הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הדמיה נויטרופילים ומונוציטים בmesenteric ורידים על ידי מיקרוסקופית Intravital על עכברים מורדמים בזמן אמת

10.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/53314

⸱

16 בנובמבר 2015

 ,  , 
1Department of Pathology and Immunology, University of Geneva

במאמר זה

סיכום

אנו מפרטים פרוטוקול לניטור התנהגותם של נויטרופילים ומונוציטים בוורידים מזנטריים במצב יציב ובתנאים דלקתיים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית תוך-חיונית בעכברים מורדמים.

תקציר

תגובה חיסונית יעילה תלויה בגיוס מהיר של כדוריות דם לבנות בדם לאתר של זיהום או פציעה. חוקר הגירת יקוציט in vivo הוא חיוני להבנת הבסיס המולקולרי של הגירת Transendothelial יקוציט ואינטראקציה עם האנדותל של כלי דם. גישה רבת עוצמה אחד כרוכה מיקרוסקופיה intravital בעכברים הטרנסגניים לבטא חלבוני ניאון בתאים של עניין.

כאן אנו מציגים פרוטוקול למונוציטים הדמיה ונויטרופילים בCX 3 iv עכבר CR1 GFP / WT הוזרק נויטרופילים שכותרתו צבע כתומים עם מיקרוסקופ confocal הפוך. זמן לשגות סרטים שנאספו מ -30 דקות לכמה שעות של הדמיה מאפשרים הניתוח של התנהגות יקוציט בעורקי mesenteric תחת שני תנאי המדינה ודלקתיים יציבים. אנו גם מתארים את הצעדים כדי לגרום לדלקת בכלי דם באופן מקומי עם TLR2 / TLR1 אגוניסט Pam3SK4 ולפקח על subsequeגיוס NT של נויטרופילים ומונוציטים.

גם הטכניקה שהוצגה ניתן להשתמש כדי לעקוב אחר אוכלוסיות אחרות של לויקוציטים ולחקור מולקולות מעורבות בגיוס לויקוציטים או סחר באמצעות גירויים אחרים או עכברים מהונדסים.

מבוא

נויטרופילים ומונוציטים הם תאים של מערכת החיסון המולדת, כי כל זמן במחזור הדם. על פציעה או זיהום, אותות דלקתיים לגרום diapedesis לויקוציטים לרקמות שנפגעו ונגועים, במסמך ייזום תגובה חיסונית תאית 1-3. המהירות של גיוס לויקוציטים קובעת את התוצאה החיובית של התגובה החיסונית. תהליכים מורכבים אלה מסתמכים על מולקולות ספציפיות (למשל, selectins, כמוקינים מאוגדים האנדותל) הנוכחיות על האנדותל המודלק המסייעות להקמת קשר דבק בין כדוריות דם לבנות במחזור והאנדותל 1-3 בדי לקבל תובנות על המולקולות מעורבות ביקוציט מפל גיוס, חשוב לדמיין את קינטיקה של גיוס תא ולעקוב אחר ההתנהגות של כל תא / אוכלוסייה. שיטה יעילה כרוכה מיקרוסקופיה intravital בעכברים הטרנסגניים לבטא חלבוני ניאון בתאים של עניין.

תוכן "> נכון להיום, כמה גישות באמצעות מיקרוסקופ intravital פותחו לתמונה בכלי הדם 4,5. לדוגמא, הדמיה של כלי דם הדרמיס אוזן או ורידי mesenteric על ידי מיקרוסקופ confocal intravital שימשה לזהות סיור ההתנהגות של מונוציטים נמוכים Ly6C עכברי ואנושי CD14 לעמעם CD16 + מונוציטים בצד luminal של כלי דם בתנאי מצב יציבים 6-8. מודל כלי דם Cremaster העכבר משמש לעתים קרובות כדי לפקח על התנהגותם של נויטרופילים או מונוציטים גבוהים Ly6C הדלקתי בתנאים דלקתיים או איסכמי בעכברים מהונדסים. שב מקרה, Cremaster מגורה באמצעות הזרקת intrascrotal של IL1β, CCL2, TNFβ או fMLP. לאחר 2-4 שעות, רקמות ואז בניתוח exteriorized ונותחו על ידי מיקרוסקופיה confocal intravital 9-11.

