תאי גידול במחזור הדם (CTCs) הוכחו כממלאים תפקיד חשוב בגרורות גידול. כאן, מתוארת שיטה לבידוד והתפשטות של CTCs מהדם המלא של מודל גידול עכבר סינגני של גרורות קרצינומה של הכבד (HCC).
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
בידוד וריבוי תאים סרטניים במחזור מסרטן מודל עכבר
במאמר זה
סיכום
תקציר
גרורות סרטניות הן הגורם העיקרי למקרי מוות הקשורים לסרטן. מחקרים אחרונים הראו שתאי גידול במחזור (CTC) חשובים בגרורות סרטניות. ואכן, מספר ה-CTCs נמצא בקורלציה עם גודל הגידול. כאן, ניתן תיאור מפורט של מתודולוגיה לבידוד והתפשטות של CTCs ממודל עכבר סינגני של קרצינומה הפטו-תאית (HCC) המאפשר ניתוח במורד הזרם של מנגנונים מולקולריים בעלי פוטנציאל חשוב של גרורות גידול באיברים מוצקים. שיטה זו יעילה וניתנת לשחזור. זוהי טכניקה לא פולשנית ולכן יש לה פוטנציאל להחליף ביופסיה פולשנית של רקמות מבני אדם שעלולה להיות קשורה לסיבוכים. לכן, השיטה הנדונה כאן מאפשרת בידוד והתפשטות של CTCs מדגימות דם מלאות כך שניתן יהיה לבחון ולאפיין אותן. יש לכך פוטנציאל להסתגלות עתידית ליישומים קליניים כגון אבחון וטיפול ממוקד מותאם אישית.
מבוא
קהילת חקר הסרטן ידעה על קיומם של תאי גידול במחזור (CTC) מאז שנצפו לראשונה על ידי תומאס אשוורת' בשנת 18691. מאז, CTCs הוכחו כחשובים בגרורות גידול ובהתקדמות המחלה2-5. כיום, גידולים מוצקים הם גורם עיקרי לתחלואה ותמותה ברחבי העולם. CTCs הם תאים נדירים שמקורם בגידולים ראשוניים ועוברים דרך זרם הדם לאיברים שונים שרק חלק קטן מהם מתפתח בסופו של דבר לגרורות2-5. יש לציין כי קיים מתאם חיובי בין גודל הגידול למספר CTC3,4.
הבנה של ביולוגיה של CTC יכולה לתרום לחיפוש אחר טיפול ממוקד. יתר על כן, ל-CTCs עשויים להיות יישומי אבחון. כדי להשיג את היישומים הקליניים הפוטנציאליים הללו, יש להתגבר על כמה אתגרים עכשוויים לחק....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הצהרת אתיקה: כל המחקרים בבעלי החיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) של האנטר קולג 'של האוניברסיטה של העיר ניו יורק.
1. נהלים טרום ניסוי
- עם ההגעה למתקן בעלי החיים, בתחילה בית 3 עכברי BALB / ג לכלוב עם מצעים העליונים ועץ שבב מסונן. ודא שיש לי העכברים גישה חופשית למזון, אוכל מכרסם פורינה, ומים. מצעים ומזון צריכים להיות מוחלפים פעמיים בשבוע בזמן שיש לנקות כלובי פעם בשבוע.
- לגרום להרדמה כללית....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
המתודולוגיה שתוארה כאן הוכיחה כי יכול להיות מבודד CTCs. עכברים מורדמים אנושיים בנקודת סיום ניסוי. מחנק התהליך מעורב פחמן דו חמצני, exsanguination פנים-לב, ונקע בצוואר הרחם. סכמטי של שלבים העיקריים של ההליך הם באיור 2. דגימות דם כל שנאספו על ידי exsanguination פנים-לב עובדו באמצעות הפרוטוקול שתואר לעיל. לאחר ש, צנטריפוגה שימשה כדי לקבוע את שכבת מעיל באפי שהיה נתון לתמוגה RBC. זה היה לאחר מכן על ידי צנטריפוגה צעד אחר לאסוף גלולה לבנבן שנשטפה ב- PBS, וresuspended במד.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
במחקר זה תוארו כיצד לבודד ולהפיץ CTCs מדם מלא של עכבר סינגני עם HCC. מטרת עבודה זו היא לשפר את המחקרים המתמשכים של מנגנוני הגרורות הסרטניות.
