מאמר שיטה

מליחות תלויות Assay הרעילה של הכסף Nanocolloids שימוש Medaka ביצים

DOI:

10.3791/53550

⸱

18 במרץ 2016

 , 
1Graduate School of Life Sciences, Toyo University, 2Research Center for Life and Environmental Sciences, Toyo University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שלבים עובריים הם הרגישים ביותר לקסנוביוטיקה. למרות שרעילות כימית תלויה במליחות, לא קיימת שיטה לבדיקת תלות המליחות של רעילות לאורגניזמים מימיים. כאן, אנו מתארים שיטה חדשה ובעלת תפוקה גבוהה לקביעת תלות המליחות של רעילות לעוברים מימיים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מליחות היא מאפיין חשוב של הסביבה המימית. לאורגניזמים מימיים הוא מגדיר את בתי הגידול של מים מתוקים, מים מליחים, ומי ים. בדיקות הרעילות של חומרים כימיים והערכות הסיכונים האקולוגיים שלהם לאורגניזמים מימיים מבוצעות לעתים קרובות במים מתוקים, אך הרעיל של כימיקלים לאורגניזמים מימיים תלוי pH, טמפרטורה, ומליחויות. אין שיטה, עם זאת, לבדיקת התלות המליחה רעילה לאורגניזמים מימיים. הנה, השתמשנו medaka (Oryzias latipes) כי הם יכולים להסתגל מים מתוקים, מים מליחים, ומי ים. ריכוזים שונים של המדיום העובר לגידול (ERM) (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, ו- 30x) הועסקו כדי לבדוק את רעילות של חלקיקים nanocolloidal כסף (SNCs) כדי Medaka ביצים (ERM 1x ו 30x ERM יש מקבילה לחץ אוסמוטי כדי מים מתוקים ומי ים, בהתאמה). בשש-גם צלחות פלסטיק, 15 ביצי Medaka בשלושה עותקים נחשפו SNCs ב 10 מ"ג / L &# 8722; 1 בריכוזים שונים של ERM ב- pH 7 ו -25 ° C בחושך.

אנו השתמשנו במיקרוסקופ לנתח מיקרומטר למדוד את קצב לב לכל 15 קוטר שניות ועין ביום 6 ואורך גוף מלא של הזחלים על בקיעת יום (סעיף 4). עובר נצפו עד בקיעה או יום 14; אז אנחנו נספר שיעור הבקיעה כל יום במשך 14 ימים (סעיף 4). כדי לראות הצטברות כסף בעוברים, השתמשנו מצמידים אינדוקטיבי ספקטרומטריית מסה פלזמה למדוד את ריכוז כסף של פתרונות בדיקה (סעיף 5) ועוברים dechorionated (סעיף 6) .the רעילות של SNCs עוברי medaka ברור גדל עם הגדלת המליחות. שיטה חדשה זו מאפשרת לנו לבדוק את הרעילות של כימיקלים במליחות שונה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאז הקמתה של הארגון לשיתוף פעולה ולפיתוח כלכלי (OECD) הנחיות הבדיקה לכימיקלים בדיקות בשנת 1979, 38 הנחיות הבדיקה פורסמו בסעיף 2 של הנחיות, השפעות על ביוטי מערכות 1. כל אורגניזמים הימיים נבדקו כבר מן בתי גידול של מים מתוקים, צמחי מים מתוקים כלומר; אַצוֹת; חסרי חוליות כגון דפניות ו chironomids; ודגים כגון medaka, דג זברה, ו פורל קשת. בהשוואה לסביבות מים מלוחות, מים מתוקי סביבות מושפעות באופן ישיר יותר על ידי פעילות כלכלית ותעשייתית אדם. לכן, בסביבות מים מתוקים כבר עדיפות לבדיקה משום שהם נמצאים בסיכון גבוה יותר מזיהום.

באזורי החוף, כולל שפכי נהרות, למליחות להשתנות בין תנאי מים מליחים ומי ים, ואזורים אלה מזוהמים לעיתים קרובות על ידי פעילות תעשייתית 2. באזורי החוף ביצות הקשורים בהם מאופיינים high מגוון ביולוגי ופריון אקולוגי. מערכות אקולוגיות החוף ולכן צריך להיות מוגן מפני זיהום כימי. עם זאת, יש הוגבל מחקר ecotoxicological בבתי גידול מים מליחים ומי ים.