הפרוטוקול הבא מתאר שיטה לניטור מונוציטים ונויטרופילים באותו הזמן עם כלהקרינה הפוכה מיקרוסקופ confocal. יתר על כן, השיטה שלנו מפרטת כיצד תמונה אותו כלי השיט לפני (מצב מצב יציב) ולאחר דלקת ואיך לבצע את קינטיקה של גיוס לויקוציטים. לצורך כך, אנו משתמשים 3 CR1 עכבר GFP / WT CX, מונוציטים שלהביע eGFP, הזריק IV עם נויטרופילים עכברי שכותרתו צבע כתום. באמצעות מיקרוסקופ confocal הפוך, זה אפשרי (1) למעקב וניתוח מונוציטים הנמוכים Ly6C הסיור בתנאי מצב יציבים ו( 2) למעקב הגיוס של שני מונוציטים ונויטרופילים באותו הכלי לאחר דלקת מקומית. כאן אנו יוצרים את המצבים דלקתיים על ידי השימוש באגוניסט TLR2 / TLR1 12 Pam3CSK4. יתר על כן, הדמיה כזו עשויה לעזור לקבוע את התפקיד של מולקולות ספציפיות של עניין בשלבים השונים של מפל גיוס לויקוציטים אם בוצע על עכברי נוק-אאוט ספציפיים או בנוכחות של נוגדני חסימת 6,9,13.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הערה: נהלי בעלי חיים בוצעו בהתאם לוועדה המוסדית האתית של טיפול בבעלי חיים בז'נבה, שווייץ ולשכת הווטרינרית המחוזית. מספר אישור GE / 63/14.

1. הכנת תרחיף תא בודד ממח העצם

  1. עכבר קורבן (8-12 בן שבוע) נקע בצוואר רחם. לעקר רגליים אחוריות עם 70% אתנול. להסיר עור מרגליים אחוריות.
  2. לנתח את עצמות ירך עכבר וtibias ולהסיר רקמה מרגליים עם אזמל. יש לשטוף את הרגליים עם 90% אתנול ומקום לתוך צלחת תרבות מלאה PBS.
  3. מתחת למכסה מנוע התרבות, רקמות נקיות מעצמות ירך וtibias עם אזמל ונפרד במפרק הברך. חותך את כל קצה של העצמות.
  4. מח עצם סומק מעצם באמצעות מחט 23G ומזרק 1 מיליליטר מלא בינוני הכנה (DMEM / F12 האדום ללא פנול, 1% בסרום עכברוש), לבורג 50 מיליליטר צינור. לשבש אגרגטים תא על ידי בעדינות passaging דרך ne 23Gedle ומזרק 1 מיליליטר. להביא נפח הכולל עד 25 מיליליטר עם מדיום הכנה.
  5. צנטריפוגה XG 250, 5 דקות, 4 ° C. supernatant מחק. Resuspend גלולה ב 1 מיליליטר של תאי דם אדומים חיץ תמוגה RBLC (8.3 גר 'NH 4 Cl, גרם NaHCO 1 3, 1 מיליליטר EDTA (100 מ"מ), שלם לL 1 עם מים מזוקקים, לסנן 0.22 מיקרומטר) בצינור 15 מיליליטר בורג. דגירה 30 שניות על קרח.
  6. הוסף 10 מיליליטר של מדיום ההכנה וXG 250 צנטריפוגות, 5 דקות, 4 מעלות צלזיוס. בטל supernatant וגלול ב 2 מיליליטר בינוני הכנה.