גורם התורם לפרוגנוזה גרועה של סוגי סרטן רבים הוא היעדר גילוי בזמן וכתוצאה מכך הפצה נרחבת של הממאירות3. CTCs מקורם בסרטן ראשוני ומתפשטים דרך זרם הדם לאיברים מרוחקים. ככזה, CTCs חשובים בגרורות סרטניות ויש להם פוטנציאל ליישומים קליניים מרובים, כגון לאבחון3,9,10. זה נתמך על ידי נתונים ממספר מחקרים קליניים שהראו כי ל-CTCs יש מתאם חזק עם .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.
תודות
העבודה במעבדה של ד"ר אוגונוובי נתמכת על ידי מענק של תוכנית מרכזי מחקר במוסדות מיעוטים מהמכון הלאומי לבריאות מיעוטים ופערי בריאות (MD007599) של המכונים הלאומיים לבריאות. התוכן של כתב יד זה הוא באחריות המחברים בלבד ואינו מייצג בהכרח את העמדות הרשמיות של ה-NIMHD או ה-NIH.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מלח נתרן הפרין 1 גרם | VWR | 89508-852 | |
| BTX שפופרת מיקרו 1.5 מ"ל שקוף NS | VWR | 89511-254 | 1.5 מ"ל צינורות אפנדורף ללא פירוגן |
| מחט סטרילית Disp BD 25 גרם x 1 ב | - VWR | BD305125 | 25 גרם מחט |
| Slp Tip SRNG 1 מ"ל 200 כל אחד לחבילה | VWR | BD309659 | 1 מ"ל קצה מזרק |
| מזרק 1 מ"ל leur lok Pk 100 | VWR | BD309628 | 1 מ"ל מזרק |
| VWR רקמות מלקחיים 6 | VWR | 82027-446 | מלקחיים |
| Cyromold intrm 15 x 15 x 5 מ"מ PK 100 | VWR | 25608-924 | Cyromold |
| Cryo-oct compund 4 oz | VWR | 25608-930 | Oct compound |
| VWR Slide sprfrst 25 x 75 מ"מ PK72 | VWR | 48311-703 | שקופיות |
| VWR כיסוי זכוכית #2 22 x 50 מ"מ | VWR | 48-382-128 | כיסוי זכוכית |
| VWR תיבת שקופיות אמיתי צפון fm pu | VWR | 89140-278 | תיבת שקופיות |
| סופר HT PAP עט | VWR | 89427-058 | PAP עט |
| מים RNASe ו- DNA חינם 2 L | VWR | 101454-204 | מאגר מים ללא נוקלאז |
| Tris Ultra טהור כיתה 500 גרם | VWR | 97061-796 | Tris Buffer |
| אמוניום כלוריד ACS כיתה 2, 5 ק"ג | VWR | 97062-048 | אמוניום כלוריד חוצץ |
| פלקון צלחת תרבית רקמות בז 60 x 15 מ"מ סגנון פוליסטירן | VWR | 353002 | צלחת תרבית רקמות |
| Clorox Germicidal Bleach, רגיל | VWR | 89501-620 | Clorox Bleach |
| PBS, 1x (מי מלח חוצץ פוספט) ללא סידן ומגנזיום (500 מ"ל) | Thermo Fischer Scientific | 21-040-CV | PBS, 1x |
| DMEM, 1x עם 4.5 גרם/ליטר גלוקוז & L-גלוטמין ללא נתרן פירובט | תרמו פישר סיינטיפיק | 10-017-CV | DMEM 1x מדיה לתאי BNL 1ME A.7R.1 |
| סרום בקר עוברי | תרמו פישר מדעי | 35-010-CV | FBS |
| פניצילין תמיסת סטרפטומיצין, 100x | תרמו פישר מדעי | 30-002-Cl | פניצילין סטרפטומיצין |
| סורוול ביופוגה פיקו | תרמו פישר 75002411 | מדעיצנטריפוגה 13,000 סל"ד |
מקורות
- Ashworth, T. R. A case of cancer in which cells similar to those in the tumors were seen in the blood after death. Australian Medical Journal. 1869, 146-147 (14).
- van de Stolpe, A., den Toonder, J. Circulating Tumor Cells: W....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
