Method Article

פרוטוקול לConfocal ניתוח morphometric תלת ממדי של האסטרוציטים

DOI:

10.3791/53113

⸱

December 11th, 2015

 ,  ,  ,  , 
1Department of Clinical and Experimental Medicine, Linköping University, 2Neurophysiology Research Center, Shahed University, 3Cellular and Molecular Research Center, Iran University of Medical Sciences, 4School of Advanced Technologies in Medicine, Iran University of Medical Sciences

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אסטרוציטים במערכת העצבים המרכזית משנים את תכונותיהם התפקודיות והמבניות בתגובה לגירויים מזיקים. דוח זה מציג פרוטוקול להערכת מורפולוגיה תלת מימדית של אסטרוציטים במצבי מחלה או לאחר התערבויות טיפוליות.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כמו תאי גלייה במוח, יש לי האסטרוציטים תפקידים פונקציונליים מגוונים במערכת העצבים המרכזית. בנוכחות גירויים מזיקים, האסטרוציטים לשנות את המאפיינים הפונקציונליים ומבניים שלהם, מצב הנקרא astrogliosis תגובתי. כאן, פרוטוקול להערכה של תכונות מורפולוגיות של האסטרוציטים מוצג. פרוטוקול זה כולל כימות של 12 פרמטרים שונים כלומר את פני השטח והנפח של הרקמה מכוסה על ידי astrocyte (שטח astrocyte), כל astrocyte כולל סניפים, גוף תא, וגרעין, כמו גם אורך כולל ומספר הסניפים, העצמה של immunoreactivity הקרינה של נוגדנים המשמשים לזיהוי astrocyte, וצפיפות astrocyte (מספר / 1000 מיקרומטר 2). למטרה זו תמונות מיקרוסקופיות confocal (3D) תלת ממדים נוצרו, ותוכנת ניתוח תמונת 3D כגון Volocity 6.3 שימש למדידות. רקמת מוח חולדה נחשפה לביתא עמילואיד 1-40 1-40) עם או בלי התערבות טיפולית שימש להציג את השיטה. גם פרוטוקול זה יכול לשמש לניתוח morphometric 3D של תאים אחרים משני in vivo או בתנאי מבחנה.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במערכת עצבים מרכזית בריאה (CNS), האסטרוציטים לשחק תפקיד חשוב בויסות זרימת דם, חילוף חומרים של אנרגיה, תפקוד הסינפטי וגמישות, ויון תאי ועצביים הומאוסטזיס 1-3. בנוסף, האסטרוציטים להגיב לגירויים מזיקים שונים ותנאים חריגים כגון טראומה, זיהום, איסכמיה או ניוון מוחיים באמצעות astrogliosis תגובתי אשר מאופיין על ידי יתר, הפצה ושיפוץ פונקציונלי של האסטרוציטים 4,5.

astrogliosis תגובתי יכול להנדס את התגובה הדלקתית ותהליך תיקון ברקמה, ולכן יכול להשפיע על התוצאות הקליניות של התערבויות טיפוליות. בהתאם לכך, האסטרוציטים קיבלו את תשומת לב ממדען המוח בעשור....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה בוצע בהתאם למדיניות שנקבעה במדריך לטיפול והשימוש בחי מעבדה (NIH) שאושרה על ידי ועדת אתיקה של אוניברסיטת איראן למדעי רפואה (טהרן, איראן).

1. בעלי חיים, תכשירי ניתוח ודגימה

הערה: הכן רקמת מוח לניתוח מיקרוסקופי confocal 3D.

  1. בעלי חיים הפרד באופן אקראי לשתי קבוצות: Aβ 1-40 -injection (n = 8), וAβ 1-40 -injection עם טיפול האיזופלוונים (n = 8); לנהל האיזופלוונים (10 מ"ג / קילוגרם ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חלק זה מציג כמה דוגמאות של התצפיות איכותיות וכמותיים המיוצרות על ידי ניתוח morphometric 3D. לקבלת תוצאות של כל 12 הפרמטרים שהוזכרו קודם לכן מלאים, עיין הפרסום הקודם שלנו 10.

תצפיות איכותיות

האסטרוציטים הציגו ענפים דקים או עבים שהיו בדרך כלל ארוך בAβ 1-40 חולדות הוזרקו (איור 1). כמה האסטרוציטים בצורת דמויות .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בפרוטוקול הנוכחי, אנו מועסקים morphometry confocal 3D להעריך 12 פרמטרים שונים שהיו קשורים עם מורפולוגיה astrocyte. לצורך כך, הרקמה בהיפוקמפוס של חולדות עם 1-40 Aβ - astrogliosis המושרה, עם או בלי טיפול מקדים האיזופלוונים כסוכן אנטי דלקתי היו בשימוש. על ידי שימוש בתמונות 3D ותוכנת morphometric, הצלחנו להראות את ההשפעה של האיזופלוונים על astrogliosis כלומר המורפולוגיה של האסטרוציטים.

.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים ממועצת המחוז של Östergötland, (שבדיה) והתאית ומולקולרי המרכז למחקר באוניברסיטת איראן למדעי רפואה (טהרן, איראן).

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
עמילואיד בטא 1-40סיגמא אולדריץ'79793יש לשמור ב-70 מעלות ויותר; C
GenisteinSigma Aldrich446-72-0שמור ב -20 & deg; C
נוגדנים לארנב פוליקולונלי כנגד חלבון חומצי סיבי גליהDAKOZ0334
נוגדני IgG מצומדים לחזירים אלקליין פוספט נגד ארנב נוגדניםIgG DAKO
כרוגן קבוע נוזליDAKOK0640
מאגר מצע אדום קבוענוזלי DAKOK0640
Cremophor ELSigma Aldrich27963שמן קיק פוליאתוקסילי - שלב 1.1
LSM 700 מיקרוסקופיה סריקת לייזר קונפוקליתCarl Zeiss
Volocity 6.3Perkin Elmer Inc.,
ניתוח תמונה 2000Tekno Optic
Streotaxic apparatusStoelting
Graph pad Prism 5Graph pad software Inc.

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
  2. Pellerin, L., et al. Activity-dependent regulation of energy metabolism by astrocytes: an update. Glia. 55

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Astrocyte MorphologyConfocal Microscopy3D Image AnalysisVolocity SoftwareGFAP ImmunostainingFluorescence IntensityAstrocyte TerritoryNuclear VolumeBranch LengthCell Density

Related Articles