מאמר שיטה

פיתוח של מודל עכברוש מבוסס אלפא-synuclein עבור מחלת פרקינסון באמצעות הזרקת stereotactic של וקטור ויראלי הקשורים מוקטורים

DOI:

10.3791/53670

⸱

28 בפברואר 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Neurobiology and Gene Therapy, Department of Neurosciences, KU Leuven, 2Division of Nuclear Medicine, Leuven University Hospital - KU Leuven, 3Laboratory for Molecular Virology and Gene Therapy, Department of Pharmaceutical and Pharmacological Sciences, KU Leuven, 4Leuven Viral Vector Core, KU Leuven

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כתב יד זה מתאר כיצד העברת גנים מקומיים בתיווך וקטור ויראלי מספקת דרך אטרקטיבית לבטא טרנסגנים במערכת העצבים המרכזית. הפרוטוקול מתאר את כל השלבים החיוניים לביצוע הזרקת וקטור ויראלי בחומר השחור של החולדה כדי לפתח מודל בעלי חיים מבוסס וקטור ויראלי למחלת פרקינסון.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

על מנת ללמוד את המסלולים המולקולריים של מחלת פרקינסון (PD) ולפתח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות, חוקרים מדעיים להסתמך על מודלים של בעלי חיים. זיהוי של גנים הקשורים PD הוביל פיתוח מודלים PD גנטי. רוב הדגמים עכבר מהונדס α-SYN לפתח פתולוגיה הדרגתית α-SYN אך אינם מצליחים להציג הפסד התא דופאמין ברור וגירעונות התנהגותי תלויים דופמין. המשוכה הזאת נתקפה טיווח ישיר של nigra substantia עם וקטורים ויראליים overexpressing גנים הקשורים PD. למסירת גן מקומית באמצעות וקטורים ויראליים מספקת דרך אטרקטיבית להביע transgenes במערכת העצבים המרכזית. איזורים מסוימים במוח יכולים להיות ממוקדים (למשל nigra substantia), ביטוי יכול להיגרם בסביבה המבוגרת ורמות ביטוי גבוהות יכולות להיות מושגת. יתר על כן, מערכות וקטור שונות המבוססות על וירוסים שונים ניתן להשתמש. הפרוטוקול מתאר את כל שלבים המכריעים לבצע וקטור ויראליזריקת nigra substantia של החולדה לפתח מודל חית אלפא-synuclein מבוסס וקטור ויראלי לטיפול במחלת הפרקינסון.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לחקור את פתופיזיולוגיה של PD ולפתח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות, יש צורך דחוף במודלים של בעלי החיים כי דומה בנוירופתולוגיה, סימפטומי פיזיולוגית מנוע של PD אדם. את הערך המנבא הגבוה יותר, כך ניטיב יכול לתרגם טיפולים חדשים מ במודלים של בעלי חיים לחולים.

הגילוי-synuclein אלפא (α-SYN) כמו גן PARK לראשונה ב -1997 הוביל לפיתוח של מודלי PD הגנטיים הראשונים. עכברים מהונדסים רבים overexpressing wild-type אדם (WT) או מוטציה (A30P, A53T) α-SYN נוצרו בעשור האחרון. רמות ביטוי יתר α-SYN הוכיחו להיות מכריע בהתפתחות של הפתולוגיה. גם זן העכבר, קיומו או אי קיומו של אנדוגני α-SYN והאם באורך מלא או בגרסה מקוצרת מתבטא, ממלא תפקיד (סקירה מפורטת על ידי מגן Chesselet 1). התבטאות יתר של שניהם WT וכמה מוטציות קליניות של אדם &# 945; -SYN בעכברים טרנסגניים גורם הצטברות פתולוגית של α-SYN וחוסר תפקוד עצבי 2-6. עם זאת, עד במודלים של עכברים α-SYN עכשיו המהונדסים ביותר לא הצליחו להציג פסד תא דופאמין ברור וגירעונות התנהגותי תלוי דופמין.

