פרוטוקול זה מתאר שיטת הכנה פשוטה עבור ננו-חלקיקים מזהב משולב ליפוזומים צילום מגיבים עם חומרים זמינים מסחרית. הוא גם מראה כיצד למדוד את תהליך cavitation microbubble של ליפוזומים מסונתז על טיפול של לייזר פעמו.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
סינתזה של משולב זהב Nanoparticle תמונה המגיבים ליפוזומים ומדידה של microbubble Cavitation שלהם על עירור לייזר דופק
במאמר זה
סיכום
תקציר
ננו-חלקיקים מגיבים לאור (NPs) זכו לתשומת לב ניכרת בגלל הפוטנציאל שלהם לספק שליטה מרחבית, זמנית ומינון על שחרור התרופה. עם זאת, רוב הטכנולוגיות הרלוונטיות עדיין בתהליך פיתוח ואינן ניתנות לרכישה על ידי מרפאות. כאן, אנו מתארים ייצור קל של NPs מגיבים לאור אלה עם NPs זהב זמינים מסחרית וליפוזומים מגיבים לחום. קלצין משמש כתרופת מודל להערכת יעילות האנקפסולציה והפרופיל הקינטי של השחרור בעת גירוי חום/אור. לבסוף, אנו מראים כי שחרור זה המופעל על ידי פוטו נובע מהפרעה בממברנה הנגרמת על ידי קוויטציה של מיקרו-בועות, שניתן למדוד באמצעות הידרופון.
מבוא
האפשרות להפעיל שחרור התרופה באמצעות גירויים חיצוניים היא דרך אטרקטיבית אפשר לשלוח את התרופות באופנת spatial-, temporal- והמינון שבשליטת עם ייחוד מוגדל ותופעות לוואי מינימליות. בין מגוון רחב של מערכות גירויים תגובה אקסוגניים (אור, השדה המגנטי, אולטרסאונד, קרינת מיקרוגל), פלטפורמות אור מופעלות הם אטרקטיביים, בשל אי-הפולשנות, פשטות והתאמה שלהם במרפאות. 1 מחקר מקיף בעשור האחרון ספק מגוון של טכנולוגיות פלטפורמה, כגון זהב אחראי קרוב אינפרא אדום-אור (Au) nanocages מצופה פולימרים חכמים, 2 חלקיקי צילום יציב, פולימריים (NPS) מצומדות עם סמים, 3 ו nanovesicles porphysome העצמית התאסף. 4 עם זאת , ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנה
- 100 מ"ל נקי עגול צלוחיות התחתונה באמצעות Regia אקווה (1 חלק חומצה חנקתית מרוכזת (HNO 3) ו -3 חלקים של חומצה הידרוכלורית מרוכזת (HCl)) ולשטוף את צלוחיות עם מים די. חיטוי הצלוחיות ולייבש אותם בתנור אוויר חם ב 100 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. לעטוף ולאחסן את צלוחיות סטרילי עד השימוש.
- לעקר את סט מיני מכבש יד שנערך באמצעות אתנול 70%.
- הפעל את מאייד רוטרי להגדיר את הטמפרטורה של המים באמבטיה החמים מגדל קירור על 37 מעלות צלזיוס ו 4 ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
ליפוזומים אלה נערכו על בסיס טכניקה הידרציה סרט דק קונבנציונלי עם DPPC, MPPC ו DSPE-PEG2000 ב טוחנת יחס של 86: 10: 4 או 7.95: 0.65:. 1.39 מ"ג / מ"ל 12 הגודל של Au צירופים היא קריטית כדי לקבוע את האור מרה יעילה לחום במהלך ניסוי עירור הליזר הבא. הקטן בגודל של Au NPS, הגבוהה הוא יעילות transducing. 13 לפיכך 5 ננומטר Au צירופים, דגימות הקטנות מהספק, נבחרו אנקפסולציה. במהלך הסינתזה, בינוני לחות המכיל Au NPS ו calcein התווס.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הידרציה סרט דקה היא השיטה מקובלת להכנה ליפוזומים. ממסים אורגניים (כלורופורם במקרה זה) שמשו ראשון לפרק את השומנים ולאחר מכן מוסר מאייד רוטרי ב 37 ° C כדי ליצור סרט דק שומנים על הבקבוק. הסרט השומנים זו hydrated עם בתמיסה מימית המכילה 60 מ"מ calcein ו -5 ננומטר Au צירופים. במהלך תהליך הידרציה, הטמפרטורה נשמרה סביב 50 מעלות צלזיוס, הבקבוק היה נסער כל הזמן על ידי החלפה של הבקבוק. המפתח בשלב זה הוא הבחירה של הטמפרטורה שבה אידוי הידרציה בוצעו בהתאמה. הטמפרטורה המעבר לשלב (מ
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגוד עניינים מוכרזים.
