מטרת מחקר זה היא לזהות רשתות מוח מופצות הקשורות גמול על ידי התוויית טכניקת immunohistological אמינה באמצעות הפעלת C-FOS הסלולר למדוד לשינוים סימולטניים מסלולי דופאמין ואתרי מסוף לאחר בליעת רומן של שומן וסוכר בחולדות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
זיהוי סימולטני של הפעלת ג-Fos מאתרים זכו דופמין Mesolimbic ו Mesocortical בעקבות סוכר נאיבי בליעת שומן אצל חולדות
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחקר זה משתמש הפעלת C-FOS הסלולר להעריך השפעות של בליעת רומן של שומן וסוכר על הדופמין במוח (DA) מסלולים בחולדות. קשר הפוך בין צריכת סוכרים והשומנים מתווכות על ידי האטרקציות המולדות שלהם, כמו גם העדפות לומדים. דופמין במוח, במיוחד-הלימבית טווה ותחזיות-מוחיות טווות מאזור tegmental הגחון (VTA), היה מעורב בשתי תגובות שלא נלמדו ולומדים אלה. הרעיון של רשתות מוח להפיץ, שבו מספר אתרים ומערכות משדר / פפטיד אינטראקציה, הוצע לתווך צריכת מזון טעימה, אבל יש ראיות מוגבלות הוכחת פעולות כאלה באופן אמפירי. לפיכך, צריכת סוכר מעוררת שחרור ועליות DA C-FOS דמוי immunoreactivity (FLI) מאזורי הקרנה פרטיים VTA DA כולל הגרעין הנסמך (NAC), האמיגדלה (איימי) המדיאלי קליפת המוח הקדם חזיתית (mPFC) וכן בסטריאטום הגבי. יתר על כן, הממשל המרכזי של אנטגוניסטים לקולטן DA סלקטיבית לתוך האתר אלהזה להפחית רכישת ביטוי דיפרנציאלי של העדפות טעם מותנות שהושרו על ידי סוכרים או שומנים. גישה אחת שלפיו אפשר לקבוע אם האתרים הללו תקשרו כרשת מוח מופצת בתגובת סוכר או צריכת שומן יהיו בו זמנית להעריך אם VTA ואזורי הקרנת DA mesotelencephalic העיקריים (prelimbic ו mPFC, ליבת פגז infralimbic של NAC, basolateral והמרכזי-cortico-המדיאלי איימי) וכן בסטריאטום הגבה יציג מתואם הפעלת FLI סימולטני לאחר אוראלית, צריכה מותנית של שמן תירס (3.5%), גלוקוז (8%), פרוקטוז (8%) ו סכרין (0.2 %) פתרונות. גישה זו היא צעד ראשון מוצלח בזיהוי הכדאיות של שימוש הפעלת C-FOS הסלולר בו זמנית על פני אתרי מוח רלוונטיים ללמוד למידה הקשורה גמול ב בליעה של מזון טעים במכרסמים.
מבוא
דופמין במוח (DA) היה מעורב בתגובות מרכזיות צריכת סוכרים טעימים דרך מוצע נהנתן 1,2, מאמץ הקשורות 3 והרגל מבוסס 4,5 מנגנוני פעולה. מסלול DA העיקרי מעורב תופעות אלה מקורו באזור tegmental הגחון (VTA), ופרויקטים אל nucleus accumbens (NAC) הליבה פגז, האמיגדלה basolateral והמרכזי-cortico-המדיאלי (איימי), ואת prelimbic המדיאלי infralimbic קליפת המוח הקדם חזיתית (mPFC) (ראה סקירות 6,7). VTA היה מעורב צריכת סוכרוז 8,9, ושחרור DA הוא ציין צריכת הסוכר הבא NAC 10-15, איימי 16,17 ו mPFC 18-20. צריך שומן גם מגרה DA NAC לשחרר 21, ועוד אז....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
פרוטוקולי ניסוי אושרו על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדיים השתמש המאשר כי כל הנושאים והנהלים עומדים ה- National Institutes of מדריך בריאות לטיפול ושימוש בחי מעבדה.
1. נושאים
- זכר רכישה ו / או גזע חולדות Sprague-Dawley (260 - 300 גרם).
- חולדות בית בנפרד בכלובים מחוט. לשמור אותם על אור hr 00:12 / חושך מחזור עם צ'או החולדה כרצונך מים זמין.
- הקצאת גודל מדגם מתאים (למשל, n ≈ 6....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כל תוצאות הנציג המתואר להלן פורסמו בעבר 69, והם מחדש המוצגים כאן כדי לתמוך "הוכחה של מושג" ב המציין את האפקטיביות של הטכניקה.