המשוכה הזאת נתקפה טיווח ישיר של nigra substantia (SN) עם וקטורים ויראליים overexpressing α-SYN. וקטורים ויראליים נגזרים וירוסים שיכולים להדביק תאים בקלות, מציגים את החומר גנטי לתוך הגנום המארח שלהם ולהכריח את התא המארח לשכפל את הגנום הנגיפי על מנת לייצר חלקיקי נגיף חדשים. וירוסים יכולים להיות מהונדסים שאינם משכפלים וקטורים ויראליים כי לשמור על יכולתם לחדור לתאים ולהציג גנים. על ידי מחיקת חלקים של הגנום הויראלי והחליף על ידי הגנים של עניין, יישום של הווקטור יגרום זיהום סיבוב בודד ללא שכפול בתוך התא המארח, המיועד בדרך כלל כמו 'תמרה'. ג וקטורים ויראלייםלשמש ביטוי יתר שניהם להשתקת גנים. את הגן הביע יכול להיות חלבון כתב (חלבון פלואורסצנטי ירוק למשל או בלוציפראז גחלילית) 7, חלבון טיפולי עבור יישומי ריפוי גנטי 8-10 או, כפי נתמקד במאמר זה, חלבון הקשור למחלות המשמש מודלי מחלה 11 -14.

למסירה גן וקטור בתיווך ויראלי מספק דרך חלופית להביע transgenes של מערכת העצבים המרכזית עם מספר יתרונות. באמצעות משלוח transgene מקומי, איזורים מסוימים במוח יכולים להיות ממוקדים. יתר על כן, ביטוי transgene יכול להיגרם במהלך הבגרות בהפחתת הסיכון מנגנוני פיצוי במהלך הפיתוח. כמו כן, ניתן ליצור מודלי מיני זנים שונים. ולבסוף, transgenes השונה ניתן לשלב בקלות. באמצעות וקטורים ויראליים, רמות ביטוי transgene גבוהה יכולה להיות מושגת, אשר עשוי להיות חיוני מאז תחילת וחומרת המחלה תלויה לעתים קרובות על רמת overexpression.

מערכות וקטור כמה מבוססות על וירוסים שונים פותחו. הבחירה של מערכת הווקטור תלוי בגודל של הגן של עניין, את משך הזמן הנדרש של ביטוי גנים, תא המטרה ובעיות בטיחות ביולוגית. עבור העברת גנים יציבה במוח, lentiviral (LV) ו ויראלי adeno הקשורים רקומביננטי (rAAV) וקטורים נחשבים כיום מערכות וקטור בחירה שכן הם להוביל ביטוי גנים יעיל לטווח ארוך במוח המכרסם. עבור מיקוד ספציפי של נוירונים דופאמינרגיים (DN) של SN, וקטורי rAAV יש outcompeted וקטורי LV בהדרגה בגלל טיטר ויעילות התמרה הגבוהה שלהם של DN.

המודלים המכרסמים הכי הטובים מבוסס α-SYN הזמינים כרגע פותחו מתוך גישה משולבת באמצעות קפסיד AAV החדש (1 rAAV, 5, 6, 7, 8) ו אופטימיזציה בונה וקטור, טיטר, וטוהר 15,16. כייל וקטור וכן טוהר וקטור משפיע ישירותהתוצאה פנוטיפי של המודל. titers וקטור מוגזמת או קבוצות וקטור מטוהרים מספיק עלול לגרום לרעילות הלא ספציפית. לכן, וקטורי בקרה נאותים הכרחיים. השקעת זמן ניכרת בייצור, upscaling וקטור ויראלי, ואת הליכי הטיהור גם הוכיחה חיונית להשיג יצוות וקטור איכות לשחזור גבוה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הניסויים בבעלי החיים מבוצעים בהתאם להוראת מועצת הקהילות האירופיות מיום 24 בנובמבר 1986 (86/609 / EEC) ואושרו על ידי הוועדה ביו-האתית של אונ' הלובן (בלגיה).

1. רקומביננטי AAV הפקה וטיהור

הערה: הייצור וטיהור וקטור rAAV בוצע על ידי Core וקטור ויראלי לובן (LVVC) כפי שתואר לעיל 17.

  1. בקצרה, transfect subconfluent נמוך (<50) מעבר חסיד תאים HEK 293T באמצעות polyethylenimine ליניארי 25kD 150 פתרון transfection ננומטר NaCl ושלושה פלסמידים שונים על יחס של 1: 1: 1 ב DMEM בינוני 2% בסרום שור העובר. לאחר 24 שעות של דגירה על 37 מעלות צלזיוס 5% CO 2, להחליף את המדיום עם סרום שור עובר 2% DMEM בינוני טרי.
    הערה: פלסמידים כוללים בונה עבור סרוטיפ AAV7, הפלסמיד העברת AAV קידוד מוטצית A53T האדם α-SYN בשליטה של ​​CMVie משופר synapsהאמרגן in1 ואת הפלסמיד עוזר adenoviral pAdvDeltaF6 17.
  2. קציר 5 ימים בינוני לאחר transfection חולף ולהתרכז באמצעות סינון תזרים משיק 17.
  3. לטהר את חלקיקי וקטור rAAV מהמדיום המרוכז באמצעות שיפוע צעד iodixanol 17.
  4. להשתמש בטכניקות מקובלות של PCR בזמן אמת עבור עותק גנומי (GC) ונחישות. בפרוטוקול זה, כייל וקטור של 3.0 GC E11 / מ"ל שימש לפיתוח מודל עכברוש מבוסס α-SYN עבור 17 PD.

