הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הדור של גזע תאים מושרה-פלוריפוטנטיים שימוש פיברובלסטים דמויי Synoviocytes מבודדת מן מפרידים של בחולי דלקת מפרקים שגרונית

9.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/54072

⸱

16 באוקטובר 2016

 ,  ,  , 
1CiSTEM Laboratory, Convergent Research Consortium for Immunologic Disease, Division of Rheumatology, Seoul St. Mary's Hospital, Republic of Korea, 2Division of Rheumatology, Department of Internal Medicine, Seoul St. Mary's Hospital, Institute of Medical Science, Republic of Korea, 3College of Medicine, The Catholic University of Korea, Republic of Korea

במאמר זה

סיכום

כאן אנו מתארים פרוטוקול להפקת תאי גזע פלוריפוטנטיים נגרם אדם מן synoviocytes חולה נגזרת כמו-פיברובלסטים, באמצעות מערכת lentiviral ללא תאים מזינים.

תקציר

תאי סומטיים בוגרים יכולים להיות הפוכים לתוך גזע פלוריפוטנטיים דמוי תא מדינה באמצעות סט של גורמי תכנות מחדש מוגדר. מחקרים רבים יצרו תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs) סוגי תאים שונים סומטיים ידי transducing ארבעה גורמי שעתוק יאמאנאקה: Oct4, Sox2, Klf4 ו- c-Myc. המחקר של iPSCs נשאר בחוד החנית של מחקר ביולוגי וקליני. בפרט, iPSCs המטופל ספציפי יכול לשמש ככלי חלוצים למחקרי של pathobiology מחלה, מאז iPSCs יכול להיגרם מן הרקמה של כל אדם. דלקת מפרקים שגרונית (RA) היא מחלה דלקתית כרונית, אשר סווגו על ידי הרס הסחוס ומבנה העצם במפרק. היפרפלזיה הסינוביאלי הוא אחד הסיבות העיקריות או סימפטומים שיובילו לתוצאות אלה ב- RA. Synoviocytes פיברובלסטים דמויי (FLSs) הם התאים המרכיבים העיקריים הסינוביום hyperplastic. FLSs במפרק להתרבות ללא הגבלה, בסופו של דבר פולש cartil סמוךגיל ועצמות. נכון לעכשיו, synovium hyperplastic ניתן להסיר רק על ידי הליך כירורגי. הסינוביום שהוסר משמש למחקר RA כחומר המשקף את המצב הדלקתי של המפרק. כשחקן מרכזי בפתוגנזה של RA, FLSs יכול לשמש כחומר ליצור ולחקור את iPSCs של חולי RA. במחקר זה, השתמשנו FLSs של חולה RA כדי ליצור iPSCs. באמצעות מערכת lentiviral, גילינו כי FLSs יכול ליצור iPSC המטופל הספציפי RA. IPSCs המופק FLSs ניתן להשתמש כדי להמשיך ככלי ללמוד בפתופיזיולוגיה של RA בעתיד.

מבוא

תאי גזע פלוריפוטנטיים הם הפלטפורמה של הדור הבא בתחומים קליניים וביולוגיים שונים. הם כולים מבטיחים כי ניתן להשתמש ב דוגמנות מחלה, הקרנת סמים, וטיפול רפואי רגנרטיבית. אדם תאי גזע עוברי (hESCs) שמשו בעיקר כדי ללמוד ולהבין תאים פלוריפוטנטיים. עם זאת, מבודד על ידי הרס של הבלסטוציסט האנושי, hESCs המשויכים מספר שיקולים אתיים. בשנת 2007, ד"ר שיניה יאמאנאקה וצוות הפכו את תהליך תכנות תא ופתחו תאי גזע תאי סומטיים אדם בוגרי 1,2. לכן, בניגוד hESCs, נגרמת pluripotent בתאי גזע (iPSCs) ניתן להפיק מן התאים הסומטיים בוגרים, הימנעות המכשולים המוסריים.

בדרך כלל, iPSCs מופקים על ידי משלוח של ארבעה גנים אקסוגניים: Oct4, Sox2, Klf4, ו- c-Myc. גורמי יאמאנאקה אלה מועברים במקור באמצעות מערכות lentiviral ו retroviral. IPSCs הראשון נגזרו ג סומטיים העכבראמות 3. לאחר מכן, הטכניקה יושמה כדי fibroblasts עורי האנושי 1,2. מחקרים מאוחרים יותר שנוצרו iPSCs בהצלחה ממקורות שונים, כגון שנתן 4, דם 5,6, קרטינוציטים 7, סוגי תאים כמה אחרים. עם זאת, ישנם כמה תאים סומטיים שלא היה בשימוש תכנות מחדש, והקרנת יכולות תכנות מחדש של תאים מסוגים שונים ברקמות ספציפיות במצב מחלה, עדיין נדרש.