Sakaizumi 3 בחן את האינטראקציות רעילים בין מתיל-כספית ומליחות בביצים Medaka היפני ומצא כי להגביר את הלחץ האוסמוטי של פתרון המבחן משופרת הרעילות של מתיל-כספית. . Sumitani ואח 4 בשימוש ביצים Medaka לחקור את הרעילות של התשטיפים הטמנה; הם מצאו כי השקילות האוסמוטי של התשטיפים אל הביצים היו המפתח גרימת מומים במהלך embryogenesis. בנוסף, Kashiwada 5 דיווחה כי חלקיקי פלסטיק (39.4 ננומטר בקוטר) חלחלו בקלות הדרך הסיסית medaka הביצה בתנאים מליחים (15x הבינוני גידול העובר (ERM)).

דגם דגים קטן טיפוסי, Medaka היפני (latipes Oryzias ) נעשה שימוש בביולוגיה בסיסית ecotoxicology 6. Medaka היפני יכול לחיות בתנאים החל מים מתוקים מי ים בגלל תאי כלוריד המפותחים ביותר שלהם 7. לכן הם עשויים להיות שימושיים לבדיקה בתנאים עם מגוון רחב של למליחות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Medaka היפני השתמש במחקר זה טופל באופן הומאני בהתאם להנחיות המוסדיות של Toyo אונ' ובשים לב להקלה של מצוקה ואי נוחות.

1. כסף Nanocolloids (SNCs)

  1. לרכוש SNCs המטוהר (20 מ"ג / ל -1, טוהר% 99.99, חלקיקים מתכוונים בקוטר כ ננומטר 28.4 ± 8.5 המרחפים במים מזוקקים).
  2. אמת את הטוהר וריכוז של הכסף על ידי ספקטרומטריית מסת פלזמה מצמידה אינדוקטיבי (ICP-MS) מנתח על פי הפעלה במדריך 8. השיטה המקדימה עבור ICP-MS הניתוחי מתוארת בסעיף 7.

2. הכנת פתרונות SNC (תערובות של קולואידים סילבר Ag +) עם המליחות שונים

  1. הכן 60 × ERM בהיקף של 60 גרם NaCl, KCl 1.8 גרם, 2.4 גרם CaCl 2 · 2H 2 O, ו 9.78 גרם MgSO 4 · 7H 2 O ב 1 ליטר של ultמי rapure; להתאים את ה- pH ל 7.0 עם 1.25% NaHCO 3 במים ultrapure.
  2. מערבבים את הפתרון ERM ב 25 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
  3. מערבבים SNCs עם ERM מדולל. הכן 40 מ"ל של כל פתרון מעורב SNC-ERM. הריכוז הסופי הוא 10 מ"ג / ל -1 של SNCs בריכוזים שונים של ERM (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x או).
  4. התאם את ה- pH של הפתרון המעורב SNC-ERM ל -7.0 עם 0.625% NaHCO 3 במי ultrapure. התאמת pH חשובה מאוד בהכנת פתרון SNC, כי שחרור Ag + בהנחייתם בתנאים חומציים 9.
  5. השתמש אגנו 3 כמתחם התייחסות SNCs.
    1. מערבבים אגנו 3 עם מדולל ERM. הכן 40 מ"ל של אגנו 3 -ERM פתרון מעורב לעבר ריכוז אגנו 3 של 15.7 מ"ג / ל -1 (10 מ"ג / ל -1 כסף) בריכוזים שונים של ERM (1x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x או) .
      הערה: כדי לבדוק רעילות קולואיד כסף, אגנו 3פתרון, אשר מהווה מקור של כסף מסיס, משמש כמתחם התייחסות SNCs, שהם תערובת של קולואידים כסף וכסף מסיס.

