Method Article

הודעת הטור derivatization שימוש ביצועים גבוהים תזרים תגובת עמודות נוזלת כרומטוגרפיה

DOI:

10.3791/53462

⸱

April 26th, 2016

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Science and Health, University of Western Sydney, 2Van′t Hoff Institute for Molecular Sciences, University of Amsterdam

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מוצג פרוטוקול לשימוש בעמודות כרומטוגרפיה נוזלית בעלות ביצועים גבוהים של זרימת תגובה לשיטות המשתמשות בנגזרת פוסט עמודה (PCD).

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מוצג פרוטוקול לשימוש בעמודות כרומטוגרפיה נוזלית בעלות ביצועים גבוהים של זרימת תגובה לשיטות המשתמשות בנגזרת פוסט עמודה (PCD). קושי מרכזי בהתאמת PCD למערכות ועמודות HPLC מודרניות הוא הצורך בסלילי תגובה בנפח גדול המאפשרים ערבוב ריאגנטים ולאחר מכן תגובת הנגזרת להתרחש. נפח עמוד עמוד גדול זה מוביל להרחבת הלהקה, מה שמביא לאובדן יעילות ההפרדה הנצפית ואכן זיהוי ברגישות. בזרימת תגובה לאחר נגזרת עמודה (RF-PCD) ריאגנט הנגזרת נשאב כנגד זרימת השלב הנייד לתוך אחת או שתיים מהיציאות החיצוניות של עמודת זרימת התגובה, שם הוא מעורבב עם שפכי עמודה בתוך פריט השוכן בתוך מתקן קצה העמודה. טכניקה זו מאפשרת ערבוב יעיל יותר של ריאגנט/ים של שפכי העמודה והנגזרת, כלומר ניתן למזער את נפח לולאות התגובה או אפילו לבטל לחלוטין. נמצא כי שיטות RF-PCD מתפקדות טוב יותר משיטות PCD קונבנציונליות מבחינת יעילות ההפרדה הנצפית ויחס האות לרעש. יתרון נוסף של טכניקות RF-PCD הוא היכולת לנטר שפכים המגיעים מהיציאה המרכזית במצבם התת-קרקעי. RF-PCD נוסה כעת על מגוון קטן יחסית של תגובות לאחר עמודה, עם זאת, אין כרגע סיבה להציע שלא ניתן להתאים את RF-PCD לאף רכיב אחד או שניים קיימים (כל עוד שני הריאגנטים מתווספים בו זמנית) לאחר תגובת נגזרת העמודה.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים (HPLC) בשילוב עם פוסט טור derivatization (PCD) היא כלי רב עצמה כי הוא שימושי בפתרון מספר בעיות במעבדה האנליטית. זה יכול לשמש כדי לזהות תרכובות שאינן אחר לגילוי עם החבילה של גלאי זמין 1,2, להגדיל את האות של אנליטי היעד, המאפשר גבולות נמוכים של גילוי quantitation 3-5 או סלקטיבי derivatize אנליטי יעד על מנת למנוע תופעות מטריקס 6. בשימוש נפוץ התגובות PCD כוללים התגובה של אמינים, כגון חומצות אמינו, עם-phthaladehyde אורתו 7-9, ninhydrin 9,10 או fluorescamine 11,12, את derivatization של מינים חמצן תגובתי (ROS) עם 2,2-diphenyl- 1-picrylh....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זהירות: עיין גיליונות נתוני בטיחות חומרים (MSDS) עבור כל החומרים ריאגנטים לפני השימוש (כלומר, MSDS עבור מתנול). להבטיח את השימוש של כל נהלי הבטיחות המתאימים בעת טיפול ממסים בעל ביצועים גבוהים eluent הנוזל כרומטוגרפיה (HPLC). ודא שימוש נאות של בקרות הנדסה של HPLC, מכשור איזון גלאי אנליטיים, ולהבטיח את השימוש בציוד מגן אישי (משקפי מגן, כפפות, חלוק, מכנסיים באורך מלא, ונעליים סגורות).