דלקת מפרקים שגרונית (RA) היא מחלה שיכולה לפגוע בכל המפרקים להוביל מחלות אוטואימוניות באיברים אחרים. RA המשפיעה על כ -1% מהמבוגרים בעולם המפותח. זוהי מחלה די נפוצה שכיחותה גדלה מידי שנת 8. עם זאת, דלקת מפרקים שגרונית היא קשה לזהות בשלבים מוקדמים oncebone הרס מתרחשת אין טיפול שיכול לשחזר את הנזק. יתר על כן, יעילות תרופה שונה מחולה לחולה, וזה קשה לחזות את החובשine כי נדרש. לכן, הפיתוח של שיטת סמי הקרנה יש צורך, ואת חומר תא זה יכול לשקף את התנאים של RA נדרש.

Synoviocytes פיברובלסטים דמויים (FLSs) מהווה השתתף הסלולר פעיל בפתוגנזה של 9,10 RA. FLSs להתקיים רירית intimal הסינוביאלי בין קופסית מפרק ואת החלל, אשר גם הוא המכונה הסינוביום. על ידי תמיכה במבנה המשותף ומתן מזיני הסחוס שמסביב, FLSs בדרך כלל לשחק תפקיד מכריע בתפקוד ותחזוקה משותפים. עם זאת, FLSs ב- RA יש פנוטיפ פולשני. יש RA FLSs פנוטיפ סרטן דמוי, בסופו של דבר להרוס את העצם שמסביב ב -10 התפשטות אינסופית. עם מאפיין ייחודי זה, יכול לשמש FLSs כחומר מבטיח שיכול לשקף את pathobiology של RA. עם זאת, תאים אלו הם לעתים נדירות מיוצרים, ואת פנוטיפים התא לשנות כמו התאים לעבור כמה קטעים במבחנה תנאים. לכן, זה יכול להיות מסובך להשתמש RA FLSs ככלי שיכול לייצג את מצבו של החולה.

באופן תיאורטי, iPSCs החולה נגזר RA (RA-iPSCs) יכול להיות כלי אידיאלי עבור הקרנת סמים ומחקר נוסף. יצר iPSCs יכולת התחדשות עצמית והוא יכול להישמר והרחיב במבחנה. עם pluripotency, תאים אלה יכולים להיות מובחנים לתוך שושלות הכונדרוציטים ו osteocyte בוגרות, אשר יכול לתרום חומר תא של מחקרים ספציפיים ב- RA ומחלות הקשורות עצם אחרים 11.

במחקר זה, אנו מדגימים כיצד לבודד להרחיב FLSs מתוך synovium הוסר בניתוח, וכיצד ליצור RA-iPSCs מ FLSs באמצעות lentiviruses המכיל גורמים יאמאנאקה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

משפט ואתיקה: זה פרוטוקול מחקר אושר על ידי דירקטוריון הסקירה המוסדי של האוניברסיטה הקתולית של קוריאה (KC12TISI0861).