תרבות ביצה קציר 3. Medaka

  1. השג את medaka (O. latipes) (זן כתום-אדום) (60 גברים ו -60 נשים).
  2. Medaka תרבות כקבוצות (20 זכרים ו -20 נקבות כקבוצה אחת) ב ERM 1x ב 3 טנקים L באמצעות מערכת culturing זרימה דרך medaka.
    1. תרבות על התנאים הבאים:
      טווח ה- pH של מדיום התרבות: 6.2 כדי 6.5
      מחזור כהה:: אור 16: 8 שעות
      טמפרטורה של מדיום התרבות: 24 ± 0.5 ° C
      הלחץ האוסמוטי של המדיום תרבות: 257 mOsm
  3. Feed medaka על Nauplii Salina הארטמיה בשעה 10:00 (פעם ביום) ולהאכיל דיאטה דגים יבש מלאכותית בשעה 09:00, 11:00, 13:00, 15:00, 17:00 (חמש פעמים ביום).
    1. השג א Salina Nauplii.
    2. כן 5 ליטר של תמיסת מלח 3.0% בכוס פלסטיק.
    3. להוסיף 30 גרם של ביצים ארטמיה לפתרון מלח בכוס.
    4. דגירת הביצים על 25 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות עם המבעבעים (4 L / min -1) באמצעות משאבת אוורור.
    5. לאחר 48 שעות, לעצור את המבעבע.
    6. אפשר הפתרון לעמוד במשך 5 עד 10 דקות כדי להפריד את א בקע Salina Nauplii (חלק תחתון של הפתרון) מן הביצים וקליפות ביצים שלא נולדו (חלק עליון של הפתרון).
    7. הסר את השכבה העליונה של הפתרון על ידי decantation.
    8. סנן את החלק התחתון של הפתרון דרך מסננת עם פתחים של 283 מיקרומטר, לאסוף את Nauplii העוברות על רשת עם פתחים של 198 מיקרומטר.
    9. להאכיל את Nauplii אל medaka בתוך 6 שעות.
  4. לאחר Medaka הנקבה הולידה, להסיר את אשכולות ביצה החיצוניים בעדינות מהגופים 'הנקבות או לאסוף את הביצים מהתחתיות האקווריום באמצעות SMהכל בניכוי (גודל נטו 5 ס"מ x 5 ס"מ, גודל החור 0.2 מ"מ x 0.2 מ"מ).
  5. שוטפים את אשכול ביצה עם מים זורמים מהברז במשך 5 שניות.
  6. הוסף את כל אשכולות ביצת השטופה 30x פתרון ERM.
  7. הסר את האשכולות מהפתרון לאחר 1 דקות ומניחים אשכולות הביצה בין מגבות נייר היבשות אנד רול בעדינות.
  8. מכניסים את הביצים בחזרה ERM 30x.
  9. בחר ביצים מופרות תחת מיקרוסקופ לנתח.
  10. מקום שנבחר 810 ביצי ERM 1x בשש-גם צלחות פלסטיק באמצעות מלקחיים.
  11. לדגור על הביצים של 25 ± 0.1 ° C באינקובטור עד לשלב ההתפתחותי 21. (שלבי ההתפתחות של עוברי medaka הוגדרו מהעבודה של Iwamatsu 10.)
  12. בחרו ביצים וטופחו על השלב ההתפתחותי 21 תחת מיקרוסקופ לנתח.
  13. לשטוף ביצים שנבחרו עם ERM 1x.
  14. נושא את הביצים שטופות לניסויי חשיפה (סעיף 4).