2. הזרקת stereotactic של α-SYN rAAV וקטור ב SN של עכברוש (איור 2)

  1. חולדות Wistar נקבה בת שמונה שבועות בית במשקל של כ 200-250 גרם תחת מחזור אור רגיל 12 hr / כהה עם גישה חופשית למזון pelleted ו מי ברז.
  2. שלח את החולדה הזרקה (IP) הרדמה המכיל תערובת של קטמין (60 מ"ג / ק"ג) ו medetomidine (0.4 מ"ג / ק"ג). לאחר העכברוש הוא מורדם אינו מגיבכאשר לסחוט את הכפות שונים, לנהל מתחת לעור מיקרו-משדר על גב של עכברוש להכרה נוספת באמצעות implanter מיקרו-טרנספונדר. בדוק אם טרנספונדר מייקרו ממוקם כראוי וניתן לקרוא על ידי מכשיר הקריאה.
  3. חותכים את השיער על גבי הקרקפת. החל בהרדמה מקומית משני הקרקפת והאוזניים. בצע את שאר הליך כירורגי תחת זרימה למינרית תוך שימוש בטכניקות aseptic.
  4. מניח את החולדות בתוך מסגרת ראש stereotactic באמצעות שני ברי אוזניים, פה ובר אף. מכסים את הגוף של החולדה בשמיכה נייר כדי למנוע ירידה בחום הגוף. החל סיכה עינית כדי למנוע את העיניים מפני התייבשות.
  5. לחטא את הקרקפת עם 1% jodium ב isopropanol 70% ולעשות חתך קטן קו האמצע של הקרקפת. בעדינות לגרד ממנו את הקרומים על הגולגולת ולשטוף עם מי מלח. תן יבש הגולגולת במשך כמה דקות. שים את התפרים הגולגולת ואת שתי נקודות התייחסות: גבחת ו למבדה.
  6. כדי להזריק את וקטור rAAV לתוך SN, להגדיר את הקואורדינטות כלפי גבחת (anteroposterior: 5.3 מ"מ; mediolateral: 2.0 מ"מ ו dorsoventral: 7.2 מ"מ שנמדדות דורה).
    הערה: שלוש הקואורדינטות הממדיות עבור כל אזור של אינטרס יכולות להיות מחושבות באמצעות אטלס stereotaxic של מוח העכברוש, החלת גבחת כנקודת התייחסות אנטומיים.
  7. ממלאים מזרק microinjection 10 μl (30 מד 20 מ"מ) עם וקטור rAAV ולמקם אותו המכשיר stereotaxic מחובר עם משאבה microinjection ממונע. לשלוט בעוצמת הקול על ידי שחרור טיפת וקטור ולחסל בתוך pH חומר ניקוי ניקוי רב ערכי 9 (למשל RBS).
  8. ראייה לבדוק אם הראש מקובע ישר בפריים הראש ולהעריך את ציר ימין-שמאל. בזהירות חזותית להגדיר את הקואורדינטות anteroposterior ו mediolateral עבור גבחת ו למבדה ו למדוד את גובהם באמצעות מחט מ"מ 30 מד 20 בזרוע dorsoventral של מסגרת stereotactic.
    1. אפשר לפנות בוקרaximum הבדל 0.3 מ"מ גובה בין גבחת ו למבדה. מניחים את המחט חזרה על גבחת ולהחיל את anteroposterior קואורדינטות mediolateral ידי הזזת anteroposterior והזרוע mediolateral של מסגרת stereotactic.
  9. במקום ההזרקה, למדוד את גובהם של הגולגולת ולהבטיח שזה לא שונה יותר מ -0.3 מ"מ מגובה של גבחת. לקדוח חור בגולגולת בקוטר של כ -2 מ"מ. מדדו את הגובה של דורה, זה ישמש כנקודת התייחסות ליישם את dorsoventral לתאם. לחלופין לחסר בעובי קבוע עבור הגולגולת (0.9 מ"מ).
  10. לחדור הדורה באמצעות מחט מד 26 ו לספוג את הדם עם רקמה סטרילית. חכו עד שכל דימום הפסיק לפני שתמשיך.
  11. לאט להכניס את המזרק microinjection 10 μl טעון מראש עם פתרון וקטור לתוך המוח לעומק שנקבע מראש (dorsoventral לתאם). מתן 1 דקות עם המחט במקום. להזריק 3 μlשל פתרון וקטור (מיליליטר / עותקים בגנום 3.0 E11 (מנת וקטור בינונית) או 1.0 מיליליטר E12 GC / (מנת וקטור גבוהה) של וקטור מלא מרמת rAAV2 / 7 α-SYN או eGFP) באמצעות משאבת microinjection הממונעת עם תפוקה של 0.25 μl / דקות.
  12. לאחר הזרקה, לשמור את המחט במקום במשך 5 דקות אחרות לפני הסרתו לאט. לתפור את הקרקפת בעזרת קלוע פוליאסטר מצופה 3.0, לחטא עם 1% jodium ב 70% isopropanol בעדינות להסיר את החיה מן מכשיר stereotactic. ראשית לשחרר את הבר האף והפה, ואחר כך את שני ברים אוזניים.
  13. להיפוך הרדמה, להזריק עכברוש intraperitoneally עם 0.5 מ"ג / ק"ג atipamezole ומניחים החולדה בכלוב נקי על צלחת חימום של 38 מעלות צלזיוס עד שהוא מתעורר. מכסים את החולדה בשמיכה נייר כדי למנוע ירידה בחום הגוף.
  14. לספק גישה קלה מזון ומי השעות הראשונות. צג החולדה עבור הימים הראשונים. במידת הצורך ליישם שיכוך כאבים.
    הערה: אין צורך להסיר את התפרים מ tהוא גולגולת. לאחר 1-2 שבועות הגולגולת תתוקן לחלוטין ואת stiches תשתחרר.

