית קולטי האור מצטמצמת, לדוגמא על ידי חשיפה למזיקה בהיר אור, כל הרכיבים של ERG מופחתים. התערבויות neuroprotective, כגון מרוחק נפשית מראש איסכמי (RIP), יכולות להיות מאומתות על ידי השמירה על אמפליטודות של a- וB-גלים (איור 3). לסיכום, הניתוח של ERG מאפשר השוואות בין בריא, האור הפגום ורשתית neuroprotected.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול זה כדלקמן הנחיות טיפול בבעלי החיים של אוניברסיטת סידני.
1. אלקטרודות ביצוע
2. חיבור וכיול של גירוי האור וERG סט-אפ
3. יום לפני הניסויים ERG
4. יום של ניסויים ERG
5. איסכמיה מרחוק
6. נזק קל
7. ERG הפקת נתונים וניתוח
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הפרוטוקול יכול לשמש למדידת תפקוד ראייה של רשתית המכרסמים in vivo. הגל, מדד לתפקוד קולטי האור, וב-הגל, מדד לתפקוד רשתית פנימי, הם מבואר באיור 1.
עליות-נשלט מוט ERG האות עם גירוי האור הגובר, כפי שמוצג באיור 2 א. הגל מתברר ב~ cd.sm סקוטי 0.4 יומן -2 ואת המשרעת של העליות-הגל עד רוויה בcd.sm סקוטי 2.5 יומן -2 (לא מוצג). הפרדיגמה הבזק התאום נעשתה שימוש כד...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
שיטת ERG הכהה מותאמת הבזק שתוארה לעיל היא שיטה אמינה להערכת תפקוד רשתית בחולדות. שני-הגל ו- B-הגל הופחתו נזק קל. מרחוק נפשית מראש איסכמי מיתנו ירידות מושרה נזק קלים ב- הגל ו- B-גל. שימור זה של תפקוד רשתית עולה כי נפשית מראש איסכמי מרחוק מושרה neuroprotection, מזכיר צורות אחרות של מגן נפשית מראש כגון היפוקסיה, איסכמיה ופעילות גופנית 8-10. אות ERG נרשמה נקבעה על ידי שלוש קבוצות של גורמים - הגדרת ההקלטה, פרמטרים של גירוי האור, והמצב של בעלי החיים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
יונתן אבן היא מנהל CSCM Pty Ltd
המחברים מודים לסיוע של הגב 'שרון Spana בניטור מכרסמים, טיפול וניסויים. תמיכה במימון דוקטורט כבר ניתן על ידי אוניברסיטה של סידני ואוסטרלי מרכז מחקר למצוינות בחזון.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מחשב | |||
| PC Powerlab, חומרת רכישה 4 ערוצים | AD Instruments | PL 35044 | רכישה של ERG |
| Animal Bio Amp | AD Instruments | FE 136 | מגבר |
| לתרשים מעבדה | ERG AD Instruments | תוכנה לאיסוף אותות | |
| Ganzfield | פתרונות פוטומטריים | FS-250A | גירוי אור |
| Ganzfield מערכת הפעלה | פוטומטריים | ||
| מחקר רדיומטר | טכנולוגיות אור בינלאומיות | ILT-1700 | כיול סדרת אור |
| לוקס מטר | LX-1010B | לבדוק אילומנציה אור אדום | |
| Excel | |||
| Microsoft חוטי עופרת | AD מכשירים | חיבור חיובי, שלילי אלקטרודות קרקע למגבר | |
| חוטי עופרת - תנין | AD מכשירים | גנזפילד קרקע וחומרת רכישה למחשב | |
| חוט פלטינה 95% | A& E מתכות | אלקטרודה פוסטיב | |
| אלקטרודה פה Ag / AgCl גלולה | SDR | E205 | אלקטודה שלילית |
| 26 G מחט | BD | קרקע אלקטודה | |
| משאבת | |||
| אמבט | |||
| צינורות | |||
| מערכת שמיכה הומותרמית עם בדיקה גמישה | Harvard Appartus | 507222F | |
| אטרופין 1% עם | באוש & | Mydriasis מקומי | |
| Proxmethycaine 0.5% w/v | Bausch & הרדמה | מקומית | |
| דמעות ויסקו טיפות עיניים | נוברטיס | קרבומר פולימר | |
| חוט | נסוג עפעף | ||
| פינצטה | |||
| דבק רב פעמי | Blu tac | פנס ראש אדום עמום. אלקטרודות הדבקה | |
| מצעים | |||
| קטמיל - קטמין 100 מ"ג/מ"ל - 50 מ"ל | Troy Laboratories Pty Ltd | דיסוציאטיבי | |
| קסיליום - קסילזין 100 מ"ג/מ"ל - 50 מ"ל | Troy Laboratories Pty Ltd | ||
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה