Method Article

שיטה פשוטה למיצוי שלב המוצק האוטומטי של דגימות מים לניתוח החיסוני של מזהמים קטנים

DOI:

10.3791/53438

⸱

January 1st, 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Centre Suisse d'Electronique et de Microtechnique, 2Department of Chemistry and Applied Biosciences, ETH Zurich, 3Department of Information Technology and Electrical Engineering, ETH Zurich

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מוצג פרוטוקול למיצוי וריכוז מראש של אסטרדיול מדגימות מים באמצעות מערכת אוטומטית וממוזערת.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שיטה חדשה להפקה מוצקה שלב (SPE) של דגימות מים סביבתיות מוצעת. אב הטיפוס שפותח הוא יעיל וחסכוני וידידותיות למשתמש, ומאפשר לבצע SPE מהיר, אוטומטי ופשוט. הפתרון מראש מרוכז תואם ניתוח על ידי immunoassay, עם תוכן ממס אורגני נמוך. שיטה מתוארת לחילוץ ומראש ריכוז של 17β-אסטרדיול הורמון טבעי במיליליטר 100 דגימות מים. שלב הפוך SPE מתבצע עם סופג octadecyl-סיליקה וelution נעשה עם 200 μl של מתנול 50% V / V. Eluent מדולל על ידי הוספת di-מים כדי להפחית את הכמות של מתנול. לאחר ההכנה ידנית עמודת SPE, ההליך הכולל מתבצע באופן אוטומטי בשעה 1. בסופו של התהליך, ריכוז אסטרדיול נמדד באמצעות assay מסחרי צמוד אנזים חיסוני-סופג (ELISA). טרום ריכוז של פי 100 מושגת ותוכן מתנול רק 10% V / V. החלמה מלאה של המולקולההם השיגו עם 1 ננוגרם / L ממוסמר דגימות מי ים דה מיוננים וסינתטיות.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לדוגמא הכנה היא צעד חשוב בכל תהליך אנליטי. בפרט, הסרת אפקטי מטריקס, ההפחתה של הפרעות, והעשרה של אנליטי נחוצות כדי להשיג תוצאות מדויקות ולהגיע גבולות נמוכים של גילוי. תרכובות האנדוקרינית לשבש (EDCs) הן מדאיגות במיוחד בשל פעולתם באורגניזמים החיים, גם כאשר הרמות נמוכות מאוד בהווה בסביבה. 17β-אסטרדיול ההורמון הטבעי קיים בזיהום המים האיחוד האירופי רשימת מעקב ונוטה להוסיף לרשימה של חומרי עדיפות מוסדרים באירופה המים מסגרת ההוראה. מיצוי שלב מוצק (SPE) מיושם בדרך כלל לניתוח של מזהמים קטנים במים, עם שני הכימית 1-5 (כרומטוגרפיה, ספקטרוסקופיית מסות) ושיטות זיהוי חיסוניות 6-9. האחרון זכה להתעניינות בתחום הניטור סביבתי,....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הערה: הפרוטוקול הבא מתאר את SPE בוצע על 100 מדגם מיליליטר מים עם סופג C18 וelution עם 50% מתנול V / V. המדגם המועשר מדולל להגיע 10% מתנול V / V לפני ניתוח עם אנזים קשור immunosorbent assay ערכה (ELISA).

1. הכנת ריאגנטים

  1. הכן את דגימות המים
    1. לפני כל צעד אחר, לסנן כל דגימת 100 מיליליטר מים עם מסנני גודל 0.2 מיקרומטר נקבובית.
    2. ספייק המדגם ע....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שחזור של אריזה סופגת הוערך על ידי ייבוש ושקלול הסופג pipetted בבקבוקוני זכוכית והתוצאה מוצגת באיור 1. שחזור של זמן הזרקה נבדקה עבור דגימות 100 מיליליטר, כפי שמוצגת באיור 2. ריכוז ובראשוני מראש מרוכז ממוסמר דגימות נקבעו על ידי שימוש בערכת ELISA מסחרית ל17β-אסטרדיול ומוצגות באיור 3.

ההליך המוצע כרוך .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שיטה חדשה להכנת דגימות מים ואחריו ניתוח באמצעות immunoassay הוצעה. המכשיר מאפשר לבצע מיצוי שלב מוצק בצורה אוטומטית וידידותי למשתמש.

הסינון של דגימת המים לפני הזרקתו למערכת הוא קריטי. כל חלקיקים שעדיין קיימים בפתרון היה פוטנציאל לגרום לסתימה של רשת fluidic ולחסום את טור SPE. צעד חשוב נוסף הוא ההכנה של טור SPE. כמות החלקיקים בעמודה היא קריטית כדי להשיג את הביצועים הטובים ביותר אפשריים. יש לנקוט זהירות מיוחדת בעת הכ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו מומנה על ידי תוכנית המסגרת השביעית של האיחוד האירופי FP7/2007-2013 במסגרת הסכם מענק מס' 265721. המחברים מודים למכון RIKILT לבטיחות מזון (NL) על תמיכתם בפרויקט זה.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
קרום סינון 0.2 μ m גודל נקבוביותMerck MilliporeGNWP04700לסינון מדגם
קרום ניילון 11 μ m גודל נקבוביותMerck MilliporeNY1104700לטור SPE
ביופסיה חד פעמית אגרוף 5 מ"מתקציב רפואי39302439
Nucleodur C18 ec Macherey Nagel713550.0150 μ m קוטר חלקיקים
מי ים סינתטיים סיגמאאולדריץ'SSWS500-500 מ"ל
מתנולVWR
17 בטא-אסטרדיול תקןEnzo Life Science300 ננוגרם/מ"ל
17 בטא-אסטרדיול ערכת ELISAEnzo Life ScienceADI-900-00896 בארות, טווח 30 - 3,000 ננוגרם/ליטר

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water. J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).
  2. Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Solid Phase ExtractionAutomated SPEWater Sample AnalysisImmunoassay CompatibilityEstradiol DetectionOctadecyl Silica SorbentMethanol ElutionELISA AnalysisEnvironmental MonitoringPollutant Pre concentration

Related Articles