2. נויטרופילים העשרה על ידי סלקציה שלילית

  1. להוסיף 150 μl של קוקטייל העשרת נויטרופילים עכבר (ערכת פלטפורמת בידוד תא כגון EasySep). לערבב דגירה על קרח למשך 10 דקות.
  2. להוסיף 10 מיליליטר של פנול אדום DMEM החופשי. הפוך פעם צנטריפוגות 250 XG, 3 דקות, 4 מעלות צלזיוס.
  3. supernatant מחק. גלולה גלולה ב1.75 בינוני מיליליטר הכנה ב 5 מיליליטר קלקר עגול צינורות תחתון. הוסף 250 μl ביובקוקטייל בחירה. לערבב דגירה על קרח למשך 10 דקות.
  4. מערבולת חלקיקים המגנטיים (מערכת פלטפורמת בידוד תא) למשך 30 שניות כדי resuspend חלקיקים. הוסף 500 חלקיקים מגנטיים μl להשעיה תא. לערבב דגירה על קרח למשך 10 דקות.
  5. מניחים את הצינור לתוך המגנט. חכה 3 דקות.
  6. הפוך את המגנט על 5 מיליליטר קלקר חדש עגול צינורות תחתון כדי לאסוף את התאים ללא תווית הרצויה. אל תיקח את הטיפה האחרונה התלויה בצינור. תאים לא רצויים יישארו בצינור בתוך המגנט. בטל צינור זה לפסולת ביולוגית מסוכנת.
  7. מניחים את הצינור החדש לתוך המגנט. חכה 3 דקות.
  8. הפוך את המגנט על 15 מיליליטר חדש לדפוק צינור כדי לאסוף את התאים ללא תווית הרצויה. אל תיקח את הטיפה האחרונה התלויה בצינור.
  9. נפח מלא עד 5 מיליליטר עם DMEM החופשי פנול האדום.

3. תיוג של נויטרופילים

  1. הוסף 0.5 μl של צבע כתום כגון תא Tracker אורנג ריכוז עבודה (1 מיקרומטר, CMRA - chloromethyl-rodol-אצטט, מניית 10 מ"מ בDMSO). דגירה 2 דקות ב 37 מעלות צלזיוס.
  2. להוסיף 2.5 מיליליטר של מדיום הכנה. צנטריפוגה XG 250, 5 דקות, 4 ° C.
  3. supernatant מחק. גלולה גלולה במדיום 1 מיליליטר הכנה בצינור 1.5 מיליליטר.
  4. קח aliquot לספור עם hematocytometer.
  5. דגירה 5 דקות על 37 מעלות צלזיוס. צנטריפוגה XG 250, 5 דקות, 4 ° C.
  6. supernatant מחק. Resuspend גלולה ב 1 מיליליטר PBS. צנטריפוגה XG 250, 5 דקות, 4 ° C כדי לשטוף.
  7. supernatant מחק. גלולה גלולה כ10x10 6 תאים לכל 100 μl PBS. שמור על קרח עד הזרקת IV. הערה: תאים צריכים להיות מוזרק iv מהר ככל האפשר. 6-12x10 6 נויטרופילים / עכבר בדרך כלל מתקבל.

4. עכבר הכנה למיקרוסקופי Intravital

הערה:.. שלב 4.1) ו -4.2) צריכה להתבצע בתחילת הניסוי, כדי למנוע זמן ההמתנה ממושך של נויטרופילים שכותרת על ICדואר.

  1. לשקול את עכבר CX 3 CR1 GFP (8-12 בן שבוע).
  2. הכן 800 μl של הרדמה (60 מ"ג / קילוגרם קטמין, 4.5 מ"ג / קילוגרם xylazine, acepromazone 1.75 מ"ג / קילוגרם בPBS).
  3. הרדימי עכבר. IP הזרקה עם 200 μl / 20 גרם של עכבר. הרדמה שליטה על ידי בוהן צביטה ועל ידי בדיקת קצב הנשימה.
  4. הזרק נויטרופילים (10x10 6 תאים ב100 μl PBS) לוריד באמצעות ורידי זנב לרוחב או בסינוסים רטרו מסלולית, בנוחות של הנסיין.
  5. שים את העכבר על כרית חימום ולהגן על העיניים עם ג'ל העיני.
  6. Coverslip זכוכית (35 מ"מ קוטר) הוא לשים בצלחת תרבית רקמת 10 סנטימטרים, שבו יש חור בקוטר 30 מ"מ. שמן שימוש הוא לשמור על צלחת תרבית רקמה במגע עם coverslip.
  7. לחתוך עור בטן במספריים כדי לחשוף את הצפק. לחתוך הצפק עם מספריים לחשוף מעי.
  8. להוסיף 200 μl PBS (מחומם מראש על 37 מעלות צלזיוס) לעמחלל eritoneal. קח את העכבר ביד שלך ולהפוך אותו עם פנים כלפי מטה, כך שהמעי יוצא מחלל הצפק עם לחץ עדין. מניחים את העכבר בצלחת תרבית רקמה.
  9. בעדינות deroll המעי עם ניצני כותנה מעוקרים על coverslip כדי לחשוף את כלי mesenteric.
  10. לחתוך רקמות נייר בלהקות ולהרטיב אותם עם 37 מעלות צלזיוס PBS מחומם. לשתק את המעי עם החתיכות של רקמות נייר כדי להקטין את התנועות הנובעות מתנועה פריסטלטית.
  11. שים את צלחת תרבית רקמה והעכבר בתוך חדר thermostated 37 ° C על הבמה המגש המותאמת אישית של מיקרוסקופ ההפוכה. להציג את מזרק המכיל sc הרדמה לרגלו האחורית. הערה: בנוסף, העכבר יכול לקבל חמצן (0.5 ליטר / דקה) עם מסכה.
  12. עכבר בקרה להרדמה על ידי בוהן צביטה ובדיקת קצב הנשימה בכל 30 דקות. במידת הצורך, לספק דחיפה של הרדמה (20 μl) כדי לשמור על הרדמה כראוי. לֹאE: יש להימנע ייבוש של כלי הדם. לכן, לחותו נשמר על ידי ההרטבה באופן קבוע רקמות נייר משמשות כדי לשתק את המעי עם 37 מעלות PBS חימם-C.

