כאן אנו מציגים פרוטוקול המתאר זלוף מחומצן במכונה מחוץ למקום של שתלי כבד מתורם. מאמר זה מכיל פרוטוקול שלב אחר שלב לרכישה והכנת שתל הכבד לזלוף מכונה, הכנת נוזל הזלוף, הפעלת מכונת הזלוף וביצוע זלוף מכונה נורמותרמית מחומצנת של שתל הכבד.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
כאן אנו מציגים פרוטוקול המתאר זלוף מחומצן במכונה מחוץ למקום של שתלי כבד מתורם. מאמר זה מכיל פרוטוקול שלב אחר שלב לרכישה והכנת שתל הכבד לזלוף מכונה, הכנת נוזל הזלוף, הפעלת מכונת הזלוף וביצוע זלוף מכונה נורמותרמית מחומצנת של שתל הכבד.
בניגוד לשימור קונבנציונלי סטטי הקר (0-4 מעלות צלזיוס), זלוף מכונה באתרו לשעבר עשוי לספק שימור טוב יותר של כבדי תורם. זלוף הרציף של איברים מספק את ההזדמנות כדי לשפר את איכות איבר ומאפשר הערכת כדאיות באתרו לשעבר של כבדי תורם לפני ההשתלה. מאמר זה מספק וידאו צעד אחר צעד לפרוטוקול באתרו לשעבר זלוף normothermic מכונה (37 מעלות צלזיוס) של כבדי תורם אנושיים באמצעות מכשיר המספק זלוף pulsatile לחץ וטמפרטורה מבוקרת של העורק הכבד וזלוף הרציף של וריד השער. נוזל זלוף הוא מחומצן על ידי שתי oxygenators קרום סיב חלול והטמפרטורה יכולה להיות מוסדרת בין 10 ° C ו 37 מעלות צלזיוס. במהלך זלוף, הפעילות המטבולית של הכבד, כמו גם את מידת פגיעה יכולה להיות מוערכת על ידי הניתוח ביוכימי של דגימות שנלקחו מנוזל זלוף. זלוף מכונת הוא כלי מאוד מבטיחכדי להגדיל את המספר של כבדים המתאימים להשתלה.
השיטה הנוכחית של שימור איברים בהשתלת כבד היא לשטוף את עם והאחסון הבא של כבדי תורם בקור (0-4 מעלות צלזיוס) שימור נוזלים (כגון האוניברסיטה ויסקונסין פתרון או פתרון היסטידין-טריפטופן-ketoglutarate). שיטה זו נקראת אחסון סטטי כקר (SCS). למרות שקצב חילוף החומרים של כבדים ב0-4 מעלות צלזיוס הוא נמוך מאוד, יש עדיין ביקוש לרקמת 0.27 μmol חמצן / דקה / g כבד, שלא יכול להיות מסופקת ב1 SCS. השיטה המקובלת של SCS, ולכן, תוצאות במידה מסוימת של פגיעה (נוספת) של כבדי תורם. בעוד סכום זה של פציעת שימור הוא לא בעיה בכבד תורם באיכות טובה, זה יכול להיות גורם קריטי והגבלה בכבדים הכי מוצלח שכבר סבלו במידה מסוימת של פגיעה בתורם. מסיבה זו, כבדים עם איכות לא טובים או תורם קריטריונים מורחב כבדים (ECD) מה שנקרא לעתים קרובות דחו להשתלה כo הסיכוןכישלון שתל המוקדם F נחשב גבוהה מדי. שיעורים גבוהים של תפקוד מתעכב שתל, שאינו תפקיד עיקרי, ומגבלות שאינן בהשקת מרה (NAS) תוארו במקבלי כבדים מתרומה לאחר מות דם (DCD), תורמים או מקבלי שתלי steatotic 2 מבוגרים. NAS הוא אחד גורמים עיקריים לתחלואה ותמותה לאחר השתלה כבד. NAS עלול להתרחש בשני צינורות המרה תורמת חוץ-וintrahepatic ויכול להיות מלווה בבוצת המרה intraductal ושחקנים היווצרות 3,4. למרות שהוא חשב אטיולוגיה של NAS להיות כמה גורמים ופציעת איסכמיה / reperfusion של צינורות המרה בשימור שתל והשתלה זוהתה כ2,5 מנגנון בסיסי גדול. השתלה של שתל DCD זוהתה כאחד מגורמי הסיכון החזקים ביותר לפיתוח NAS. השילוב של תקופה של איסכמיה החמה בתורם DCD, איסכמיה הקרה בשימור איברים, ולאחר מכן reperfusionהוא חשב פגיעה בנמען שתהיה אחראי לפגיעה בלתי הפיכה של דרך המרה, אשר, בשילוב עם יכולת התחדשות לקויה של צינורות המרה, תוצאות בצלקות והיצרות של דרך המרה fibrotic לאחר השתלה כבד 2,5. NAS דווח בעד 30% מהחולים שטופלו בכבד DCD 6-8. זה הפך להיות ברור כי השיטה הנוכחית של SCS של שתלי כבד להשתלה אינה מספיקה לכבדי ECD preinjured כגון אלה מתורמי DCD. יש צורך בשיטות אלטרנטיביות כדי להגדיל ולייעל את השימוש של כבדי ECD להשתלה.