1. בידוד Synoviocyte ורחב

  1. בידוד Synoviocyte
    1. לעקר שני זוגות מספריים כירורגיות וזוג אחד של מלקחיים.
    2. העברת רקמה סינוביאלי לצלחת 100 מ"מ ולשטוף עם 5 מ"ל של בופר פוספט (PBS) המכיל 1% פניצילין / סטרפטומיצין.
    3. חותך את שאריות שומן רקמות ועצמות הצהבהבות. העברת הרקמה הגזוזה באר של צלחת 6-היטב ומוסיף 5 מיליליטר של המדיום של הנשר השונה של Dulbecco (DMEM) עם 20% בסרום שור עוברי (FBS).
    4. קוצץ את הרקמות עם המספריים עד החתיכות קטנות מספיק כדי לחדור פיפטה חד פעמי.
    5. מעבירים את התקשורת המכיל רקמות צינור חרוטי 50 מ"ל. קציר את החומר הנותר על ידי הוספת 5 מ"ל של DMEM עם 20% FBS לצלחת 6-היטב ולאחר מכן להעביר את הצינור.
    6. collagenase להפשיר על הקרח. להוסיף collagenase לריכוז סופי של 0.01% ו לאטום את הצינור עם parafilm. דגירה באמבט מים ב 37 ° C עם רעד במשך 4 שעות.
    7. לאחר דגירה, למלא את הצינור עם DMEM עם 20% FBS, עד הנפח הכולל הוא 50 מ"ל ו צנטריפוגות ב XG 300, RT במשך 10 דקות.
    8. הסר את supernatant מבלי להפריע גלולה ולהוסיף 40 מ"ל של התקשורת כדי resuspend גלולה.
    9. חזור על שלבי 1.1.10-1.1.11.
    10. Resuspend גלולה ב 25 מ"ל של DMEM עם 20% FBS ולחכות גושים גדולים של רקמה לשקוע לקרקעית.
    11. מעבירים את supernatant לצלחת 100 מ"מ ו לדגור על 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2 עבור 14 ימי.
  2. תחזוקת Synoviocyte ורחבה
    1. מחק את התקשורת בשימוש מהצלחת לשטוף את התאים עם 5 מ"ל של PBS.
    2. הוסף 1 מ"ל PBS / 1 mM EDTA ו לדגור על 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2 למשך 2 דקות.
    3. הקש על צלחת בעדינות transfer התאים צינור חרוטי 15 מ"ל. צנטריפוגה התאים ב 250 XG, RT במשך 2 דקות.
    4. הסר את supernatant מבלי להפריע גלולה ו resuspend גלולה ב 30 מ"ל של DMEM עם 20% FBS.
    5. להעביר את התאים 3 x 100 מנות מ"מ, מבלי לעזוב כל חומר שאריות גלוי.
    6. החלף את המדיה עם תקשורת טריה כל 3 ד. פיצול התאים ב confluency 80% באמצעות 1 מ"ל PBS / 1 mM EDTA. שמור עד חלוף 3 לפני השימוש. מחלקים כל צלחת של תאים לתוך 3 מנות בכל פיצול.
      הערה: לאחר שהגיע מעבר 3, תאים שאינם הולכים לשמש מיד אפשר להקפיא.

2. FLSs Reprogramming שימוש Lentiviruses קידוד גורמים יאמאנאקה

  1. תמרה (D0)
    1. זרע 3 × 10 4 תאים לכל גם צלחת 6-גם בתקשורת צמיחה (500 מ"ל של DMEM בתוספת 10% FBS ו -1% פניצילין / סטרפטומיצין). דגירה התאים O / N ב 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO2.
    2. למחרת, להסיר בקבוקון אחד של lentivirus המכיל 4 יאמאנאקה גורמים: Oct4, Klf4, Sox2 ו- c-Myc מהמקפיא להפשיר ב 4 מעלות צלזיוס. הערה: Lentivirus הופק על ידי ההליך המתואר במחקר הקודם שלנו 11.
    3. בעוד להפשרת וירוס, לשנות את התקשורת למדיה צמיחה FLS (20% FBS בתוספת אנטיביוטיקה DMEM) המכיל 10 מיקרוגרם / מ"ל ​​ברומיד hexadimethrine ו -50 מיקרוגרם / מ"ל ​​חומצה אסקורבית.
    4. לאחר שינוי התקשורת, להוסיף 30 μl של lentivirus לתאים ומערבבים בעדינות. כדי לשפר את הזיהום, בצנטריפוגה הצלחת ב -680 XG, 35 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.
    5. לאחר צנטריפוגה, דגירה התאים ב 37 מעלות צלזיוס ב 5% CO 2.
  2. תחזוקה עד Reprogramming גלויה
    1. במשך 3 ימים, להחליף את התקשורת יומית עם תקשורת צמיחת FLS המכילה בוטיראט 0.1 מ"מ נתרן ו -50 מיקרוגרם / מיליליטר חומצה אסקורבית.
    2. למחרת, להחליף את התקשורת עם תערובת של תקשורת צמיחת FLS והתקשורת iPSC (1: 1 יחס) המכיל 0.1 מ"מ בוטיראט נתרן ו -50 מיקרוגרם / מ"ל ​​חומצה אסקורבית.
      הערה: מרכיבי תקשורת iPSC ניתנים ברשימת חומרים / ציוד.
  3. תאי פיצול עבור גיבוש קולוני
    1. כן 6-גם צלחת vitronectin המצופה.
      1. הוסף 60 μl vitronectin עד 6 מ"ל PBS ללא Ca 2 + ו Mg 2+. שים 2 מ"ל של התערובת לתוך כל בארות דגירה RT לפחות שעה 1. הערה: ריכוז העבודה של vitronectin הוא 5 מיקרוגרם / מ"ל.
    2. ביום D5, לשטוף את התאים עם PBS.
    3. הוסף 1 מ"ל PBS / 1 mM EDTA כדי לנתק את התאים ו לדגור על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 למשך 2 דקות.
    4. קציר התאים צנטריפוגות ב 250 XG, RT במשך 2 דקות.
    5. פיצול התאים ב 3 יחסים שונים (1: 3, 1: 6 ו -1: 9) על מנת להשיג confluencies השונה. להוסיף 900 ​​μl של התקשורת גלולה התא גלולה. הוספת 300, 150, ו -100 μl של תערובת תאים לכל גם 6-צלחת גם להשיג יחס של 1: 3, 1: 6 ו -1: 9, בהתאמה.
    6. החלף את המדיה יומית עם תקשורת iPSC עד מושבות להופיע. מושבות תופענה לאחר כ D18. הערה: בשלב זה, מושבות iPSC להתקיים עם FLSs שאינם לתכנות מחדש.
  4. קטיף קולוני
    1. הכינו צלחת 48-היטב מצופה vitronectin על ידי הוספת 500 μl vitronectin על בארות, דגירה ב RT לפחות שעה 1.
    2. מניחים את המיקרוסקופ על ספסל נקי, ולהסיר את צלחת 6-היטב מן החממה.
    3. הסר את הפתרון vitronectin מהצלחת 48-היטב ולהוסיף 500 מדיה iPSC μl בתוספת 10mm Rho הקשורים, המכיל פרוטאין קינאז-סליל מפותל (ROCK) מעכב.
    4. בעזרת קצה פיפטה 10p, לחתוך סביב המושבה. מעבירים את המושבה הרים כדי היטב אחד של הצלחת 48-היטב.
    5. לאחר בחירת מושבות כמה, דגירה התאים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2.
    6. לשמור על התאים עד ההתנחלויות הן Eno גדולאיכס להעברה. הערה: בדרך כלל אנחנו נשפכים התאים כאשר המושבה יוצאת של השדה הגלוי של המיקרוסקופ, כאשר צפו בהגדלת 100X.