5. התנהגות מדידת נויטרופילים ומונוציטים בכלי שייט מוסת in vivo באמצעות מיקרוסקופית Intravital

  1. לייזרי סט ל488- ו561- בהספק הנמוך ביותר הנחוץ כדי למנוע phototoxicity מושרה לייזר. בניסויים שלנו, הוא נמוך מ -0.5%. עוצמה של ה- GFP במונוציטים וצבע כתום בנויטרופילים היא כל כך בהירה, כי בדרך כלל 0.3% הוא מספיק. הערה: זה מייצג כוח לייזר של 0.15-0.25 mW עם המערכת שלנו.
  2. לרכוש תמונות של 512 x 512 פיקסלים (כלומר, 635 מיקרומטר) ב 2.2 שניות עם חריר פתוח באמצעות אובייקטיבי היבשה 20X של מיקרוסקופ ההפוכה. השתמש בZ- עומק בין 10 עד 20 מיקרומטר, שמבטיח אות מספיק עם סמכויות לייזר נמוכות.
    הערה: אנחנו בדרך כלל לבצע ניסויים עם Z- עומק בין 12 עד 1656; מ '. במקרה של דמויות וסרטים שהוצגו, Z- העומק הוא 20 מיקרומטר. בניגוד שלב מאפשר זיהוי של קירות אנדותל והדמיה מתבצעת על ורידי mesenteric. מאחר ותאים שסיירו לעבור די לאט עם מהירות של 5-10 מיקרומטר / min 6, הקלטת תחום העניין בכל 20 שניות היא משביעת רצון. עם ההגדרות שתוארו, השלב הממונע מאפשר ההקלטה של ​​עד 7 תחומי העניין באותו הזמן.
  3. מניחים את העכבר וכלי mesenteric בתא התרמוסטט של המיקרוסקופ הם לאפשר להם להתאושש מההכנה למשך 30 דקות לפני הרכישה של הסרט הראשון. במהלך תקופה זו, לבחור כמה תחומי העניין. פוקוס על פני השטח luminal של כלי השיט הקרוב ביותר למטרה. במידת הצורך, לנצל את אוטומטי הקרינה הקלה של האנדותל כדי להגדיר את המיקוד.
    הערה: ניתוח במהלך הכנת עכבר מעט מדגיש את האנדותל. כתוצאה מכך, מתגלגל של נויטרופילים וניתן לצפות / או מונוציטים בהכנת 15 דקות הראשונה שלאחר העכבר.
  4. להקליט סרט ראשון למשך 30 דקות בתנאי מצב יציבים, תמונה אחת בכל 20 שניות.
    הערה: התוכנה רוכשת כל תחום העניין ב2.2 שניות והבמה הממונעת עוברת באופן אוטומטי מתחום אחד למשנהו. זה חוזר למצב הראשון בתוך 20 שניות במהלך 30 דקות של סרט ההקלטה.
  5. ליזום דלקת בכלי דם, להוסיף טיפה של 20 μl של PBS המכילה TLR2 של 100 מיקרוגרם / TLR1 אגוניסט Pam3CSK4 12 ישירות על כלי הדמיה.
  6. לשלוט במיקוד לכל תחום העניין.
    הערה: במהלך הרכישה, תמיד יש שינויים קלים של התמקדות בציר z. למרות Z- עומק 10-20 מיקרומטר, זה יכול לגרום לירידה של עוצמת הקרינה. לכן, למקד ידני בכל תחום העניין בסופו של כל סרט, במידת צורך. הקלטת סרטים למשך 30 דקות תקופות ועד 3 שעות לטל לאחר תחילת הדלקת.
  7. בסוף הניסוי, להקריב את העכבר הרדים נקע בצוואר רחם.