זלוף מכונת (MP) הוא שיטת שימור איברים שעשויים לספק שימור טוב יותר של איברי תורם, בהשוואה לSCS. חבר הפרלמנט יכול להיות רלוונטי במיוחד לשימור שתלי ECD. יתרון חשוב של חבר הפרלמנט הוא האפשרות לספק חמצן לשתל במהלך תקופת השימור. ניתן לבצע MP בטמפרטורות שונות,אשר סווג כהיפותרמיה (0-10 מעלות צלזיוס), subnormothermic (10-36 מעלות צלזיוס) וnormothermic MP (36-37 ° C) (תמ"א). בהתאם לטמפרטורה המשמשת לMP, הסוג של זלוף נוזל צריך להיות מותאם ועם עלייה בחמצן יותר טמפרטורה צריך להיות מסופק. היישום הקליני הראשון של חבר פרלמנט בהשתלת כבד אנושי התבסס על זלוף היפותרמיה ללא חמצון פעיל של 9,10 זלוף הנוזל. במודלים של בעלי חיים, MP היפותרמיה מחומצן (0-10 מעלות צלזיוס) הוכח להיות השפעה מגנה מפני איסכמיה / פציעת reperfusion של כבד שתל 11 ולספק שימור טוב יותר של מקלעת כלי דם peribiliary של המרה לבלוטות 12. Subnormothermic חומץ MP ב 20 ° C או 30 ° C נחקר גם במודלים של בעלי חיים והראה לספק התאוששות קודמת של פונקצית שתל של כבדי DCD, בהשוואה לSCS 13,14. ההיתכנות של חבר פרלמנט מחומץ subnormothermic של כבדים אנושיים הייתה recדיווח ently בסדרה של שבעה כבדי תורם אנושיים מושלכים 15. תמ"א (37 מעלות צלזיוס) מאפשר ההערכה של כדאיות שתל ופונקציונליות לפני השתלת 16,17. בנוסף, חבר הפרלמנט מאפשר לחימום מחדש הדרגתי של שתל הכבד לפני ההשתלה, אשר כבר הוכיח כדי להקל על התאוששות והחייאה של השתל 18.
מכשיר זלוף שימוש בפרוטוקול הנוכחי לזלוף מכונה כבד מאפשר זלוף הכפול (דרך וריד השער והעורק הכבד) באמצעות שתי משאבות צנטריפוגליות, המספקות זרימה רציפה ופורטל זרימת דם פועם. המערכת היא בשליטה בלחץ, המאפשר אוטומטי הסדרת הזרימה דרך כבד, בהתאם להתנגדות intrahepatic. שתי oxygenators קרום סיבים חלול לאפשר לחמצון של שתל הכבד, כמו גם להסרת של CO 2. הטמפרטורה ניתן להגדיר בהתאם לסוג המיועד של MP (טמפרטורות מינימום יור 10 מעלות צלזיוס). זרימה, לחץ וטמפרטורה מוצגים במכשיר בזמן אמת ומאפשר שליטה מתמדת של תהליך זלוף. סט חד פעמי סטרילי חדש של צינורות, מאגר וoxygenators זמין עבור זלוף של כל שתל (איור 1).
המטרה של מאמר זה וידאו היא לספק צעד אחר צעד לפרוטוקול זלוף מכונה normothermic באתרו לשעבר של כבדי תורם אנושיים באמצעות מכונה זו זלוף הכבד חדש שפותחה.

איור 1: (א) ציור סכמטי, (ב) תמונה של המכונה זלוף, (ג) מבט קרוב יותר על oxygenator, ומשאבה צנטריפוגלית משמשת לזלוף normothermic של כבדי תורם אנושיים (ד ').תקבל = "_ blank"> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול זה אושר על ידי הוועדה הרפואית האתית (Medisch Ethische Toetsingscommissie) מאוניברסיטת המרכז הרפואי חרונינגן, הולנד.