3. Immunofluorescence מכתים

  1. תא הכנה
    1. מניחים כוס כיסוי סטרילי 18 מ"מ לתוך צלחת 12-היטב.
    2. הוסף 1 מ"ל של PBS לצנן ולשטוף את מכסה זכוכית.
    3. החלף עם 1 מ"ל של פתרון 10 מיקרוגרם / מ"ל ​​vitronectin.
    4. דגירה את הצלחת על RT במשך שעה 1 לפחות.
    5. מחק את הפתרון vitronectin ו iPSCs צלחת צלחת 12-היטב מצופה vitronectin והתרבות למשך 7 ימים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, לשנות את התקשורת מדי יום.
  2. מכתים תא
    1. מחק את התקשורת והתרבות לשטוף את התאים עם PBS פעם.
    2. תקן את התאים paraformaldehyde 0.4% (PFA) במשך 30 דקות ב RT.
    3. Permeabilize את התאים עם 0.1% Triton X-100 במשך 5 דקות ב RT.
    4. הסר את permeabilizationפתרון ולחסום עם PBS המכיל 2% אלבומין בסרום שור (BSA) למשך 30 דקות ב RT.
    5. לדלל את הנוגדנים PBS המכיל BSA 2% לפי טבלה 1. דגירה התאים עם נוגדנים ראשוניים עבור שעה 2 ב RT.
    6. מוסיפים את נוגדנים משני (בדילול 1: 200) ו דגירה התאים במשך שעה 1 ב RT, הימנעות אור.
    7. פנקו את התאים עם 1 μl / מ"ל ​​DAPI במשך 10 דקות.
    8. מניחים את מכסה זכוכית על גבי זכוכית שקופית עם antifade מגיב לדגור על RT למשך 24 שעות, הימנעות אור.
    9. ודא ביטוי באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

4. תגובת שרשרת פולימראז בזמן אמת (RT-PCR)

  1. חלץ mRNA מן התא גלולה בשיטת החילוץ thiocyanate-פנול, כלורופורם guanidinium 11.
  2. להגביר cDNA מ 2 מיקרוגרם של ה- mRNA הכולל שימוש שעתוק לאחור 11.
  3. מערבבים את הרכיבים הנדרשים עבור ה- PCR באמצעות 2 μl של TEM cDNAצלחת 11.
  4. בצע RT-PCR ולאמת את התוצאות על ידי ג'ל אלקטרופורזה 11.