צריכת פתרון
הבדלים משמעותיים צריכת סוכרזית הבסיס נצפו במהלך ארבעת הימים הראשונים עבור כל בעלי החיים (F (3,108) = 57.27, p <0.001) עם צריכת (יום 1: 1.3 (± 0.2) מ"ל; יום 2: .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מטרת המחקר הייתה לקבוע אם המקור (VTA) ומטרות הקרנת המוח קדמיות (NAC, איימי, mPFC) של נוירונים גמול הקשורות DA הופעלו בו זמנית לאחר בליעת רומן של שומן וסוכר בחולדות באמצעות טכניקת הסלולר C-FOS . המחקר הנוכחי הוא תיאור מפורט של הפרוטוקולים של מחקר שפורסם בעבר 69. זה היה שיערו כי VTA, אזורי השלכה העיקרי שלה אל prelimbic ו infralimbic mPFC, הליבה פגז של NAC ואת basolateral ואיימי מרכזי-cortico-המדיאלי, וכן בסטריאטום הגבי תפעל כרשת המוח מופץ 24 -27, ולהציג מתואם F.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
יש המחברים שום אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
תודה לדיאנה איקזה-Culaki, Cristal סמפסון Theologia Karagiorgis על העבודה הקשה שלהם על הפרויקט הזה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>ציוד | |||
| Sprague-Dawley חולדות | צ'ארלס ריבר מעבדות | CD-1 | |
| כלובי רשת תיל | מוצרי מעבדה, Seaford, DE | 30-Cage rack | |
| Rhow Chow | Nutrition International | 5001 | |
| Taut Metal Spring | Lab Products, Seaford, DE | n/a | |
| משקל עכברוש | Fisher Scientific Company | n/a | |
| Nalgene Centrifuge | Tubes Lab Products, Seaford, DE | 10-0501 | |
| פקק גומי | , Seaford, DE | n/a | |
| Metal Sippers | Lab Products, Seaford, DE | n/a | |
| סכרין | Sigma Chemical Co | 82385-42-0 | |
| Kool-Aid, דובדבן | Kool-Aid | מסחרי | |
| Kool-Aid, ענבים | Kool-Aid | מסחרי | |
| פרוקטוז | Sigma Chemical Co | F0127 | |
| גלוקוז | סיגמא כימיקל Co | G8270 | |
| שמן תירס | Mazzola | מסחרי | |
| קסנטן גאם | סיגמא כימיקל Co | 11138-66-2 | |
| מיקרוטום הזזה | Microm International | n/a | |
| Neurolucida Camera | MBF Bioscience | יישום תוכנה שקופיות | |
| מצופות ג'לטין Fisher | Scientific Company | 12-550-343 | |
| כיסוי זכוכית | Fisher Scientific Company | 12-545-M | |
| מברשות ניילון זהב | Loew-Cornell | 2037 | |
| סייבל שיער טבעי | לואו-קורנל | 2022 | |
| 24 צלחות באר | פישר סיינטיפיק | 3527 | |
| 6 צלחות באר | פישר סיינטיפיק | 3506 | |
| 1 ליטר בקבוקי פיירקס | פישר סיינטיפיק | 1395-1L | |
| הכנסת רקמות (מסננת רקמות) | פישר סיינטיפיק | 7200214 | |
| פיפטות נשר | World Precision Instruments | E10 עבור 1-10μ l | |
| פיפטות נשר | World Precision Instruments | E100 עבור 20-100μ l | |
| פיפטות נשר | World Precision Instruments | E200 עבור 50-200μ l | |
| פיפטות נשר | World Precision | Instruments E1000 עבור 100-1000μ l | |
| פיפטות נשר | World Precision Instruments | E5000 עבור 1000-5000μ l | |
| טיפים אוניברסליים .1-10 ו-#956; l | מכשירי דיוק עולמיים | 500192 | |
| טיפים אוניברסליים 5-200 ו#956; l | מכשירי דיוק עולמיים | 500194 | |
| טיפים אוניברסליים 500-5,000 & #956; l | World Precision Instruments | 500198 | |
| להב Vibroslice 100 | World Precision Instruments | BLADE | |
| DPX הרכבה בינונית | מיקרוסקופ אלקטרונים | 13510 | |
| צינורות צנטריפוגה 15 מ"ל | Biologix Research Co. | 10-0501 | |
| קופסאות שקופיות | Biologix Research Co. | 41-6100 | |
| שייקר אורביטלי | תאגיד מאדל | ZD-9556 | |
| סירות שקילה | פישר סיינטיפיק | 02-202-100 | |
| 5 מ"ל פיפטות חד פעמיות | פישר סיינטיפיק | 13-711-5AM | |
| סטריאו חוקר תוכנה | מיקרו בהיר שדה | יישום | |
| שם | חברה | Catalog number | Comments |
| <חזק>ריאגנטים | |||
| פרפורמלדהיד גרגירי | פישר סיינטיפיק | 19210 | |
| NaCl | Fisher Scientific | S271-1 | |
| נתרן פופט מונוביסיק | פישר סיינטיפיק | S468-500 | |
| נתרן פוספט | דיפאזי פישר מדעי | BP332-500 | |
| מימן מי חמצן | פישר סיינטיפיק | H324-500 | |
| SafeClear II | פישר סיינטיפיק | 23-044-192 | |
| מתנול | פישר סיינטיפיק | A412-1 | |
| וקטור | סרום עיזים רגיל | S-1000 | |
| ביוטיניל אנטי ארנב IgG (H+L) | וקטור | BA-1000 | |
| ABC ערכת פרוקסידאז וקטור סטנדרטי | PK-4000 | ||
| אנטי-cFos (Ab-5) ארנב | EMD chem/Cal Biochem | PC38 | |
| Triton X 100 | SigmaAldrich | X-100 | |
| 3,3 'diaminobenzidine tetra hydrochloride | SigmaAldrich | D5905 | |
| נתרן הידרוקסיד | SigmaAldrich | 5881 | |
| TH ראשוני אנטי גוף | EMD Millipore | AB152 | |
| Euthosol | Virbac AH |
מקורות
- Koob, G. F. Neural mechanisms of drug reinforcement. Ann. N.Y. Acad. Sci. 654, 171-191 (1992).
- Wise, R. A. Role of brain dopamine in food reward. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 361, 1149-1158 (2006).
- Salamone, J. D., Correa, M.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