1. הכנת נוזל זלוף
הערה: הנפח הכולל של נוזל זלוף מוכן לזלוף המכונה normothermic על פי פרוטוקול זה הוא 2,233 מיליליטר וosmolarity הממוקד של נוזל זלוף היא 302 mOsmol / L.
| רכיבים | כמות |
| תאי דם אדומים ארוזים (המטוקריט 60%) | 840 מיליליטר |
| פלזמה קפואים | 930 מיליליטר |
| L / 200 גרם אלבומין האנושי (Albuman, Sanquin) | 100 מיליליטר |
| תזונת Parenteral שונה (Clinimix N17G35E, בקסטר הבינלאומי בע"מ) | 7.35 מיליליטר |
| ויטמינים לעירוי (Cernevit, בקסטר הבינלאומי בע"מ) | 7 μl |
| יסודות קורט מרוכזים עירוי (Nutritrace, B. Braun Melsungen AG) | 7.35 מיליליטר |
| Metronidazol לממשל ד (5 מ"ג / מיליליטר) (Flagyl, Sanofi-Aventis) | 40 מיליליטר |
| Cefazolin 1,000 בקבוק מ"ג אבקת 5 מיליליטר לממשל ד (Servazolin, סנדוז) | 2 מיליליטר |
| מהר-אינסולין (100 IU / ml) (Actrapid®, נובו-נורדיסק) | 20 מיליליטר |
| glubionate סידן, פתרון תוך ורידי 10%, 137.5 מ"ג / מיליליטר (סנדוז) | 40 מיליליטר |
| סטרילי H 2 O | 51.3 מיליליטר |
| פתרון 0.9% NaCl | 160 מיליליטר |
| פתרון 8.4% סודיום ביקרבונט | 31 מיליליטר |
| הפרין 5000 IE / מיליליטר לממשל iv | 4 מיליליטר |
| סה"כ | 2,233 מיליליטר |
טבלת 1: componenTS של זלוף נוזל 16.
2. לקרקע של התקן זלוף
3. רכש והכנת כבדים תורמים
הערה: להשיג את האיבר באמצעות הטכניקה סטנדרטית של בקירור באתר ולשטוף עם נוזל שימור קר (0-4 מעלות צלזיוס) 19. כדי להקל על cannulation של העורק, לעזוב קטע של אב העורקים supratruncal המצורף לעורק הכבד (איור 2 א).
| מאפייני תורם (N = 12) | מספר (%) או חציון (IQR) |
| גיל (שנים) | 61 (50-64) |
| מין זכר) | 8 (67%) |
| סוג של תורם DCD, סוג מאסטריכט III DBD | 10 (83%) 2 (17%) |
| מדד מסת גוף (BMI) | 27 (25-35) |
| סיבה לדחייה DCD + גיל> 60 שנים DCD + BMI הגבוה DCD + מסיבות שונות * steatosis החמור | 5 (41%) 3 (25%) 2 (17%) /> 2 (17%) |
| פתרון שימור פתרון UW פתרון HTK | 6 (50%) 6 (50%) |
| תורם זמן איסכמיה החמה בDCD (דקות) | 14 (17 - 20) |
| זמן איסכמיה הקרה (דקות) | 389 (458-585) |
| מדד סיכון התורם (DRI) | 2,35 (2.01-2.54) |
מאפיינים תורמים * היסטורית תורם של שימוש בסמים תוך ורידי לשתל אחד ותורם ממושך כל כך 2 <30% לאחר הנסיגה של תמיכה בחיים לשתל אחר: טבלה 2.. קיצורים: DCD, תרומה לאחר מות דם; DBD, תרומה לאחר מוות מוחי; UW, אוניברסיטת ויסקונסין; HTK, היסטידין-טריפטופן-ketoglutarate
g2.jpg "/>
איור 2: תמונות () של שתל תורם אנושי שהוכן על השולחן האחורי ו( B - D) היה לאחר מכן perfused normothermically. () צינורית העורקים מוכנסת לתוך אב העורקים surpratruncal וצינורית הוורידים מוכנסת לתוך וריד השער. צינור המרה הוא cannulated עם קטטר המרה סיליקון. (ב) בכבד ממוקם בתא האיבר עם המשטח הקדמי שלה פונה כלפי מטה וקנולות מחוברות לtubings של מכשיר זלוף. דקות לאחר 30 (ג) תחילת זלוף המכונה normothermic. 6 שעות לאחר תחילת זלוף המכונה normothermic (ד '). במהלך פעולת תא האיבר מכוסה בכיסוי שקוף כדי לשמור על סביבה לחה סטרילי לכבד (לא מוצג בתמונות אלה)."> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