5. אלקליין phosphatase (AP) מכתים

  1. IPSCs תרבות 5-7 ימים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 לפני מכתים.
  2. לשאוב התקשורת לתקן את התאים עם 4% PFA דקות 1.
  3. מחק את מקבע ולשטוף את התאים עם חיץ שטיפת 1X.
  4. הכן את ריאגנטים עבור מכתים AP. מערבבים את ריאגנטים היחס הבאים: Fast האדום ויולט: Naphthol פתרון פוספט AS-BI: מים = 2: 1: 1.
  5. דגירת התאים עם הפתרון המכתים ב RT במשך 15 דקות, הימנעות אור.
  6. מחק את הפתרון מכתים ולשטוף את התאים עם חיץ לשטוף.
  7. לכסות את התאים עם PBS כדי למנוע התייבשות ולוודא ביטוי באמצעות מיקרוסקופ שדה בהיר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

במחקר זה, אנו מתארים פרוטוקול ליצור iPSCs מ FLSs באמצעות מערכת lentiviral. איור 1 א מציג תוכנית פשוטה של פרוטוקול בידוד FLS. בעקבות הסרה כירורגית של synovium, הרקמה היה קצוץ לחתיכות קטנות באמצעות מספריים כירורגיות. Collagenase התווסף לבודד את התאים מן הגושים של רקמות. תאי הודגרו במשך 14 ימים לפני עיבוד נוסף. 1B האיור מראה את המורפולוגיה של FLSs המבודד. תאים נשמרו למשך 3 קטעים לפני השימוש. FLSs לשתף...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

לפני גילוי iPSCs, מדענים משמשים בעיקר ESCs ללמוד ביולוגית גזע תא שושלות תאים אחרות באמצעות בידול. עם זאת, ESCs מקורן המסה הפנימית של הבלסטוציסט, המהווה העובר בשלב מוקדם. כדי לבודד ESCs, הרס של הבלסטוציסט הוא בלתי נמנע, העלאת סוגיות אתיות כי ניתן להתגבר. יתר על כן, למרות שיש ESCs מאפייני stemness ו pluripotency, הם לא יכולים לקבל מיחידים הם לפעמים לא כלי אידיאלי לניתוח אישי והקרנת מחלה.