3. הערכה מרמת rAAV2 / 7 חולדות מוזרקות α-SYN שימוש לא פולשני הדמית PET, בדיקות התנהגותיות וניתוח immunohistochemical

  1. כדי להמשיך את קינטיקה של ניוון עצבי דופאמין nigrostriatal הלא פולשני לאורך זמן בחיות הפרט, לכמת נשא דופמין (DAT) מחייב באמצעות טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים קטן-חיה (PET) נותב של Transporter DA למשל [18 F] -FECT 16 .
  2. המחקר היה לבדוק האם רמת מוחיי דופאמין היא מספיק כדי לגרום לקויות מוטוריות בחולדות, לייחד חולדות במבחן הגליל להעריך שימוש forelimb ספונטני.
    1. מניח את החולדה בתוך 20 סנטימטרי רוחב זכוכית שקוף גליל ווידאוטייפ ההתנהגות במהלך תנועות אנכיות לאורך הקיר והנחיתה לאחר אחורי. ציון מספר אנשי הקשר שנעשה על ידי כל בכפו עבור סכום כולל של 20אנשי קשר. לקבלת תיאור מפורט של קריטריוני הניקוד לראות Schallert et al. 18 לבטא את מספר אנשי קשר forelimb הלקוי (בכפו למשל משמאל) כאחוז קשר forelimb הכולל (משמאל בתוספת התקינה בכפו).
      הערה: חולדות שליטה ללא lesioned באמצעות שני הכפות באותה מידה צריכות להבקיע סביב 50% במבחן הזה.
  3. בצע immunohistochemical (IHC) ניתוח כדי להעריך את רמת הביטוי transgene ואובדן התא דופאמין.
    1. בשלבים קצה שונים, להקריב את החולדות עם ממנת יתר של נתרן pentobarbital (60 מ"ג / ק"ג, IP) ולבצע זלוף intracardial עם מי מלח קר ואחריו paraformaldehyde 4% ב PBS 19. לקבע את המוח לילה ב 4 ° C ופצע 50 מיקרומטר חלקים במוח העטרה עבה באמצעות microtome רוטט.
    2. בצע מכתים IHC על סעיפים "פנויות" באמצעות נוגדנים כנגד α-SYN ו טירוזין hydroxylase לנתח רמות הביטוי α-SYN ואת level מוחיים 16.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התכנית הכוללת של הניסוי מתוארת באיור 1