4. Normothermic מכונת זלוף
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
12 כבדים אנושיים שנדחו להשתלה מסיבות שונות שימשו למחקר לאחר קבלת הסכמה מדעת ממשפחות התורמים. מאפייני התורמים מתוארים בטבלה 2. הכבדים מהתורמים האנושיים עברו פרפוזיה נורמותרמית למשך 6 שעות באמצעות הפרוטוקול המתואר במאמר זה. איכות השתלי הכבד הוערכה על ידי ניטור ההומוגניות המקרוסקופית של פרפוזיית הכבד (איור 2A-D). ההמודינמיקה של הכבדים הוערכה על ידי ניטור השינויים בזרימות העורקיות והפורטליות. נצפתה עלייה ראשונית בזרימות בעורק הכבד ובווריד הפורטלי ולאחר מכן ה...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
סרטון זה מספק פרוטוקול שלב אחר שלב לזלוף מכונה נורמותרמית של כבד מתורם אנושי באמצעות מכשיר המאפשר זלוף כפול מבוקר לחץ דרך עורק הכבד ווריד הפורטל. תוך כדי ביצוע פרוטוקול זה, לא התרחשו כשלים טכניים במכונת הזלוף וכל השתלים היו מחומצנים היטב. הכבדים המנופחים מחוץ למקום היו בעלי המודינמיקה יציבה והיו פעילים מבחינה מטבולית, כפי שהוגדר על ידי ייצור מרה16,17.
זהו פרוטוקול מבוסס היטב לזלוף מכונה של כבד מתורם אנושי. לטכניקה זו מספר יתרונות פוטנציאליים על פני השיטה הקונבנציונלית של SC...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברי כתב היד הזה אין ניגוד אינטרסים לחשוף.
עבודת מחקר זו נתמכה כספית על ידי מענקים שניתנו על ידי Innovatief Actieprogramma Groningen (IAG-3), Jan Kornelis de Cock Stichting ו-Tekke Huizingafonds, כולם בהולנד. אנו מעריכים את כל מתאמי ההשתלות ההולנדים על זיהוי הכבדים הפוטנציאליים שהושלכו וקבלת הסכמה מדעת.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Liver Assist | Organ Assist | OA. Li.Li.140 | מכשיר זלוף |
| Liver Assist חבילה חד פעמית | Organ Assist | OA. Li.DP.540 | סט חד פעמי וקנולות |
| מרדית' מס' 8 | Vygon Nederlands BV | 1362082 | צינורית צינור המרה |
| אלבומין אנושי 200 גרם/ליטר / ALBUMAN | Sanquin | 15522598 | 100 מ"ל |
| תזונה פרנטרלית שונה | Baxter Nederland B.V. | N14G30E | 7.35 מ"ל |
| מולטי ויטמינים לעירוי / CERNEVIT | בקסטר אינטרנשיונל בע"מ | 9800927 | 7 μ l |
| יסודות קורט מרוכזים לעירוי / NUTRITRACE | B. Braun Melsungen AG | 14811332 | 7.35 מ"ל |
| מטרונידזול 5 מ"ג/מ"ל | Baxter Nederland B.V. | 98181882 | 40 מ"ל |
| Cefazoline / SERVAZOLIN | Sandoz B.V. | 15611337 | 2 מ"ל |
| אינסולין מהיר פעולה | ספקים | 20 מ"ל | |
| סידן גלוביונט, תמיסה תוך ורידית 10%, 137.5 מ"ג/מ"ל | Sandoz | 97038695 | 40 מ"ל |
| סטרילי H2O | Fresenius Kabi Nederland B.V. | 98084453 | 51.3 מ"ל |
| NaCl 0.9% | Baxter Nederland B.V. | 15262510 | 160 מ"ל |
| הפרין 5,000 IE/ml למתן IV | LEO Pharma B.V. | 98026178 | 4 מ"ל |
| סודיום ביקרבונט 8.4% | B. Braun Melsungen AG | 97973874 | הכמות תלויה ב-pH |
| תאי דם אדומים ארוזים (ב-SAGM) | בנק הדם (Sanquin) | N0012000 | 750 מ"ל |
| בנק דם פלזמה קפוא טרי | (Sanquin) | N04030A0/N04030B0 | 900 מ"ל |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.