ניתן לכמת את השפעת הגנים והסביבה על המרחב החברתי של Drosophila melanogaster באמצעות פרדיגמה אנליטית רבת עוצמה אך ישירה. אנו מראים כאן גורמים שונים שיכולים להשפיע על המרחב החברתי הזה, ולכן יש לקחת אותם בחשבון בעת תכנון ניסויים בפרדיגמה זו.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
Assay המרחב החברתי שתואר כאן יכול לשמש כדי לכמת את האינטראקציות חברתיות של r תסיסנית melanogaste - או חרקים קטנים אחרים - בצורה ישירה. כפי שהוכחנו בעבר 1, בתא דו-ממדי, שהכח ראשון זבובים כדי ליצור קבוצה חזק, לאחר מכן מאפשר להם לקחת מרחק העדיף אחד מהשני. לאחר הזבובים התיישבו, אנו מודדים את המרחק לשכנה הקרובה ביותר (או המרחב חברתי), עיבוד תמונה סטטית עם תוכנה חופשית באינטרנט (ImageJ). הניתוח של המרחק לשכן הקרוב ביותר מאפשר לחוקרים לקבוע את ההשפעות של גורמים גנטיים וסביבתיים על אינטראקציה חברתית, תוך פיקוח על ערפלנים אפשריים. גורמים מגוונים כגון יכולת טיפוס, שעה ביום, מין, ומספר הזבובים, יכולים לשנות מרווח חברתי של זבובים. כך אנו מציעים סדרה של בקרות ניסיוניות כדי למתן תופעות בלבול אלה. assay זה יכוללשמש לפחות שתי מטרות. ראשית, חוקרים יכולים לקבוע כיצד המשמרת שלהם האהובה הסביבתית (כגון בידוד, טמפרטורה, מתח או רעלים) תשפיע מרווח חברתי 1,2. שנית, חוקרים יכולים לנתח את הבסיס הגנטי ועצבי של צורה בסיסית זו של התנהגות חברתית 1,3. באופן ספציפי, השתמשנו בו ככלי אבחון כדי ללמוד את התפקיד של גני orthologous חשבו להיות מעורבים בהתנהגות חברתית באורגניזמים אחרים, כגון גני מועמדים לאוטיזם בבני האדם 4.
מבוא
אינטראקציות חברתיות הן קריטיות להתפתחות התקינה והבריאות של יחידים בתוך קבוצה כולה, וניתן לצפות על פני מינים רבים, מבני האדם (הומו סאפיינס) לאורגניזמים פשוטים יותר כמו זבובי פירות (דרוזופילה melanogaster) 5,6. זבוב פירות או אמצעי נפוץ נתח אדם בודד לעבד מידע חושי במהלך אינטראקציות אלה, בין אם זה יהיה: שמיעה,, חוש הריח, מישוש, או gustation חזותיים. אנחנו ואחרים משערים כי יש neurocircuitry פוטנציאלי משותף שבבסיס תגובות התנהגותיות לאינטראקציות חברתיות וכי התאים עצביים והגנים מעורבים עשויים להיות האבולוציונית נשמרים 7. ברגע האינטראקציה הראשונית התרחשה, מרחב חברתי בין האנשים האינטראקציה תה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. ציוד וריאגנטים שנוצרו בבית (ראה רשימה של חומרים לאחרים)
- הכן מנגנון הרדמה קרה תסיסנית כפי שתואר בעבר 8.
- הכן aspirator לטוס כפי שתואר קודם לכן 13.
- הכן תאי מרחב חברתיים ובעלי.