4. בדיקת רעילות של SNCs או אגנו 3 ב למליחות ERM השונה

  1. לשטוף ביצים Medaka (שלב 21) שלוש פעמים עם פתרון המבחן [SNCs (10 מ"ג / ל -1) או אגנו 3 (15.7 מ"ג / ל -1 ל -10 מ"ג / ל -1 כסף) בכל ריכוז של ERM (1x, 5x , 10x, 15x, 20x, 30x או) ב- pH 7]. כפי שולט, להשתמש ביצי 1 × 30 × ERM ב- pH 7.
  2. הוסף 15 ביצים שטפו עד 5 מיליליטר של כל פתרון מבחן בצלחות פלסטיק שש היטב. (בצע את ניסויי החשיפה שלוש פעמים במשך SNC או אגנו רעיל 3 בדיקות באמצעות כל פתרון מבחן.)
  3. לעטוף את הצלחות בנייר אלומיניום.
  4. דגירת הצלחות העטופות ב 25 ° C בחושך עד בקיעה או במשך 14 ימים.
  5. שים את הביצים החשופות כל 24 שעות עבור שינויים ביולוגיים וביצים מתות (איורים 1 ו -2).
  6. להחליף את פתרונות בדיקה כל 24 שעות.
  7. בצעו תצפיות כדלקמן.
    1. ביום 6 של חשיפה, לספור את קצב הלב (מחיר 15 שניות) oעוברים Medaka f תחת מיקרוסקופ לנתח באמצעות סטופר (איור 3 א).
    2. ביום 6 של חשיפה, למדוד את גודל העין (קוטר) של עוברים medaka תחת מיקרוסקופ לנתח באמצעות מיקרומטר (איור 3B).
    3. ביום הבקיעה, למדוד את אורכי גוף מלא של הזחלים תחת מיקרוסקופ לנתח באמצעות מיקרומטר (איור 3c).
    4. לספור את המספר הכולל של ביצים חשופות שבוקעות במשך 14 הימים (איור 3D).

בידוד 5. של כסף מסיס מפתרון SNC, וניתוח כסף

  1. לבודד כסף מסיס מכל פתרון SNC (תערובת של קולואידים כסף וכסף מסיס) על ידי סינון דרך פילטר קרום 3 kDa ב 14,000 x ז ו -4 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות. שימוש במסנן קרום 3 kDa לבודד כסף מסיס מן SNCs, משום בקוטר הממוצע המדווחים של SNCs מצטבר ב ERM 1x הוא 67.8 ננומטר 11 אnd כי של Ag + הוא 0.162 ננומטר 12; קרום 3 kDa כולל חלקיקים בקוטר של 2 ננומטר או יותר 13.
  2. למדוד את ריכוז הכסף ב 50 μl של פתרון מסונן (= ריכוז הכסף המסיס) על ידי (3E איור) ניתוח ICP-MS בהתאם למדריך 8 פועלי ICP-MS. השיטה המקדימה עבור ICP-MS הניתוחי מתוארת בסעיף 7.

6. מדידת כסף פגיעה מתמשכת ב Medaka עוברים

  1. לחשוף ביצים Medaka (שלב 21) כדי SNCs או אגנו 3 כמפורט בסעיף 4.
  2. ביום 6 של חשיפה, להסיר סיסי מן הביצה (כלומר, dechorion) באמצעות medaka בקיעת אנזים לפי הפרוטוקול המתואר בספר Medaka 14.
  3. למדוד את ריכוז הכסף של ביצי dechorioned ניתוח ICP-MS פי (3F איור) ידני 8 פועלי ICP-MS. המקדיםשיטת ICP-MS הניתוחי מתוארת בסעיף 7.

מדידה 7. הריכוזיות כסף על ידי ICP-MS Analysis

  1. להוסיף דוגמאות [50 μl של פתרון כסף (עבור אימות של ריכוז כסף; סעיף 1); שלושה עוברי dechorionated (סעיף 5); או 50 μl של פתרון מסוננים (סעיף 5)] כדי מבחנה טפלון 50 מ"ל.
  2. להוסיף 2.0 מ"ל של חומצה חנקתית ultrapure אל מבחנה 50 מ"ל.
  3. מחממים את התערובת על פלטה חשמלית ב 110 מעלות צלזיוס עד ממש לפני שהוא מתייבש (כ -3 שעות).
  4. כדי לפזר את החומר האורגני לחלוטין, להוסיף 2.0 מ"ל של חומצה חנקתית ultrapure ו -0.5 מ"ל של מי חמצן אל מבחנה.
  5. מחממים את התערובת שוב על צלחת חמה אלא רגע לפני מתייבש (כ -3 שעות).
  6. ממיסים את שאריות 4 מ"ל של תמיסת חומצה חנקתית ultrapure 1.0%.
  7. העברה 4 מיליליטר של תמיסה לצינור צנטריפוגות.
  8. חזור על 7.6 כדי 7.7 פעמים (בסך הכל שלוש פעמים). ההיקף הסופי הוא 12.0מ"ל.
  9. למדוד את ריכוז כסף של המדגם (מומס חומצה חנקתית ultrapure 1.0%) באמצעות ניתוח ICP-MS בהתאם למדריך ההפעלה 8.
    1. השתמש פנימי פתרון סטנדרטי חיצוני (ראה רשימת חומרים) לכמת את ריכוז הכסף. הפתרון תקן פנימי וחיצוני הוא מוכר על ידי האגודה האמריקאית הלאומית להסמכת מעבדות (A2LA). גבולות איתור של כסף היו מ"ל 0.0018 ng / -1 (פתרון) ו 0.016 ng מ"ג משקל -1 (גוף העובר).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השפעת המליחות על רעילות SNC היה מאוד ברור: אינדוקציה של מום או מוות היה מליחות תלויים (איורים 1 ו -2). מדדנו סמנים פנוטיפי (קצב לב, גודל עין, אורך גוף מלא, וקצב בקיעה) ב SNC (10 מ"ג / ל -1) עובר -exposed. הסמנים פנוטיפי הללו גילו רעילות SNC תלויות מליחות.