בשנת 2007, טקהאשי et al...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית המחקר הממומנת על ידי המרכזים לבקרת מחלות ומניעתן בקוריאה (HI13D2188).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צלחת 100 מ"מTPP93100
צלחת 6 בארותTPP92006
50 מ"ל צינור קורניקלSPL50050
15 מ"ל צינור קורניקלSPL50015
10 מ"ל פיפטה חד פעמיתפלקון7551
5 מ"ל פיפטה חד פעמיתפלקון7543
צלחת 12 בארותTPP92012
<חזק>FLS חומרי בידוד
מספריים
מלקחיים
DPBSLife Technologies14190-144
DMEMLife Technologies11995-073
פניצילין סטרפטומיציןSigma AldrichP4333
סרום בקר עוברי (FBS)Life Technologies16000-044
קולגנאזסיגמא אולדריץ'C6885-100MG
פרפילםסיגמא אולדריץ'54956
PBS/1 מ"מ EDTALife Technologies12604-039
<חזק>iPSC דור חומרים
DMEMLife Technologies11885
MEM תמיסת חומצות אמינו לא חיוניות (100x)Life Technologies11140-050
β-מרקפטואתנולסיגמא אולדריץ'M3148
פוליברןכימיקוןTR-1003-G
פניצילין סטרפטומיציןלייף טכנולוגיותP4333
סרום בקר עוברי (FBS)Life Technologies16000-044
DPBSLife Technologies14190-144
Lentivirus
DMEM/F12, HEPESLife Technologies11330-057רכיב מדיה iPSC (500 מ"ל)
נתרן ביקרבונטLife Technologies25080-094רכיב מדיה iPSC (Conc.: 543 μ גרם/מ"ל)
נתרן סלניטסיגמא אולדריץ'S5261iPSC מרכיב  (קונקציונלי: 14 ננוגרם/מ"ל)
רכיב מדיה אנושי TransfferinSigma AldrichT3705iPSC (Conc.: 10.7 μ גרם/מ"ל)
רכיב מדיה בסיסי FGF2Peprotech100-18BiPSC  (קונקטיבי: 100 ננוגרם/מ"ל)
Human InsulinLife Technologies12585-014מרכיב מדיה iPSC (Conc.: 20 μ גרם/מ"ל)
TGF ובטא אנושיים; 1רכיב מדיה Peprotech100-21iPSC (כולל: 2 ננוגרם/מ"ל)
חומצה אסקורביתSigma AldrichA8960רכיב מדיה iPSC  (Conc.: 64 μ גרם/מ"ל)
PolybreneChemiconTR-1003
נתרן בוטיראטסיגמא אולדריץ'B5887
VitronectinLife TechnologiesA14700
מעכב ROCKסיגמא אולדריץ'Y0503
<חזק>חומרי בקרת גואליות
18 מ"מ כיסוי זכוכיתמעולהHSU-0111580
4% פרפורמלדיהיד (PFA)טכנולוגיה & חדשנותBPP-9004
Triton X-100BIOSESANG9002-93-1
אלבומין סרום בקר (BSA)Vector LabSP-5050
Anti-SSEA4 נוגדןMilliporeMAB4304
נוגדן Anti-Oct4 SantaCruzSC9081
Anti-TRA-1-60 נוגדןMilliporeMAB4360
נוגדן Anti-Sox2Biolegend630801
Anti-TRA-1-81 נוגדןMilliporeMAB4381
נוגדן Anti-Klf4Abcamab151733
Alexa Fluor 488 נוגדן עז נגד עכבר IgG (H+L) בדיקהמולקולריתA11029
Alexa Fluor 594 נוגדן עז נגד ארנב IgG (H+L)בדיקה מולקולריתA11037
DAPIבדיקה מולקולריתD1306
Prolong זהב נוגד דהייה מגיבInvitrogenP36934
זכוכית שקופיות, מצופהHyun Il Lab-MateHMA-S9914
TrizolInvitrogen15596-018
כלורופורםסיגמא אולדריץ'366919
איזופריפיל אלכוהולMillipore109634
אתנולדוקסן64-17-5
RevertAid ערכת סינתזה cDNA גדיל ראשוןThermo ScientficK1622
i-Taq DNA פולימראזiNtRON BIOTECH25021
UltraPure 10x TBE BufferLife Technologies15581-044
טוען כוכבDyne BioA750
AgaroseSigma-Aldrich9012-36-6
1 kb (+) סמן סולם DNAEnzynomicsDM003
אלקליין פוספטאזMilliporeSCR004
כירורגייםכירורגיים

מקורות

  1. Yu, J., et al. Induced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells. Science. 318 (5858), 1917-1920 (2007).
  2. Takahashi, K., et al. Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors. Cell. 131 (5), 861-872 (2007).
  3. Takahashi, K., Yamanaka, S. Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell. 126 (4), 663-676 (2006).
  4. Zhou, T., et al. Generation of human induced pluripotent stem cells from urine samples. Nat Protoc. 7 (12), 2080-2089 (2012).
  5. Haase, A., et al. Generation of induced pluripotent stem cells from human cord blood. Cell Stem Cell. 5 (4), 434-441 (2009).
  6. Loh, Y. H., et al. Generation of induced pluripotent stem cells from human blood. Blood. 113 (22), 5476-5479 (2009).
  7. Aasen, T., et al. Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes. Nat Biotechnol. 26 (11), 1276-1284 (2008).
  8. Scott, D. L., Wolfe, F., Huizinga, T. W. Rheumatoid arthritis. Lancet. 376 (9746), 1094-1108 (2010).
  9. Chang, S. K., Gu, Z., Brenner, M. B. Fibroblast-like synoviocytes in inflammatory arthritis pathology: the emerging role of cadherin-11. Immunol Rev. 233 (1), 256-266 (2010).
  10. Bartok, B., Firestein, G. S. Fibroblast-like synoviocytes: key effector cells in rheumatoid arthritis. Immunol Rev. 233 (1), 233-255 (2010).
  11. Lee, J., et al. Generation of disease-specific induced pluripotent stem cells from patients with rheumatoid arthritis and osteoarthritis. Arthritis Res Ther. 16 (1), R41(2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

טרנסדוקציה לנטיוויראליתגורמי ימנקהבידוד רקמותתרבית תאיםציפוי ויטרונקטיןברירת מושבותהיווצרות טרטומה
הדור של גזע תאים מושרה-פלוריפוטנטיים שימוש פיברובלסטים דמויי Synoviocytes מבודדת מן מפרידים של בחולי דלקת מפרקים שגרונית
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.