6. דור של קבצי סרטים ומעקב של לויקוציטים

הערה: רכישת תוכנת ניקון מייצרת .nd2 קבצים אבל ההליך הבא יהיה דומה עם תוכנה ומותגים אחרים.

  1. קבצי יצוא סדרת TIFF כ.
  2. עבור לתוכנת ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/). לייבא את סדרת TIFF. כל ערוץ כקובץ שונה.
  3. החל מסנן חציון ברדיוס של 2.0 פיקסל לערוצים הירוקים ואדום כדי להפחית את רעש רקע (תהליך> מסננים> חציון ...).
  4. להמיר קבצים לינארי (תהליך> ינארי> הפוך ינארי). הפעל את התוכנה על מנת לחשב את הסף לכל תמונה.
  5. מיזוג ערוצי סדרת תמונה אחת (תמונה> צבע> מיזוג ערוצים ...) ל. בחר מונוציטים בGreeערוץ n, נויטרופילים במסלול האדום והאור מועבר בערוץ האפור.
  6. המרת תמונות נערמו לצבעי RGB (תמונה> צבע> מחסנית ל- RGB).
  7. שמור את הקובץ כ.אבי
  8. נתונים מיובאים והידור בתוכנת Imaris (Bitplane). תנועות של מונוציטים ונויטרופילים לאחר מכן מעקב באמצעות ספוט מעקב האשף.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כתב היד מתארת ​​פרוטוקול מותאם כדי לפקח על התנהגותם של מונוציטים ונויטרופילים בורידי mesenteric של עכברים מורדמים בזמן אמת בקלות. השימוש בתא thermostated-37 ° C הוא חובה כדי לשמור על הטמפרטורה של העכבר וגם בשל התנועה תלויה בטמפרטורה של לויקוציטים. הכנה של העכבר מוצגת באיור 1. איור 2 מציג את כל האזור ראה מתחת למיקרוסקופ. אור מועבר מאפשר זיהוי של ורידי mesenteric (חץ אדום) ועורקים (חץ כחול).

טיפול ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מתודולוגיות מתוארות בכתב היד הזה מספקים גישה עקבית ללמוד ביעילות מונוציטים ונויטרופילים התנהגות בעורקי mesenteric בתנאי מדינה ודלקתית יציבים.

הצעד המכריע של ההכנה הוא חוסר תנועה של המעי עם רקמות הרטובות-PBS. אם מבוצע כראוי, כלי mesenteric הם יפה נחשפו על coverslip לרכישת תמונה. זה מאפשר את הבחירה של כמה תחומי העניין לפקח יקוציט התנהגות בעורקי mesenteric.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי EMBO (ל-Y.E.), Foundation Machaon (ל-Y.E.) ו-SNSF (ל-B.A.I). אנו מודים למתקן הליבה של ההדמיה הביולוגית על הזמינות של מיקרוסקופ ה-A1r של Nikon ועל הסיוע הטכני. אנו מודים לגברת קלריסה בארטלי על התיקון באנגלית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
5 מ"ל צינורות תחתונים עגולים מפוליסטירן בקטון דיקינסון352058
10x CFI Plan Apochromat 0.45    DT:4 מ"מ Nikon
20x CFI Plan Apochromat VC 0.75 DT:1mm Nikon
Cell Tracker כתום CMRA DyeLife TechnologiesC34551
EasySep מגנטתאי גזע טכנולוגיות18000
EasySep עכבר נויטרופילים ערכת העשרהטכנולוגיות תאי גזע19762
EDTASigma AldrichE6758
FCSPAAA15-042
שמן טבילה סוג Aניקוןכל שמן צמיג 
Life Box בקרת טמפרטורהמערכת הדמיית
NaHCO3Sigma AldrichS5761
NH4ClSigma AldrichA9434
Nikon A1R מיקרוסקופ קונפוקליNikonA1Rמיקרוסקופ הפוך, שלב x/y/z ממונע, תוכנת אלמנטים
NIS PBSLife TechnologiesD8537
פנול אדום חינם DMEM/F12Life Technologies21041-025כל מדיום נטול פנול אדום מתאים
PAM3CSK4Invivogentlrl-pmsלהרכיב מחדש בסרום PBS
עכברושתאי גזעהכלולות בערכת העשרת נויטרופילים של עכבר EasySep
צלחת תרבית רקמות 100TPP93100
חיים טכנולוגיות