- להזמין או לעשות שמשות זכוכית ומפרידי אקריליק ליצור תאי המרחב החברתיים. כל תא שטח החברתי מורכב משני לוחות זכוכית מרובעות (17.6 סנטימטר על 17.6 סנטימט....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
תא המרחב החברתי יכול לשמש ככלי ללכמת את ההתנהגות החברתית של תסיסנית melanogaster. מפרידי אקריליק וזגוגיות נחתכים יחד כדי ליצור זירה משולשת פנימית המספקת אזור דו-ממדי שבטס יכול ליצור קבוצות יציבה ללא נוכחות רב רמזים שעלולים להיות מבלבלים. כאשר זבובים מועברים לזירה האנכית, הם נבהלו שטפחו כלפי מטה, והם מגיבים בהתנהגות בריחה: geotaxis השלילית. הם מטפסים לקודקוד של המשולש הזקוף, נאלץ לקבוצה חזק, ולאחר מכן מסופקים זמן לעבור עוד טופס אחד את השני, ולחקור את הזירה. לאחר 20 עד 40 ד.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בפרוטוקול זה, נוהל מפורט לכימות של המרחב החברתי שתואר. כמה צעדים חיוניים כדי להבטיח את הניסוי מוצלח הם: 1) תמיד להשתמש בכפפות בעת הניקוי והקמת המנגנון, כדי לשמור על שמנים משלך וריחות מהחדר הפנימי של המנגנון, 2) להבטיח זבובים נאספים לפחות יום אחד לפני הניסוי כדי לצמצם כל השפעה אפשרית של הרדמה קרה, 3) 2 שעות לפני הניסוי לספק בקבוקונים חדשים המכילים מזון טרי, כדי להבטיח את הזבובים לא מורעבים, וניקו את עצמם, 4) בשעה 2 אלה, בואו הזבובים להתאקלם להם סביבה חדשה, 5) שים לב לתנאי הטמ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.
תודות
המחברים רוצים להודות לד"ר תדמירי ונקטש על עידודו להכין את כתב היד הזה, לדובה ברנמן וסלווין צ'וי על הערותיהם הבונות, לאליסה בורג וויין רסבנד על עיצוב המאקרו ב-ImageJ לכל מרחקי הטיסה ולמרחקי השכנים הקרובים ביותר. המחברים רוצים גם להודות לסוקרים על הערותיהם הבונות.
A.A.A, M.C.C. ו-A.F.S היו אחראים על תכנון המחקר; S.N.J., A.A.A, M.N., Z.R. ו-A.J.M. ביצעו את הניסויים. A.A.A, M.N., A.J.M. ו-M.C.C ו-A.F.S. ניתחו את הנתונים; A.R.M. ו-A.F.S. כתבו את כתב היד.
עבודה זו נתמכה על ידי פרסי המחקר של PSC-CUNY, במימון משותף של קונגרס הסגל המקצועי ואוניברסיטת העיר ניו יורק ל-A.F.S.; על ידי מימון פנימי מאוניברסיטת ווסטרן ל-A.F.S.; ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מיקרוסקופ זום סטריאו | ניקון | SMZ-645 | כל היקף סטנדרטי אחר לטיפול בזבובים יעבוד |
| מברשות צבע קטנות | לדחיפת זבובים | ||
| ג'אז-מיקס | פישר | 33545 | כל מזון דרוזופילה סטנדרטי אחר יעבוד |
| מיני טיימר אזעקה/שעון | |||
| עטי | |||
| סרט | |||
| קליפס קלסר בגודל בינוני | סיכות | להחזקת התאים יחד: 1-1/4 אינץ' (32 מ"מ) קליפסים בינוניים עם קיבולת 5/8 אינץ' | |
| תמיכה קטנה | SupportStands Carolina | 707161 | להחזיק את התאים בכיוון אנכי |
| מהדק בורט | המצלמה הדיגיטלית של קרולינה | 707362 | |
| ניקון | קולפיקס S8000 | כדי לצלם את תמונות הסטילס | |
| סרגל | כדי להיות מסוגל לשנות את קנה המידה של לוח התמונה | ||
| המשולש וכיסוי | כדי לספק רקע לבן ואור הומוגני. | ||
| דפיקה | : כל משטח עכבר עובד. | ||
| פריזמה 6 | GraphPad תוכנה בע"מ | פריזמה 6 עבור Mac OS X | כל תוכנת ניתוח סטטיסטי עם t-test, חד כיווני ושני ANOVA תעבוד |
מקורות
- Simon, A. F., et al. A simple assay to study social behavior in Drosophila.: measurement of social space within a group. Genes Brain Behav. 11, 243-252 (2012).
- Kaur, K., Simon, A. F., Chauhan, V., Chauhan, A.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