קצב הלב נע בין 29.6 ל 32.2 פעימות / 15 שניות ברחב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Medaka הוא דג מים מתוקים, שהינו סובלני מי ים; זה לא ידוע היטב כי הגידול הטבעי המקורי של הדג הזה היה מים מלוחים מול חופי היפני 6. לפיכך, דגי medaka יש מפותח תאי כלוריד 7. מאפיין ייחודי זה מספק למדענים דרך חדשה לבדוק את רעילות של כימיקלים בסביבה כפונקציה של מליחות (מים מתוקים מי ים) באמצעות מין יחיד רק של דגים.

כדי להשיג ביצי Medaka בשלב 21, ביצים חייבות להיות שנקטפו כל בוקר שנבחרו בשלב 20. בד...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו אסירי תודה לגב' קאורי שימיזו ולמר מסאקי טקאסו מבית הספר לתארים מתקדמים למדעי החיים, אוניברסיטת טויו, על תמיכתם הטכנית. פרויקט זה נתמך על ידי מענקי מחקר מקרן המחקר המיוחדת ומרכז המחקר לאלקטרוניקה ביו-ננו של אוניברסיטת טויו (ל-SK); על ידי הקרן לקידום מחקר מדעי של התאגיד לקידום ועזרה הדדית לבתי ספר פרטיים ביפן (ל-SK); על ידי קרן הפרויקטים החדשה להערכות סיכונים, ממשרד הכלכלה, המסחר והתעשייה (ל-SK); על ידי מענק סיוע למחקר גישוש מאתגר (פרס 23651028 ל-SK); על ידי מענק סיוע למחקר מדעי (B) ו-(C) (הענקת 23310026 ו-26340030 ל-SK); ועל ידי מענק סיוע לפרויקט בסיס מחקר אסטרטגי לאוניברסיטאות פרטיות (פרס S1411016 ל-SK) ממשרד החינוך, התרבות, הספורט, המדע והטכנולוגיה של יפן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ננו-קולואידים כסףאוטופיה תוספי
NaClNacalai Tesque, Inc.31319-45לייצור ERM
KClNacalai Tesque, Inc.28513-85לייצור ERM
CaCl2· 2H2ONacalai Tesque, Inc.06730-15להכנת ERM
MgSO4· 7H2ONacalai Tesque, Inc.21002-85לייצור ERM
NaHCO3 נקלאי טסקה, בע"מ31212-25לייצור ERM
AgNO3Nacalai Tesque, Inc.31018-72
מד pHHORIBA, בע"מF-51S
באלאנסמטלר-טולדו אינטרנשיונל בע"מMS204S
medaka (Oryzias latipes) זן כתום-אדוםהמכון הלאומי ללימודי
medaka מערכת תרבית זרימהMeito Suien Co.MEITOsystem
Artemia salina nauplii ביציםיפן חיות מחמד עיצוב ושות' בע"מ4975677033759
משאבת אוורוריפן חיות מחמד עיצוב ושות' בע"מללא רעש w300
Otohime זחל & beta;-1Marubeni Nissin הזנה ושות' בע"מOtohime זחל β-1מלאכותי דגים יבשים דיאטה
ניתוח מיקרוסקופLeica microsystemsM165FC
מיקרומטרפוג'יקוגאקו בע"מ
חממת10450023 NksystemTG-180-5LB
שייקרELMI בע"מAizkraukles 21-136
צלחות פלסטיק 6 בארותגריינר CELLSTARM8562-100EA
רדיד אלומיניוםAS ONE Co.6-713-02
שעון עצרDRETEC בע"מSW-111YE
3 kDa ממברנה מסנןEMD Millipore Corporation0.5 מ"ל מסנן
50 מ"ל טפלוןAS ONE Co.
תקן קלריטות מותאם אישיתSPEXertificateZSTC-538לתקן
פנימי תקן קלריטות מותאם אישיתתקן SPEXertificateZSTC-622לתקן חיצוני
חומצה חנקתית טהורהבמיוחד Kanto Chemical Co.28163-5B
מי חמצן קאנטו כימיקלים ושות'18084-1Bלספקטרומטריית ספיגה אטומית
ICP-MSThermo ScientificThermo Scientific X סדרה 2 
פלטה חמהטייגר ושות'CRC-A300
כסףסביבהצנטריפוגלי33431097

