מחקר סרטן תרגומי תלוי במיצוי רקמות אנושיות. עבודה רבה הושקעה באופטימיזציה של שיטות מיצוי לניתוח ex vivo. כאן, אנו מתארים שיטות עיבוד רקמות המאפשרות פלט נתונים מקסימלי מדגימות מוגבלות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
עבודה עם רקמות אנושיות לחקר סרטן Translational
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחקר רפואי לתועלת האדם נפגע מאוד על ידי הצורך ברקמות אנושיות ובנבדקים. עם זאת, עם קבלת הסכמה לדגימות אנושיות, יש לטפל בדגימות יקרות ערך בזהירות המרבית על מנת להבטיח את שלמות האיברים, הרקמות והתאים ברמה הגבוהה ביותר. למרבה הצער, עיבוד רקמות מעצם הגדרתו דורש מיצוי רקמות מהמארח, שינוי שעלול לגרום ללחץ תאי רב ויש לו השלכות משמעותיות על ניתוחים עוקבים. לחצים אלה עלולים לגרום לכך שהדגימה לא תייצג עוד את האתר ממנו היא נלקחה. לכן, יש להקפיד על פרוטוקול קפדני בעת עיבוד דגימות אלו כדי להבטיח ייצוגיות. יש לקחת בחשבון גם את הבדיקות הרצויות על מנת להבטיח שימוש בטכניקה אופטימלית לעיבוד דגימות. להלן פרוטוקול לאחזור רקמות, עיבוד וניתוחים שונים שניתן לבצע על רקמות מעובדות על מנת למקסם את הייצור במורד הזרם מדגימות רקמה מוגבלות.
מבוא
מחקר רפואי נהנה מאוד מהמחקר של שני שורות תאים אנושיות ומודלים של בעלי חיים. שורות תאים מאפשרות שליטה טובה יותר של רכיבים במערכת, כמו גם שימוש בתאים מאורגניזם הנכון. עבודה עם תאים אנושיים, ואילו יותר נציג, מציג תמונת מצב פשוטה באופן דרסטי של מנגנונים שעשויות להיות אחראי לבריאות ומחלה, משום ששורות תאים עשויות שלא לשחזר את ההשפעה של תאים אחרים, רכיבי סטרומה, ואיברים אשר עשוי להשפיע 1 תגובות. מצד השני, מודלים של בעלי החיים, אם כי לא לגמרי מדויק בשחזור מחלה אנושית וההטרוגניות גנטית, להציע תובנה נוספת על ידי מתן אפשרות להזנה של מערכות חיות שלמות ברוב הדגמים 2,3.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הצהרת אתיקה: פרוטוקול זה אושר על ידי אוניברסיטת טקסס מרכז סרטן MD Anderson.
1. רכש דגימה
- לאסוף דגימות רקמה מגידול עודף מחקר ורקמות נורמליות קשורות 10-12. דגימות חנות על קרח רטוב כדי למנוע autolysis.
- שלח את כל הרקמות, מכשירים רפואיים וגופים זרים הוסרו במהלך ניתוח למחלקה לפתולוגיה לבדיקה הכרחית על מנת להקל על אבחנה פתולוגית.
- ידית רקמה שהוקצתה למחקר בהתאם למחקר רלוונטי ומדיניות בנקאות ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
התוצאות מוצגות להלן מתארות אסטרטגית gating cytometry זרימה לphenotyping חיסוני רחב על גידול מלנומה מעובד. היום של צביעה, דגימת רקמה הייתה מתעכל והומוגני עם אני collagenase וDNase אני דגירה של 60 דקות, על 37 מעלות צלזיוס מתחת 225 סל"ד סיבוב. בעקבות עיכול, השעיה תא הייתה מסוננת דרך מסננת תא 70 מיקרומטר לחסל פסולת ותאים היו מוכתמים זרימת כותרת הקרינה cytometry נוגדנים לphenotyping תא חיסון. מוצגים להלן (איור 3) הוא אסטרטגית gating וצביעה לסמנים מרובים על O.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
סופו של דבר, שיטות העיבוד חייבים להיות מוכתבות על ידי ההשערה הרצויה וצפויות מבחני טכניים שיש לבצע (איור 1). הסעיף הבא משמש כסקירה לתאר מבחני פוטנציאליים שעלולות להתבצע על סעיפי רקמות כזה. זה בשום פנים וסקירה ממצה, אבל הוא נועד לסייע לשיטות עיבוד מדגם מדריך ובחירה של מבחני במורד הזרם בתיאור טכניקות ורישום נקודות החוזק והחולשה שלהם.
Cytometry זרימה מכתים עשויה להתבצע על סעיפי רקמות טריות-גזור, או ש.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי התרומות הפילנתרופיות של ג'ון ג 'וקרן מארי סטלה Kenedy זיכרון (גרנט # 0,727,033) והברית המחקר מלנומה. המחברים מבקשים להודות לאוניברסיטה של רקמות טקסס MD Anderson Cancer Center מוסדיות בנק (ITB) על תיאום הפצה וגביית רקמות והקלת מחקר translational, כמו גם ד"ר איגנסיו Wistuba, ד"ר ויקטור פרייטו, מחלקת מרכז סרטן MD Anderson ב פתולוגיה ולנומה ירח Shot התכנית. לבסוף, המחברים מבקשים להודות לכל החולים ומשפחות שנפגעו על ידי מלנומה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מחטים | BD | 305167 | |
| נירוסטה אזמלים חד פעמיים | Miltex | 4-410 | |
| צלחת תרבית רקמות | קורנינג | 353003 | |
| קלטות ביופסיה | תרמו פישר | 58931 | |
| תמיסה מייצבת RNA | אמביון | AM7021 | |
| 1.5 מ"ל צינורות אפנדורף | פניקס | MAX-815 | |
| צינורות 50 מ"ל | קורנינג | 430290 | |
| 10% ניטרלי חוצץ פורמלין | StatLab מוצרים רפואיים | 28600-5 | |
| מיכלי פורמלין | פישר סיינטיפיק | 23-032-059 | |
| פתרון טמפרטורת חיתוך אופטימלי (OCT) | סאקורה פינטק | 4583 | |
| רקמה-טק קריומולד | סאקורה פינטק | 4557 | |
| Dnase I | Roche | 10104159001 | |
| Collagenase I | Roche | 11088793001 | |
| 70μ מסנני תאים m | BD Bioscience | 352350 | |
| 96 צלחות תחתונות עגולות היטב | Corning | 3799 | |
| תמיסת כתמים חיים/מתים | Life | Technologies L34957 |
מקורות
- Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. Cell Biology. Fixing problems with cell lines. Science. 346, 1452-1453 (2014).
- van der Worp, H. B., et al. Can animal models of disease reliably inform human studies. , PLoS Med. 7, e1000245 (2010).
- McCabe, P. M., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