תודות
עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי קרנות מחקר אקדמי Tier-1 על ידי סינגפור משרד החינוך (RG 64/12 ל CX) ו NTU-נורת 'ווסטרן המכון הננורפואה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DPPC) | Avanti Polar Lipids (אלבמה, ארה"ב) | 850355P | אבקה, יש לאחסן ב-20 מעלות; C |
| 1-palmitoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine (MPPC) | Avanti Polar Lipids (אלבמה, ארה"ב) | 855675P | אבקה, יש לאחסן ב-20 מעלות; C |
| 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanol-amine-N-[methoxy(פוליאתילן גליקול)-2000] (מלח אמוניום) (DSPE-PEG2000) | אבקת Avanti Polar Lipids (אלבמה, ארה"ב) | 880120P | , יש לאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות; C |
| ננו-חלקיקי זהב | סיגמא אולדריץ' | 752568-100 מ"ל | 5 חלקיקי ננומטר, מיוצבים ב-0.1 מ"מ PBS |
| סיגמא | אולדריץ' | C0875-10 גרם | 60 mM, pH 7.4 (מותאם באמצעות NaOH) |
| מי מלח חוצץ פוספט (PBS) | Sigma Aldrich | P5493 | 0.1 מ"מ, pH 7.4 |
| מים מזוקקים כפולים | Millipore Milli-DI מערכת | ||
| Triton X100 | סיגמא, מדעי החיים | X-100 | כדי לשבש את הליפוזומים לחישוב האנקפסולציה הכוללת |
| Rotavapor | בוצ'י (שוויץ) | R 210 | משמש להכנת ליפוזוזמה |
| אמבט חימום | בוצ'י (שוויץ) | B 491 | משמש להכנת ליפוזוזמה |
| בקר ואקום | בוצ'י (שוויץ) | V-850 | משמש להכנת ליפוסוזמה |
| משאבת ואקום | בוצ'י (שוויץ) | V-700 | משמש להכנת ליפוזוזמה |
| אמבט מחזור עם בקר טמפרטורה | Polyscience | משמש להכנת ליפוזוזמה | |
| מכלול מיני מכבש עם בלוק חימום | Avanti Polar Lipids (אלבמה, ארה"ב) | 610000 | משמש לשחול של מזרקי ליפוזומים |
| , 1,000 & #956; l | ליפידים קוטביים אוונטי (אלבמה, ארה"ב)610017 | משמש לשחול של ליפוזומים | |
| קרום מסנן פוליקרבונט, 200 nm | Whatmann | 800281 | משמש לשחול של ליפוזומים |
| תמיכה במסנן | שומנים קוטביים אוונטי (אלבמה, ארה"ב) | 610014 | משמש לשחול של ליפוזומים |
| PD 10 קולומנים מתפלים, Sephadex G-25 בינוני | GE Healthcare, מדעי החיים | 17-0851-01 | משמש לטיהור הליפוזומים |
| צנטריפוגה | צנטריפוגות מעבדה סיגמא | 3K30 | משמשות לריכוז התמיסה הליפוזומלית |
| רוטור | סיגמא | 19777-H | משמש לריכוז התמיסה הליפוזומלית |
| Zetasizer | Nano ZS Malvern | משמש לקביעת גודל הליפוזום | |
| וספקטרופוטומטר גלוי UV | Shimadzu | UV-2450 | משמש למדידת ספיגת הדגימות |
| ספקטרופלואורומטר פלואורסצנטי | מכשירים מולקולריים | SpectraMax M5 | משמש למדידת פליטת הקרינה של הדגימות |
| Nd:YAG לייזר | NewWave Research | 532 ננומטר; הספק מרבי: 17 מ.ג'י; רוחב: 406 nsec; משמש להקרנה מדגמית | |
| HNR הידרופון ONDA | HNR-1000 | קוטר 1 מ"מ ורגישות 450 nV/Pa, טווח תדרי עבודה תקין: 0.25-10 מגה-הרץ; כיול: 50 mV/בר; משמש למדידת האותות האקוסטיים | |
| אוסצילוסקופ דיגיטלי | LECORY - Wave Runner 64Xi-A | תדר: 600 מגה-הרץ; קצב דגימה מקסימלי: 10 Gs/sec (בשני ערוצים); משמש להקלטת האותות האקוסטיים הנמדדים |
מקורות
- McCoy, C. P., et al. Triggered drug delivery from biomaterials. Expert Opin. Drug Deliv. 7 (5), 605-616 (2010).
- Yavuz, M. S., et al. Gold nanocages covered by smart polymers for controlled release with near-infrared light. Nat. Mater. 8
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