הערה: פרוטוקול זה מתאר 3 שיטות derivatization שלאחר טור זרימת תגובה (RF-PCD) טכניקות, כל אחד עם מגיב שונה ספציפי לאופי תרכובת כימית של עניין. לניתוח של ROS עבור לפרק "1. איתור של ROS באמצעות DPPH •", לני....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שיטת PCD הראשונה הותאמה לשימוש על ידי RF-PCD הייתה derivatization של נוגדי חמצון באמצעות 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil הרדיקלי (DPPH •) 24. תגובה זו הונהגה על ידי ואח Koleva. 25 כבר בשימוש נרחב מאז. הגילוי מסתמך על הַדהָיָה של DPPH • הרדיקלי בנוכחות של מיני חמצן תגובתי, ומכאן הנוכחות של תוצאות נוגדות חמצון טיפה הספיגה ציינה. תגובת DPPH • לעתים קרובות מעסיקה לולאות תגובה גדולות של 500 μl או יותר 13-15, אולם .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

RF-PCD מאפשר ערבוב יעיל של מגיב derivatization עם הפוסט-טור בשפכים HPLC ללא שימוש סלילי התגובה, למזער את ההשפעות של הרחבת הלהקה ושיפור ביצועים ההפרדה. שיטות RF-PCD גם הראו שיפורים בתגובה האות ביחס שיטת הזיהוי. Camenzuli et al. 28 היה הראשון לדווח על השימוש בעמודי זרימת תגובה עם DPPH • לצורך זיהוי של ROS ב מדגם קפה אספרסו. המחקר כלל ניתוח ואופטימיזציה של תנאי RF כדי להשיג ביצועים מרביים, בדיקות טווח הריכוזים DPPH • עם ספיקות DPPH •

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי UWS ו-ThermoFisher Scientific. אחד המחברים (DK) מודה על קבלת פרס אוסטרלי לתארים מתקדמים.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
מכשיר HPLCAgilent1290 סדרת HPLC
משאבות נוספות למערכת נגזרותShimadzuLC-20A
RF columצינורות PEEK לא
מסחרייםSigma AldrichZ227307
פקקימסופקים עם
חותך צינור PEEKSigma אולדריץ'Z290882
איזוןאיזון אנליטי 4 נקודות
שעוןציוד לא מדעי
בקבוקוניבקבוקון קטן עם תחתית שטוחה יתאים, למשל , בקבוקוני HPLC
בקבוקונייהיה תלוי במכשיר בו נעשה שימוש
כלים לפתרונות פאזה ונגזרת ניידיםSigma AldrichZ232211
General Laboratory כלי זכוכיתצלוחיות נפח, פיפטות, etc. כמות ונפחים יהיו תלויים בשיטת הכנת הדגימה.
מתנולסיגמא אולדריץ'34860
DPPHסיגמא אולדריץ'D9132
אמוניום אצטטסיגמא אולדריץ'17836
אמוניהסיגמא אולדריץ'320145קורוזיבי
סיגמא אולדריץ'34998
פלואורסקמיןסיגמא אולדריץ'F9015
4- אמינואנטיפירן Acros Organics BVBAAC103151000
אשלגן פריציאניד אנאלהRB10204-30
עמודים עמוד סולם אנליטי עצור איסוף כל HPLC אצטוניטריל

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Srijaranai, S., et al. Use of 1-(2-pyridylazo)-2-naphthol as the post column reagent for ion exchange chromatography of heavy metals in environmental samples. Microchem. J. 99, 152-158 (2011).
  2. Kubickova, A., Kubicek, V., Coufal, P.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Post Column DerivatizationReaction Flow ColumnHigh Performance Liquid ChromatographyReaction Flow PCDConventional PCDBand BroadeningSeparation EfficiencySignal to Noise RatioUV VIS DetectorFlow Rate Optimization

Related Articles