Method Article

שיטת ניקוד מהירה פנוטיפי נוירולוגיות להערכת מחלת התקדמות בSOD1-G93A מודל העכבר של ALS

DOI:

10.3791/53257

⸱

October 6th, 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1ALS Therapy Development Institute

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול וידאו זה מתאר שיטה רגישה, אמינה ומהירה להערכת הליקויים העצביים-שריריים במודל עכבר טרנסגני של טרשת אמיוטרופית צידית.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

העכבר הטרנסגני SOD1-G93A הוא המודל החייתי הנפוץ ביותר של טרשת אמיוטרופית צידית (ALS). ב-ALS TDI פיתחנו פרוטוקול סינון פנוטיפי, המודגם בסרטון כאן, המעריך באופן אמין את התפקוד העצבי-שרירי של עכברי SOD1-G93A בצורה מהירה. פרוטוקול זה כולל מערכת ניקוד נוירולוגית פשוטה (NeuroScore) שנועדה להעריך את תפקוד הגפיים האחוריות. NeuroScore מתמקדת בתפקוד הגפיים האחוריות מכיוון שליקויים בגפיים האחוריות הם הסימן הנוירולוגי המוקדם ביותר המדווח למחלה בעכברי SOD1-G93A. הפרוטוקול שפותח על ידי ALS TDI מספק הערכה בלתי משוחדת של הופעת שיתוק (שיתוק קל או חלקי), התקדמות וחומרת השיתוק והוא רגיש מספיק כדי לזהות שינויים הנגרמים על ידי תרופות בהתקדמות המחלה. בדוח זה, השילוב של כתב יד מפורט עם וידאו ממזער את אי הבהירות בניקוד ואת השונות בין הנסיינים ובכך מאפשר לאמץ את הפרוטוקול על ידי מעבדות אחרות ומאפשר השוואות בין מחקרים המתקיימים במסגרות שונות. אנו מאמינים שפרוטוקול וידאו זה יכול לשמש ככלי אימון מצוין לחוקרי ALS בהווה ובעתיד.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאז הפיתוח שלה באמצע שנתי ה -1990 דגם העכבר מהונדס SOD1-G93A היה מודל החיה הנפוצה ביותר של מחלת ניוון (ALS) 1. מודל עכבר מהונדס זה מהונדס גנטי לביטוי יתר טופס מוטציה של גן סופראוקסיד דיסמוטאז Cu / Zn האנושי 1 (SOD1) חסת גליצין קשור-ALS למוטצית אלאנין בחומצת אמינו 93 (G93A). המוטציה G93A היא אחד של מוטציות רבות בגן SOD1 שהאיפור באופן קולקטיבי כחמישית ממקרי ה- ALS המשפחתיים 2.

מודל SOD1-G93A הפך סוס עבודה מחקר לפיתוח תרופות ALS כי בנוסף לקשר הגנטי הברור שלה לALS, היא דומה רבות של התכונות פתולוגיים של ALS בבני אדם כגון אובדן מוטורי נוירון, ח....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הניסויים שנערכו בהתאם לפרוטוקולים שתוארו על ידי המכונים הלאומי לבריאות מדריך לטיפול והשימוש בבעלי חיים ואושרו על ידי הוועדה של ALS TDI טיפול בבעלי חיים מוסדיים ושימוש (IACUC).

1. בעלי חיים, שיכון, ועיצוב הלימוד

הערה: המושבה עכבר SOD1-G93A נגזרה מB6SJLTgN המתח הגבוה 1Gur עותק (SOD1G93A) המיוצר במקור על ידי et al גורני 7.. המושבה כיום מתוחזק על ידי חציית זכרים C57BL / 6-SJL מהונדסים עם נקבות C57BL / 6-SJL F1 wild-type. בעלי החיים F1 נוצרים על ידי חציית זכרים SJL עם....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

נתוני ציון הנוירולוגית של 90 גברים ו -94 נקבות עכברים שאינם מטופלים SOD1-G93A למדו בALS TDI בשינה 2014 הוערכו. התוצאות מראות כי יש לי עכברי זכרים בדרך כלל התקדמות מחלה אגרסיבית יותר מאשר נקבות עכברים, כפי שמעידים חלק גדול יותר של תוחלת החיים שלהם ליום 1 בNS בהשוואה לנשים. NS 2 וNS 3 להתרחש בתדירות כמעט שווה על פני מינים. NS 0 הוצא מהניתוח, כי זה נחשב פנוטיפ "נורמלי". 4 NS גם לא נכלל כי על פי הגדרה זה יכול להתרחש רק פעם אחת בחיים של SOD1-G93A עכבר (טבלה 2 ואיור 1)........

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בדו"ח זה, אנו מתארים פרוטוקול וידאו מהיר ופשוט, שאם מיושם כהלכה, מסוגל באופן מהימן הערכת התקדמות המחלה בעכברי SOD1-G93A וזיהוי שינויים בהשפעת סמים. בעוד קבוצות שונות פיתחו מערכות ניקוד פנוטיפי לSOD1 לעכברי G93A-8-10, הם לעתים קרובות לא מספקים פרטים מספיקים על ההליך ואינם מתאימים לשכפול. כתוצאה מכך, מערכות ניקוד משמשות מחוץ לקבוצה הספציפית שמפתחת אותם רק לעתים נדירות. בדוח זה, שילוב של כתב יד מפורטת עם וידאו ממזער בהירויות ניקוד והשתנות הבין-הנסיין ובכך מאפשרות לפרו.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ברצוננו להודות לבת' לוין על הביקורת על כתב היד, לואלרי טסינרי על פיתוח פרוטוקול הגנוטיפ, ולמאט פרולה וקרלוס מאיה על הטיפול יוצא הדופן שלהם בבעלי חיים.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
B6SJLTgN(SOD1G93A)1זן גורמעבדת ג'קסון, בר הרבור, ME002726זן עכברים ששימש במחקר זה
BreedersBiomedical Research Models, Inc., Worcester, MAMaintenance
Colony Scale NavigatorOHAUS, Parsippany, NJדגם N14120משמש לשקילת עכברים
Nutra-GelHBio-Serv, Flemington, NJמזון רטוב מסופק לעכברים חולים
מוקרנים מעבדה בעלי חיים דיאטההרלן, אינדיאנפוליס, IN2918-111914Mצ'או דיאטת
צ'או בדרגת מעבדה סאני-צ'יפסהרלן טקלד, אינדיאנפוליס, IN7090מצעים
JMPH מכון SAS, בע"מ, SAS קמפוס דרייב, קארי, קרוליינה הצפונית  v10.0.2תוכנה סטטיסטית
Microsoft ExcelMicrosoft, One Microsoft Way, Redmond, WAExcel 2013 (v 15.0)תוכנת גיליון אלקטרוני
GraphPad Prism 5GraphPad software Inc., La Jolla, CAv5.4תוכנת גרפים
Mouse HutsBio-Serv, Flemington, NJK3272להעשרה סביבתית
#S4798

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gurney, M. E., et al. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation. Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).
  2. Rosen, D. R., et al. Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

SOD1 G93A Mouse ModelNeurological Scoring SystemHindlimb Function AssessmentTail Suspension TestWalking Gait AnalysisWriting Reflex TestOrdinal Logistic RegressionDisease Progression EvaluationTherapeutic Intervention ScreeningPhenotypic Transition Points

Related Articles