rAAV 2 / ביטוי יתר בתיווך 7 של A53T α-SYN גורם גירעונות מנוע תלוי דופמין.
מחקר היה לבדוק האם רמת ביטוי יתר α-SYN היא מספיק כדי לגרום לקויות מוטוריות בחולדות, חשפנו חולדות במבחן הגליל להעריך שימוש forelimb ספונטני (איור 3 א). מעל 3 שבועות לאחר ההזרקה, ליקו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ישנם מספר שלבים קריטיים בתוך הפרוטוקול. כייל וקטור וכן טוהר וקטור השפיע באופן ישיר על התוצאה פנוטיפי של המודל. titers וקטור מוגזמת או קבוצות וקטור מטוהרים מספיק עלול לגרום לרעילות הלא ספציפית. לכן, השימוש של אצוות וקטור באיכות גבוהה וקטורי בקרה נאותים הוא הכרחי. יתר על כן, המיקום המדויק של ראשו של החולדה בתוך מסגרת stereotaxic ואת הקביעה המדויקת של הקואורדינטות חיוני מיקוד nigra substantia. לאחר קידוח החור בגולגולת באתר הזרקה, חשוב להכניס את המחט ישר לתוך המוח של העכברים, אך לא נג...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

החוקרים מצהירים כי אין ניגוד עניינים ממשי או פוטנציאלי.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מודים יוריס ון Asselberghs ואן ואן Santvoort לקבלת הסיוע הטכני המעולה שלהם. המחקר מומן על ידי IWT-Vlaanderen (IWT SBO / 80,020), את Vlaanderen FWO (G.0768.10), על ידי תוכנית EC-FP6 "דימי" (LSHB-CT-2005-512,146), את MEFOPA פרויקט FP7 RTD (HEALTH -2,009-241,791), התוכנית FP7 'INMiND' (HEALTH-F2-2011-278850), לובן KU (צה"ל-KP / 07/001, OT / 08 / 052A, Imir PF / 10/017), ואת MJFox קרן (אימות יעד 2010). א ואן דר Perren ו Casteels ג הם עמיתים הבתר של הקרן הפלמי של מחקר מדעי. ק ואן Laere הוא עמית קליני בכיר של הקרן הפלמי של מחקר מדעי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
נקבה בת 8 שבועות עכברושי וויסטארJanvier/200-250 גרם
קטמין (נימטק)Eurovet לבריאות בעלי חיים804132
מדטומידין (דורמיטור)Orion-Pharma/ Janssen Animal Health1070-499
  הרדמה מקומית לקרקפת ולאוזניים: Xylocaï ne 2% ג'לAstrazeneca0137-547
TerramycinePfizer0132-472
Bupré נורפין (וטרינטרי)Ecuphar2623-627
ג'ודיום 1% איזופרופנולVWR0484-0100
מסגרת ראש סטריאוטקטיתסטולינג/
המילטון מזרק (30 מד -20 מ"מ -PST 2)המילטון/ שירות מסנן7803-07
אטיפמזול (אנטיסדאן)אוריון-פארמה/אלנקו1300-185
rAAV A53T & וקטור alpha;-SYNLVVC, KU Leuven/https://gbiomed.kuleuven.be/english/research/50000715/laboratory-of-molecular-virology-and-gene-therapy/lvvc/
נתרן פנטוברביטל (Nembutal)Ceva Santé0059-444
מיקרוטוםMicromHM650
ארנב פוליקלונלי סינוקלאין AbChemicon50381:5,000
ארנב פוליקלונלי TH AbChemicon1521:1,000
לוטטיום אוקסיאורתוסיליקט מבוסס גלאי פוקוס 220 טומוגרפיהסימנס/קונקורד מיקרוסיסטמס/
רדיוליגנד: 18F-FECTבבית/
L-dopa: Prolopa 125Roche6 מ"ג/ק"ג i.p.
DMEM, GlutamaxLife TechnologiesN° 31331-093
סרום בקר עובריLife TechnologiesN° 10270-106
25 kD פוליאתילנימין ליניארי (PEI)Polysciences/
OptiPrep מדיום שיפוע צפיפות מדיום: IodixanolSigmaD1556-250ML
OptimenLife TechnologiesN° 51985-026
Paxinos 1 watston steretactic atlas, מהדורה רביעיתElsevier/