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2 Effects on Biotic Systems. , OECD. Available from: http://www.oecd-ilibrary.org/environment/oecd-guidelines-for-the-testing-of-chemicals-section-2-effects-on-biotic-systems_20745761 (2015).
  2. National Coastal Condition Report. , Environmental Protection Agency, Office of Water and Office of Research and Development. Washington, DC. (2001).
  3. Sakaizumi, M. Effect of inorganic salts on mercury-compound toxicity to the embryos of the Medaka, Oryzias latipes. J. Fac. Sci. Univ. Tokyo. 14 (4), 369-384 (1980).
  4. Sumitani, K., Kashiwada, S., Osaki, K., Yamada, M., Mohri, S., Yasumasu, S., et al. Medaka (Oryzias latipes) Embryo toxicity of treated leachate from waste-landfill sites. J. Jpn. Soc. Waste Manage. Exp. 15 (6), 472-479 (2004).
  5. Kashiwada, S. Distribution of Nanoparticles in the See-through Medaka (Oryzias latipes). EHP. 114 (11), 1697-1702 (2006).
  6. Iwamatsu, T. The Integrated Book for the Biology of the Medaka. , University Education Press. Japan. (2006).
  7. Miyamoto, T., Machida, T., Kawashima, S. Influence of environmental salinity on the development of chloride cells of freshwater and brackish-water medaka, Oryzias latipes. Zoo. Sci. 3 (5), 859-865 (1986).
  8. XSERIES 2 ICP-MS Getting Started Guide Revision B - 121 9590. , Thermo Fisher Scientific Inc.. Available from: http://202.127.146.37/eWebEditor/uploadfile/20130314161434190.pdf (2007).
  9. Kashiwada, S., Ariza, M. E., Kawaguchi, T., Nakagame, Y., Jayasinghe, B. S., Gartner, K., et al. Silver nanocolloids disrupt medaka embryogenesis through vital gene expressions. ES & T. 46 (11), 6278-6287 (2012).
  10. Iwamatsu, T. Stages of normal development in the medaka Oryzias latipes. Mech. Dev. 121, 605-618 (2004).
  11. Kataoka, C., Ariyoshi, T., Kawaguchi, H., Nagasaka, S., Kashiwada, S. Salinity increases the toxicity of silver nanocolloids to Japanese medaka embryos. Environ. Sci.: Nano. 2, 94-103 (2014).
  12. Shannon, R. D. Revised effective ionic radii and systematic studies of interatomic distances in halides and chalcogenides. Acta Cryst. 32, 751-767 (1976).
  13. Pore size chart. , Spectrum Laboratories, Inc.. Available from: http://jp.spectrumlabs.com/dialysis/PoreSize.html (2015).
  14. Wakamatsu, Y. Medaka Book, 6.1: Preparation of hatching enzyme. , National BioResource Project (NBRP) Medaka. Available from: [cited 2015] https://shigen.nig.ac.jp/medaka/medakabook/index.php?6.1%20preparation%20of%20hatching%20enzyme (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

ICP MS

מאמרים קשורים