מקורות

  1. Ley, K., Laudanna, C., Cybulsky, M. I., Nourshargh, S. Getting to the site of inflammation: the leukocyte adhesion cascade updated. Nat Rev Immunol. 7, 678-689 (2007).
  2. Nourshargh, S., Hordijk, P. L., Sixt, M. Breaching multiple barriers: leukocyte motility through venular walls and the interstitium. Nat Rev Mol Cell Biol. 11, 366-378 (2010).
  3. Nourshargh, S., Alon, R. Leukocyte migration into inflamed tissues. Immunity. 41, 694-707 (2014).
  4. Ley, K., et al. Chapter 11. Intravital microscopic investigation of leukocyte interactions with the blood vessel wall. Methods Enzymol. 445, 255-279 (2008).
  5. Sperandio, M., Pickard, J., Unnikrishnan, S., Acton, S. T., Ley, K. Analysis of leukocyte rolling in vivo and in vitro. Methods Enzymol. 416, 346-371 (2006).
  6. Auffray, C., et al. Monitoring of blood vessels and tissues by a population of monocytes with patrolling behavior. Science. 317, 666-670 (2007).
  7. Cros, J., et al. Human CD14dim monocytes patrol and sense nucleic acids and viruses via TLR7 and TLR8 receptors. Immunity. 33, 375-386 (2010).
  8. Hanna, R. N., et al. The transcription factor NR4A1 (Nur77) controls bone marrow differentiation and the survival of Ly6C- monocytes. Nat Immunol. 12, 778-785 (2011).
  9. Woodfin, A., et al. The junctional adhesion molecule JAM-C regulates polarized transendothelial migration of neutrophils in vivo. Nat Immunol. 12, 761-769 (2011).
  10. Proebstl, D., et al. Pericytes support neutrophil subendothelial cell crawling and breaching of venular walls in vivo. J Exp Med. 209, 1219-1234 (2012).
  11. Wantha, S., et al. Neutrophil-derived cathelicidin promotes adhesion of classical monocytes. Circ Res. 112, 792-801 (2013).
  12. Ozinsky, A., et al. The repertoire for pattern recognition of pathogens by the innate immune system is defined by cooperation between toll-like receptors. Proc Natl Acad Sci U.S.A. 97, 13766-13771 (2000).
  13. Lammermann, T., et al. Neutrophil swarms require LTB4 and integrins at sites of cell death in vivo. Nature. 498, 371-375 (2013).
  14. Carlin, L. M., et al. Nr4a1-dependent Ly6C(low) monocytes monitor endothelial cells and orchestrate their disposal. Cell. 153, 362-375 (2013).
  15. Hamon, P., Rodero, M. P., Combadiere, C., Boissonnas, A. Tracking mouse bone marrow monocytes in vivo. J Vis Exp. , (2015).
  16. Iqbal, A. J., et al. Human CD68 promoter GFP transgenic mice allow analysis of monocyte to macrophage differentiation in vivo. Blood. 124, e33-e44 (2014).
  17. Jenne, C. N., Wong, C. H., Petri, B., Kubes, P. The use of spinning-disk confocal microscopy for the intravital analysis of platelet dynamics in response to systemic and local inflammation. PloS One. 6, e25109(2011).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

TLR2 TLR1CX3CR1 GFP
הדמיה נויטרופילים ומונוציטים בmesenteric ורידים על ידי מיקרוסקופית Intravital על עכברים מורדמים בזמן אמת
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.