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Magen, I., Chesselet, M. F. Genetic mouse models of Parkinson's disease The state of the art. Prog Brain Res. 183, 53-87 (2010).
  2. Masliah, E., et al. Dopaminergic loss and inclusion body formation in alpha-synuclein mice: implications for neurodegenerative disorders. Science. 287, 1265-1269 (2000).
  3. Freichel, C., et al. Age-dependent cognitive decline and amygdala pathology in alpha-synuclein transgenic mice. Neurobiol Aging. 28, 1421-1435 (2007).
  4. Fleming, S. M., Fernagut, P. O., Chesselet, M. F. Genetic mouse models of parkinsonism: strengths and limitations. NeuroRx. 2, 495-503 (2005).
  5. Kahle, P. J., et al. Selective insolubility of alpha-synuclein in human Lewy body diseases is recapitulated in a transgenic mouse model. Am J Pathol. 159, 2215-2225 (2001).
  6. Chesselet, M. F., Richter, F. Modelling of Parkinson's disease in mice. Lancet Neurol. 10, 1108-1118 (2011).
  7. Deroose, C. M., Reumers, V., Debyser, Z., Baekelandt, V. Seeing genes at work in the living brain with non-invasive molecular imaging. Curr Gene Ther. 9, 212-238 (2009).
  8. Manfredsson, F. P., et al. rAAV-mediated nigral human parkin over-expression partially ameliorates motor deficits via enhanced dopamine neurotransmission in a rat model of Parkinson's disease. Exp Neurol. 207, 289-301 (2007).
  9. Vercammen, L., et al. Parkin protects against neurotoxicity in the 6-hydroxydopamine rat model for Parkinson's disease. Mol Ther. 14, 716-723 (2006).
  10. Winklhofer, K. F. The parkin protein as a therapeutic target in Parkinson's disease. Expert opinion on therapeutic targets. 11, 1543-1552 (2007).
  11. Kirik, D., et al. Parkinson-like neurodegeneration induced by targeted overexpression of alpha-synuclein in the nigrostriatal system. J Neurosci. 22, 2780-2791 (2002).
  12. Kirik, D., et al. Nigrostriatal alpha-synucleinopathy induced by viral vector-mediated overexpression of human alpha-synuclein: a new primate model of Parkinson's disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 2884-2889 (2003).
  13. Lauwers, E., et al. Neuropathology and neurodegeneration in rodent brain induced by lentiviral vector-mediated overexpression of alpha-synuclein. Brain pathology. 13, 364-372 (2003).
  14. Klein, R. L., King, M. A., Hamby, M. E., Meyer, E. M. Dopaminergic cell loss induced by human A30P alpha-synuclein gene transfer to the rat substantia nigra. Hum Gene Ther. 13, 605-612 (2002).
  15. Vander Perren, A., Van den Haute, C., Baekelandt, V. Viral Vector-Based Models of Parkinson's Disease. Curr Top Beh Neurosci. , (2014).
  16. Van der Perren, A., et al. Longitudinal follow-up and characterization of a robust rat model for Parkinson's disease based on overexpression of alpha-synuclein with adeno-associated viral vectors. Neurobiol Aging. , (2014).
  17. Van der Perren, A., et al. Efficient and stable transduction of dopaminergic neurons in rat substantia nigra by rAAV 2/1, 2/2, 2/5, 2/6.2, 2/7, 2/8 and 2/9. Gene Ther. , (2011).
  18. Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury. Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).
  19. Soueid, J., Nokkari, A., Makoukji, J. Techniques and Methods of Animal Brain Surgery: Perfusion, Brain Removal, and Histological Techniques. Brain Neurotrauma: Molecular, Neuropsychological, and Rehabilitation Aspects. Frontiers in Neuroengineering. , (2015).
  20. Dale, G. E., et al. Relationships between Lewy bodies and pale bodies in Parkinson's disease. Acta Neuropathol. 83, 525-529 (1992).
  21. Dawson, V. L. Neurobiology of flies and mice. Science. 288, 631-632 (2000).
  22. Dawson, T., Mandir, A., Lee, M. Animal models of PD: pieces of the same puzzle? Neuron. 35, 219-222 (2002).
  23. LeVine, H. 3rd Quantification of beta-sheet amyloid fibril structures with thioflavin T. Methods Enzymol. 309, 274-284 (1999).
  24. Oliveras-Salva, M., et al. rAAV2/7 vector-mediated overexpression of alpha-synuclein in mouse substantia nigra induces protein aggregation and progressive dose-dependent neurodegeneration. Mol Neurodegener. 8, (2013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

AAVPET

מאמרים קשורים